Лимфоциты 49: Общий анализ крови: повышены лимфоциты

Posted on

Содержание

Эффективность инфузии донорских лимфоцитов у пациентов после различных видов аллогенной трансплантации гемопоэтических стволовых клеток

Алло-ТГСК — аллогенная трансплантация гемопоэтических стволовых клеток

БРВ — безрецидивная выживаемость

ГСК — гемопоэтические стволовые клетки

ИДЛ — инфузия донорских лимфоцитов

ОВ — общая выживаемость

оРТПХ — острая реакция трансплантат против хозяина

РТПЛ — реакция трансплантат против лейкоза

ХМЛ — хронический миелолейкоз

хрРТПХ — хроническая реакция трансплантат против хозяина

ХТ — химиотерапия

Аллогенная трансплантация гемопоэтических стволовых клеток (алло-ТГСК) в настоящее время — единственный эффективный метод излечения многих онкологических, гематологических, врожденных и наследственных заболеваний у пациентов различных возрастных групп [1—8].

Рецидив злокачественного заболевания системы крови — наиболее частая причина неэффективности алло-ТГСК, что является предиктором неблагоприятного прогноза независимо от вида трансплантации [9].

Частота возникновения рецидивов заболевания после алло-ТГСК составляет от 24 до 50% в зависимости от нозологии, а также стадии заболевания на момент проведения трансплантации [10—12]. Терапевтические возможности для пациентов с рецидивом после алло-ТГСК до последнего времени были существенно ограничены, что практически служило основанием для их перевода в категорию, подлежащих паллиативному лечению. В настоящее время в качестве терапии рецидива рассматриваются химиотерапия (ХТ), лучевая терапия либо повторная алло-ТГСК, однако данные опции в целом существенно не улучшают общую выживаемость [13—15]. Одним из методов лечения и профилактики рецидивов после алло-ТГСК, позволяющим преодолеть химиорезистентность заболевания, являются инфузии донорских лимфоцитов (ИДЛ). Данный метод применяется с целью индукции реакции трансплантат против лейкоза (РТПЛ), эффективность которой зависит от вида и стадии заболевания и составляет 70—90% у пациентов с хроническим миелолейкозом (ХМЛ), не превышая 10—30% у больных с лимфопролиферативными заболеваниями [16, 17].
Основным осложнением терапии ИДЛ, ограничивающим ее использование, является острая реакция трансплантат против хозяина (оРТПХ), патогенез которой неразрывно связан с РТПЛ. Развитие оРТПХ наблюдается у 30—50% пациентов после ИДЛ, при этом только у 40% из них оРТПХ имеет клинически значимые проявления, у 10% пациентов может стать причиной смерти [11, 18—22]. Ввиду высокой эффективности ИДЛ на начальных этапах развития рецидива актуально применение ИДЛ под контролем мониторинга минимальной остаточной болезни и уровня донорского «химеризма» как критерия полного или неполного приживления трансплантата [23, 24]. С целью усиления эффективности ИДЛ установлена целесообразность применения комбинации ИДЛ с химиотерапией (ХТ), так называемой таргетной терапией, а также рекомбинантными факторами роста (интерлейкин-2, интерферон-α и др.) [16, 25—33]. С целью профилактики оРТПХ в качестве продукта для иммуноадаптивной терапии вместо классического введения ИДЛ разрабатываются методы клеточной селекции субпопуляций лимфоцитов, а также комбинации ИДЛ с иммуносупрессивными препаратами [34, 35].
Ввиду отсутствия стандартов применения ИДЛ с целью уменьшения риска возникновения оРТПХ, а также усиления эффекта РТПЛ в настоящее время осуществляется оптимизация протоколов на основе изучения доз и режимов введения ИДЛ при различных заболеваниях системы крови и видах алло-ТГСК [36—40].

Целью исследования явилась оценка эффективности различных доз, режимов введения донорских лимфоцитов, а также их комбинаций с дополнительной терапией с целью профилактики и лечения рецидивов у пациентов после алло-ТГСК от совместимых по системе HLA неродственных, родственных и гаплоидентичных доноров.

Материалы и методы

В исследование включили 118 пациентов после алло-ТГСК за период 2001—2011 гг. (за исключением 1 пациента, которому алло-ТГСК была проведена в 1995 г.). Работа выполнялась на базе клиники трансплантации костного мозга Санкт-Петербургского государственного медицинского университета им. акад. И.П. Павлова, с 2007 г. — клиники «Институт детской гематологии и трансплантологии им. Р.М. Горбачевой». Демографические характеристики, распределение пациентов в зависимости от диагноза и стадии заболевания представлены в табл. 1.

Ввиду развития раннего рецидива 7 пациентам были выполнены повторные алло-ТГСК от тех же доноров: 3 пациентам с острым лимфобластным лейкозом, 3 — с острым монобластным лейкозом, 1 пациенту с миелодиспластическим синдромом. Таким образом, всего было выполнено 125 алло-ТГСК. Характеристики проведения алло-ТГСК представлены в

табл. 2.

У каждого пациента было от 1 до 4 показаний к ИДЛ (всего 143). Показаниями к ИДЛ являлись резистентное течение основного заболевания после алло-ТГСК (у 40 пациентов), рецидив (у 59), персистирование признаков «минимальной остаточной болезни» (у 16), снижение донорского «химеризма» (у 15). Профилактически ИДЛ применяли при заведомо высоком риске развития рецидива острого лейкоза (у 13 пациентов). В связи с разными показаниями каждому больному было выполнено от 1 до 6 ИДЛ (всего 258). Показания к ИДЛ, сроки проведения терапии и режимы введения представлены в табл. 3.

В виде монотерапии проведено 37 (26%) ИДЛ (23 с профилактической и превентивной целью, 14 с целью терапии рецидива заболевания при небольшом количестве бластов в костном мозге). После ХТ (в периоде аплазии кроветворения), а также в комбинации с рекомбинантными факторами роста (интерлейкин-2, интерферон-α, грануломоноцитарный колониестимулирующий фактор) и так называемыми таргетными препаратами (ингибиторы тирозинкиназы, моноклональные антитела) выполнено 106 (74%) ИДЛ (21 с профилактической и превентивной целью, 85 с целью терапии рецидива или резистентного течения заболевания).

Для анализа полученных данных использовали методы параметрической и непараметрической статистики. Анализ выживаемости проводили по методу Каплан—Майер, используя логранговый критерий для оценки достоверности различий. При оценке результатов тестирования достоверными считали различия при p<0,05. Многофакторный анализ выполняли с помощью метода пошаговой логистической регрессии. Обработку результатов проводили с использованием стандартного пакета статистических программ Excel 10.0, Microsoft, Inc., 2002 и SPSS, version 19, StatSoft, Inc.

Если показание к ИДЛ у больного было единственным, то общую выживаемость (ОВ) оценивали от момента первой ИДЛ в структуре данного показания, если было несколько показаний, то точкой отсчета была дата первой инфузии при последнем показании. Ответом на терапию считали достижение полной или частичной (уменьшение объема опухолевой массы) ремиссии заболевания, увеличение уровня донорского «химеризма» после ИДЛ. В связи с затруднительной оценкой непосредственного ответа при профилактических ИДЛ ответ на терапию оценивали только при ИДЛ, использованных с терапевтической и превентивной целью (n=130).

Период наблюдения за пациентами составил от 2 до 194 мес с момента проведения первой алло-ТГСК и от 16 дней до 102 мес с момента начала терапии ИДЛ.

Пятилетняя ОВ всех 118 пациентов, включенных в исследование, равна 23%.

Оценка непосредственного ответа при профилактических ИДЛ затруднительна, в связи с чем ответ оценивали только после превентивных и терапевтических ИДЛ (n=130). Общее число ответов на терапию ИДЛ достигло 57 (44%), из них полных 45 (35%). Длительность ответа составила от 1 до 68 мес.

В ходе однофакторного анализа выявлена взаимосвязь между источником ГСК, совместимостью по системе HLA донора и реципиента и частотой ответа на ИДЛ. Наибольшее число ответов наблюдалось при использовании ИДЛ от совместимого неродственного донора — 31 (58%; p=0,007) либо от совместимого (родственного и неродственного) донора — 50 (48%; p=0,027), наименьшее — от гаплоидентичного донора — 6 (25%; p=0,043) (рис. 1).Рисунок 1. Взаимосвязь ответа на терапию, типа донора и совместимости по системе HLA.

Совместимость по системе HLA реципиента и донора также достоверно влияла на ОВ пациентов, получивших ИДЛ: 25% — при полной совместимости по системе HLA, 19% — при гаплоидентичности

(рис. 2).Рисунок 2. Трехлетняя ОВ в зависимости от совместимости донора и реципиента по системе HLA.

По итогам многофакторного анализа у пациентов, получивших ИДЛ с терапевтической и превентивной целью, частота ответа на ИДЛ достоверно коррелировала с такими факторами, как совместимый по системе HLA неродственный донор, сроки проведения ИДЛ в период от Д+100 до 1 года, уровень донорского «химеризма» на момент терапии ИДЛ более 90%, начальная доза ИДЛ менее 1·106 CD3+/кг, развитие хронической реакции трансплантат против хозяина (хрРТПХ) после ИДЛ (табл. 4).

Сроки проведения терапии ИДЛ после Д+100 были ассоциированы с более высокой 4-летней ОВ пациентов по сравнению с более ранними сроками: 29 и 18% соответственно (р=0,012) (рис. 3, а).Рисунок 3. Четырехлетняя ОВ пациентов, получивших ИДЛ, в зависимости от сроков проведения терапии (а). На ОВ также достоверно влиял уровень донорского «химеризма» на момент проведения ИДЛ. ОВ пациентов с уровнем донорского «химеризма» более 50% составила 25%, менее 50% — 19% (р=0,007)

(рис. 3, б).Рисунок 3. Четырехлетняя ОВ пациентов, получивших ИДЛ, в зависимости от уровня донорского «химеризма» на момент ИДЛ (б).

Использование ИДЛ до клинического проявления рецидива (с профилактической и превентивной целью) по сравнению с терапевтическим использованием достоверно повышало ОВ, которая составила 46 и 16% соответственно (р=0,000) (рис. 3, в).Рисунок 3. Четырехлетняя ОВ пациентов, получивших ИДЛ, в зависимости от показаний к ИДЛ (в).

Развитие оРТПХ после ИДЛ отмечено у 36 (25%) пациентов, оРТПХ I—II степени — у 21 (15%), оРТПХ III—IV степени — у 15 (10%). При этом частота развития оРТПХ II—IV степени коррелировала с совместимостью по системе HLA донора и реципиента и составила 17,5% (n=20) после ИДЛ от совместимых по системе HLA родственных и неродственных доноров (n=114), 37% (n=10) — от частично совместимых неродственных или гаплоидентичных родственных доноров (n=29; р=0,07).

ХрРТПХ после ИДЛ наблюдали у 30 (21%) больных, из них локальную хрРТПХ у 9 (6%), распространенную хрРПТХ у 21 (15%).

Развитие хрРТПХ после ИДЛ достоверно влияло на ОВ и безрецидивную выживаемость (БРВ) всех пациентов. Четырехлетняя ОВ всех пациентов и 2-летняя БРВ пациентов, ответивших на ИДЛ и получивших профилактические ИДЛ, при развитии хрРТПХ после ИДЛ составили 64 и 53% соответственно (рис. 4).Рисунок 4. ОВ (а) пациентов в зависимости от развития хрРТПХ после ИДЛ.Рисунок 4. БРВ (б) пациентов в зависимости от развития хрРТПХ после ИДЛ.

Умерли 79 (67%) пациентов, причиной смерти у 63 (80%) послужило прогрессирование основного заболевания, у 8 (10%) — оРТПХ, у 6 (8%) — инфекция, у 2 (2%) — иные причины. На момент анализа живы 39 (33%) пациентов, 25 (64%) — в ремиссии заболевания (табл. 5).

Таким образом, использование ИДЛ оказалось эффективным в 44% случаев. При проведении ИДЛ от совместимых по системе HLA родственных и неродственных доноров по сравнению с частично совместимыми неродственными и гаплоидентичными донорами наблюдалась большая частота ответов (48%), меньшая частота — при оРТПХ II—IV степени (17,5%), а также более высокая 3-летняя ОВ (25%).

Наибольшая частота ответов наблюдалась после ИДЛ, выполненных в сроки от Д+100 до 1 года (58%), при уровне донорского «химеризма» более 90% (67%), при использовании начальной клеточной дозы менее 1·106 CD3+/кг (53%), а также при развитии хрРТПХ после ИДЛ.

Более высокая ОВ отмечена после ИДЛ от совместимых по системе HLA родственных и неродственных доноров, выполненных с превентивной и профилактической целью (46%), в сроки после Д+100 (29%), при уровне донорского «химеризма» более 50% (25%), при развитии хрРТПХ после ИДЛ (64%).

Использование ИДЛ является эффективным методом профилактики и лечения рецидивов после алло-ТГСК. По данным литературы, несомненное влияние на эффективность терапии ИДЛ оказывают диагноз, стадия заболевания [16, 17], сроки возникновения рецидива (следовательно применения ИДЛ) [41], использование дополнительной терапии, а также развитие хрРТПХ после ИДЛ [16, 42]. Влияние типа донора [43], режима кондиционирования [44], уровня донорского «химеризма» на момент ИДЛ [43], а также клеточной дозы ИДЛ [17, 19] на эффективность терапии является спорным. На частоту развития оРТПХ после ИДЛ влияют такие факторы, как тип донора и совместимость донора и реципиента [43], сроки проведения терапии ИДЛ [19], уровень донорского «химеризма» [45], клеточная доза [37].

По результатам нашего исследования мы не нашли взаимосвязи между частотой ответов и характеристиками пациентов (пол, возраст), диагнозом, характеристиками алло-ТГСК (режим кондиционирования, источник ГСК), а также между проведением той или иной дополнительной терапии. Совместимость донора и реципиента по системе HLA, по нашим данным, существенно влияет на результат использования ИДЛ, показатели ОВ, а также частоту возникновения оРТПХ. Несмотря на сообщения об успешном использовании ИДЛ после гапло-ТГСК [46—48], в нашей группе больных с гаплоидентичным донором ИДЛ проявили наименьшую эффективность. Сопоставимой с данными литературы оказалась значимость сроков проведения терапии, клеточной дозы ИДЛ, а также развития хрРТПХ после ИДЛ.

Уровень донорского «химеризма» на момент проведения ИДЛ оказывает значимое влияние на эффективность терапии. В связи с этим мониторинг «химеризма», а также минимальной остаточной болезни, использование ИДЛ на более ранних этапах, до клинических проявлений рецидива, может улучшить прогноз после алло-ТГСК, особенно у пациентов группы высокого риска.

Перспективными направлениями развития терапии с использованием донорских лимфоцитов являются поиск новых мишеней, генерация специфичных для опухоли лимфоцитов, а также применение в комбинации с ИДЛ препаратов усиливающих иммунный эффект без увеличения риска развития оРТПХ.

Исследование CD3-CD8+ лимфоцитов

АНМО «Ставропольский краевой клинический консультативно-диагностический центр»:

355017, г. Ставрополь, ул. Ленина 304

(8652) 951-951, (8652) 35-61-49 (факс)

(8652) 951-951, (8652) 31-51-51 (справочная служба)

Посмотреть подробнее

Обособленное подразделение «Диагностический центр на Западном обходе»:

355029 г. Ставрополь, ул. Западный обход, 64

(8652) 951-951, (8652) 31-51-51 (контактный телефон)

(8652) 31-68-89 (факс)

Посмотреть подробнее

Клиника семейного врача:

355017 г. Ставрополь, пр. К. Маркса, 110 (за ЦУМом)

(8652) 951-951, (8652) 31-51-51 (контактный телефон)

(8652) 31-50-60 (регистратура)

Посмотреть подробнее

Невинномысский филиал:

357107, г. Невинномысск, ул. Низяева 1

(86554) 95-777, 96-127, 95-873 (регистратура)

Посмотреть подробнее

Обособленное структурное подразделение в г. Черкесске :

369000, г. Черкесск, пр-т. Ленина, 85А

+7-988-700-81-06 (контактные телефоны)

Посмотреть подробнее

Обособленное структурное подразделение в г. Элисте :

358000, г. Элиста, ул. Республиканская, 47

8(989) 735-42-07 (контактные телефоны)

Посмотреть подробнее

ЗАО «Краевой клинический диагностический центр»:

355017 г. Ставрополь, ул. Ленина 304

(8652) 951-951, (8652) 35-61-49 (факс)

(8652) 951-951, (8652) 31-51-51 (справочная служба)

Посмотреть подробнее

Обособленное структурное подразделение на ул. Савченко, 38 корп. 9:

355021, г. Ставрополь, ул. Савченко, 38, корп. 9

8 (8652) 316-847 (контактный телефон)

Посмотреть подробнее

Обособленное структурное подразделение на ул. Чехова, 77 :

355000, г. Ставрополь, ул. Чехова, 77

8(8652) 951-943 (контактный телефон)

Посмотреть подробнее

Обособленное структурное подразделение в г. Михайловске:

358000, г. Михайловск, ул. Ленина, 201 (в новом жилом районе «Акварель»).

8(988) 099-15-55 (контактный телефон)

Посмотреть подробнее

Страница статьи : Медико-социальная экспертиза и реабилитация

Каримова Л.К., Гизатуллина Д.Ф. Ранние признаки воздействия вредных производственных факторов на организм работающих в современных нефтехимических производствах. Гигиена и санитария. 2012; (2): 38-40.

Blanco A., Blanco G. Chapter 26 — Biochemical Bases of Endocrinology (II) Hormones and Other Chemical Intermediates. Medical Biochemistry. 2017; 573-644.

Wen H., Yuan L., Wei C., Zhao Y., Qian Y., Ma P. et al. Effects of combined exposure to formaldehyde and benzene on immune cells in the blood and spleen in Balb/c mice. Environmental Toxicology and Pharmacology. 2016; 45: 265-73.

Гриневич В.В., Волкова О.В., Акмаев И.Г. Нейроиммуноэндокринные взаимодействия в системе: гипоталамус-гипофиз-кора надпочечников при воспалении. Успехи современного естествознания. 2003; (5): 10-4.

Geering B., Stoeckle Ch., Conus S., Hans-Uwe S. Living and dying for inflammation: neutrophils, eosinophils, basophils. Trends in Immunology. 2013; 34 (8): 398-409.

Yang J., Bai W., Niu P., Tian L., Gao A. Aberrant hypomethylated STAT3 was identified as a biomarker of chronic benzene poisoning through integrating DNA methylation and mRNA expression data. Experimental and Molecular Pathology. 2014; 96 (3): 346-53.

Kerzic P.J., Liu W.S., Pan M.T., Fu H., Zhou Y., Schnatter A.R. et al. Analysis of hydroquinone and catechol in peripheral blood of benzene-exposed workers. Chemico-Biological Interactions. 2010; 184 ( 1-2): 182-8.

Кушнерова Н.Ф., Фоменко С.Е., Кушнерова Т.В., Другова Е.С. Влияние ацетона на физиологические и биохимические показатели эритроцитов крыс и их коррекция экстрактом из калины (Viburnum sargentii). Наркология. 2010; (2): 48-54.

Злобина Л.Ю. Шпагина Л.А., Паначева Л.А. Профессионально обусловленные гемопатии и профессиональные заболевания крови. Медицина труда и промышленная экология. 2008; (11): 15-20.

Chen Y., Sun P., Guo X., Gao A. MiR-34a, apromising novel biomarker for benzene toxicity, is involved in cell apoptosis triggered by 1,4-benzoquinone through targeting Bcl-2. Environmental Pollution. 2017; 221: 256-65.

Характер изменений метаболитного профиля плазмы и уровня АТФ лимфоцитов периферической крови у жителей европейского Севера России

УДК 612.017.2 (470.11):[612.112.94:577.124.22] (470.11)

Зубаткина О.В., Зубаткина И.С., Лейхтер С.Н., Попов А.А.

ГБОУ ВПО Северный государственный медицинский университет Минздрава России, г. Архангельск, Российская Федерация;
Международный институт биологических систем имени С. М. Березина, г.Санкт-Петербург, Российская Федерация

Резюме. Поддержание здоровья требует отлаженной работы иммунной системы с нормальным функционированием ее ключевых элементов лимфоцитов, которым для обеспечения своей жизнедеятельности необходимо поступление глюкозы и её утилизация. Проведено определение биохимических показателей плазмы и концентрации АТФ в лимфоцитах периферической крови у 57 волонтеров. Установлен однонаправленный характер изменений уровня АТФ в лимфоцитах и содержания лактата в плазме крови, что обусловлено адаптационной перестройкой метаболических процессов, направленной на активацию гликолиза в клетках. Получена модель, описывающая зависимость энергообеспечения от гликолитической активности.

Ключевые слова: адаптация, метаболиты, гликолиз, АТФ, лимфоциты

ЛИТЕРАТУРА
1. Fox C.J., Hammerman P.S., Thompson C.B. Fuel feeds function: energy metabolism and the T-cell response // Nat. Rev. Immunol. 2005 Vol. 11. P. 844-852.
2. Wang R., Green D.R. Metabolic checkpoints in activated T cells // Nat. Immunol. 2012. Vol. 13. P. 907-915.
3. Jacobs S.R., Michalek R.D., Rathmell J.C. IL-7 is essential for homeostatic control of T cell metabolism in vivo // J. Immunol. 2010. Vol. 184 (7). P. 3461-3469.
4. Jameson S. C. Maintaining the norm: T-cell homeostasis // Nat. Rev. Immunol. 2002. Vol. 2. P. 547-556.
5. Finlay D.K. Regulation of glucose metabolism in T cells: new insight into the role of Phosphoinositide 3-kinases // Front. Immunol. 2012. Vol. 3. Article 247.
6. Hardie D.G. Sensing of energy and nutrients by AMP-activated protein kinase // Am. J. Clin. Nutr. 2011. Vol. 93. P. 891S-896S.
7. Heltemes-Harris L.M., Willette M.J., Vang K.B., Farrar M.A. The role of STAT5 in the development, function, and transformation of B and T lymphocytes // Ann. N.Y. Acad. Sci. 2011. Vol. 1217. P. 18-31.
8. Maclver N.J., Michalek R.D., Rathmell J.C. Metabolic regulation of T lymphocytes // Annu Rev. Immunol. 2013. Vol. 31. P. 259-283.
9. Shau H., Shen D., Golub S.H. The role transferrin in natural killer cell and IL-2 induced cytotoxic cell function // J. Immunol. 1986. Vol. 97. P. 121-139.

Авторская справка
Зубаткина Ольга Владимировна [email protected]
ГБОУ ВПО СГМУ (г.  Архангельск) Минздрава России, доктор биологических наук, профессор, заведующий кафедрой биомедицинской химии.
Российская Федерация 163000, г. Архангельск, Троицкий проспект, д.51.
Зубаткина Ирина Сергеевна [email protected]
ЛДЦ МИБС (г. Санкт-Петербург)
Кандидат биологических наук, медицинский физик.
Российская Федерация 191036, г. Санкт-Петербург 6-я Советская ул., д. 24. E- Лейхтер Светлана Николаевна [email protected]
ГБОУ ВПО СГМУ (г. Архангельск) Минздрава России
Кандидат биологических наук, доцент кафедры биомедицинской химии. Российская Федерация 163000, г. Архангельск, Троицкий проспект, д.51.
Попов Андрей Александрович [email protected]
ГБОУ ВПО СГМУ (г. Архангельск) Минздрава России.
Кандидат биологических наук, доцент, доцент кафедры биомедицинской химии.
Российская Федерация 163000, г. Архангельск, Троицкий проспект, д.51

Т-лимфоциты CD3+CD19-

Референсные значения (вариант нормы):

Т-лимфоциты (CD3+ CD19—), относительное количество-%

Т — лимфоциты(CD3+ CD19—), абсолютное количество-109/л

Параметр Возраст Референсные значения Ед. изм.
Т-лимфоциты (CD3+ CD19—), относительное количество От 0 До 3 мес 53,0 – 84,0 %
От 3 мес до 6 мес 51,0 – 77,0
От 6 мес до 1 года 49,0 – 76,0
От 1 года до 2 лет 53,0 – 75,0
От 2 лет до 6 лет 56,0 – 75,0
От 6 лет до 12 лет 60,0 – 76,0
От 12 лет до 18 лет 56,0 – 84,0
От 18 лет До 50 лет 61,0 – 85,0
Т — лимфоциты (CD3+ CD19—), абсолютное количество От 0 До 3 мес 2,50 – 5,50 109/л
От 3 мес до 6 мес 2,50 – 5,60
От 6 мес до 1 года 1,90 – 5,90
От 1 года до 2 лет 2,10 – 6,20
От 2 лет до 6 лет 1,40 – 3,70
От 6 лет до 12 лет 1,20 – 2,60
От 12 лет до 18 лет 1,00 – 2,20
От 18 лет до 130 лет 0,95 – 2,08

Т-лимфоциты (CD3+ CD19—)

Понижение уровня Повышение уровня
  • Воспалительные процессы
  • Злокачественные новообразования
  • Состояние после травмы, операции
  • Прием цитостатиков
  • Лимфолейкоз
  • Начальный период инфекционного процесса
  • Обострения хронического процесса

Диагностика иммунного статуса — Компас Здоровья

Иммунный статус – совокупность количественных и функциональных показателей, отражающих состояние иммунной системы человека в данный момент времени. Выделяют первичные и вторичные иммунодефициты, аутоиммунные, аллергические и лимфопролиферативные заболевания.

       Иммунограмма представляет собой не один анализ, а большое количество разнообразных лабораторных показателей, которые оцениваются врачом иммунологом и в совокупности они отражают общую реакцию организма на какое-либо воздействие неблагоприятного внешнего фактора, или показывают наличие аутоиммунной патологии, когда система иммунитета противостоит собственным тканям организма (например, при псориатическом или ревматоидном артрите). В результате этого обследования нельзя получить данные о поражении какого-либо отдельного органа, или системы, но расшифровка анализа иммунограммы даст информацию специалистам для дальнейшего диагностического поиска, но уже в более узких рамках.

       Самыми важными из этих показателей будут выявление в общем количестве лимфоцитов их отдельных популяций (субпопуляций), изучение клеток иммунитета, которые в норме находятся в очень малых количествах, а также их функциональной активности. Кроме лимфоцитов, которые являются самым важным звеном иммунитета, при помощи иммунограммы можно выявить количество циркулирующих в крови иммунных комплексов, различных антител, а также компонентов системы комплемента

Иммунный статус (комплексное исследование): субпопуляции лимфоцитов, показатели гуморального иммунитета (С3, С4 компоненты комплемента, IgА, IgМ, IgG, IgE, циркулирующие иммунные комплексы (ЦИК — С1q), С-реактивный белок

5-6 р.д.

3 000

Иммунный статус — расширенный профиль (комплексное исследование): субпопуляции лимфоцитов, фагоцитоз, показатели гуморального иммунитета (С3, С4 компоненты комплемента, IgА, IgМ, IgG, IgE, циркулирующие иммунные комплексы (ЦИК — С1q) , С-реактивный белок)

5-6 р.д.

10 500

Клеточный иммунитет

 

Субпопуляции лимфоцитов (комплексное исследование): общее количество лейкоцитов и лимфоцитов, Т-лимфоциты (СD3), Т-хелперы (CD3+CD4+), Т-цитотоксические (CD3+CD8+), «дубль»-клетки (CD4+/CD8+), В-лимфоциты (CD19+), естественные киллеры (NK-клетки CD16/CD56), Т-киллеры (Т-NK-клетки CD3+CD16/CD56)

5-6 р. д.

5 000

Фагоцитоз (фагоцитирующие гранулоциты, индекс фагоцитоза ФГ, фагоцитирующие моноциты, индекс фагоцитоза ФМ)

5-6 р.д.

3 500

Клеточный иммунитет (комплексное исследование): субпопуляции лимфоцитов и фагоцитоз

5-6 р.д.

9 000

Гуморальный иммунитет

 

Иммуноглобулин G (IgG)

1-2 р.д.

260

Иммуноглобулин M (IgM)

1-2 р.д.

260

Иммуноглобулин A (IgA)

1-2 р.д.

280

Иммуноглобулин Е (IgE общий)

1-2 р.д.

400

Иммуноэлектрофорез-скрининг (дифференцировка гаммапатии: лямбда-цепи, каппа-цепи иммуноглобулинов)

7-8 р. д.

1 800

Иммуноэлектрофорез — (комплексное исследование) с количественным определением: включает дифференцировку гаммапатии: лямбда-цепи, каппа-цепи иммуноглобулинов электрофоретически (иммунофиксация) + количественное определение; Иммуноглобулины IgG, IgM, IgA

1 — 8 р.д.

5 000

Циркулирующие иммунные комплексы (ЦИК — С1q)

2-3 р.д.

650

С3 компонент комплемента

1-2 р.д.

350

С4 компонент комплемента

1-2 р.д.

360

Эстеразный ингибитор С1 комплемента — общий

1-2 р.д.

1 800

Эстеразный ингибитор С1 комплемента — функциональный

10-11 р. д.

2 600

Гуморальный иммунитет (комплексное исследование): С3 компонент комплемента, С4 компонент комплемента, IgА, IgМ, IgG, IgE, циркулирующие иммунные комплексы (ЦИК — С1q) , С-реактивный белок

1 — 3 р.д.

2 200

Интерлейкин 1-beta

2-3 р.д.

1 800

Интерлейкин 6

1-2 р.д.

1 750

Интерлейкин 8

2-3 р.д.

1 850

Интерлейкин 10

2-3 р.д.

1 750

Интерфероновый статус

 

Интерфероновый статус (комплексный анализ):
сывороточный интерферон, спонтанный интерферон (ИФН-альфа), спонтанный интерферон (ИФН-гамма), индуцированный альфа-ИФН, индуцированный гамма-ИФН

12-13 р. д.

2 850

Высокое/низкое количество лимфоцитов + функции и способы нормализации .

Что такое лимфоциты?

Лимфоциты представляют собой разновидность лейкоцитов.

Различные типы лимфоцитов в основном различаются по месту их созревания и функциям [1].

Существует три различных типа лимфоцитов: естественные клетки-киллеры, В-клетки и Т-клетки.

  • Натуральные клетки-киллеры (NK-клетки) убивают опухолевые клетки и инфицированные вирусом клетки.
  • В-клетки вырабатывают антитела. Антитела атакуют чужеродные для организма клетки (бактерии, токсины и вирусы).
  • Т-клетки разрушают собственные клетки организма, включая раковые клетки или клетки, захваченные вирусами.

Лимфоциты могут продуцировать цитокины, представляющие собой небольшие белки, важные для реакций иммунной системы, воспалений и инфекций [2].

Лимфоциты являются частью иммунной системы. Врожденная иммунная система реагирует на патогены общим образом, но не имеет длительной защиты. Адаптивная иммунная система реагирует на патогены, используя память о предыдущих встречах с патогеном [3].

Один ген, LSP1 (лимфоцит-специфический ген 1), экспрессируется в лимфоцитах (а также в других клетках). LSP1 передает сигналы между лейкоцитами [4].

Зрелые лимфоциты подвергаются запрограммированной гибели клеток.Это способствует сохранению гомеостаза и толерантности в организме [5].

Типы лимфоцитов

Т-клетки происходят из костного мозга и созревают в тимусе (иногда в миндалинах). Различные типы Т-клеток включают киллеры, хелперы, регуляторные Т-клетки, клетки памяти и естественные киллеры.

Наивные CD4+ Т-клетки — это клетки, которые станут Th2, Th3, Th27 и регуляторными Т-клетками [6].

1) Т-киллеры (цитотоксические) Т-клетки

Т-клетки-киллеры, также называемые CD8+ Т-клетками, могут сканировать клеточные поверхности, чтобы определить, являются ли они раковыми или заражены вирусами и бактериями.Они разрушают инфицированные клетки и помогают предотвратить аутоиммунные заболевания.

Несоответствующая активность Т-клеток-киллеров может привести к персистенции патогенов или аутоиммунному заболеванию [7].

2) Т-клетки-помощники

Т-клетки-помощники, с другой стороны, помогают запускать и контролировать иммунный ответ организма. Они помогают с активацией Т-клеток-киллеров, созреванием В-клеток и секрецией цитокинов. Они могут работать только при активации на поверхности антигенпрезентирующих клеток [8].

Вспомогательные Т-клетки можно разделить на различные группы в зависимости от их патогенов-мишеней, например. Th2, Th3 и Th27.

  • Th2-ответ характеризуется высвобождением гамма-интерферона и более эффективен против патогенов, поражающих клетки внутри, таких как бактерии и вирусы [9].
  • Th3-ответ характеризуется высвобождением интерлейкина-5 и более эффективен против патогенов, инфицирующих вне клеток, таких как некоторые бактерии и паразиты [9].
  • Клетки Th27 являются воспалительными аналогами регуляторных Т-клеток. Прочтите этот пост, чтобы узнать больше об иммунном ответе Th27.

Прочитайте этот пост, чтобы узнать больше о Th2 и Th3.

3) Регуляторные Т-клетки

Регуляторные Т-клетки поддерживают толерантность, предотвращают аутоиммунные заболевания и ограничивают воспалительные заболевания. Однако они также подавляют иммунитет к некоторым патогенам и опухолям [10].

4) Т-клетки памяти

Т-клетки памяти живут долгое время после окончания инфекции и помогают иммунной системе помнить о предыдущих инфекциях.Они быстро размножаются после повторного заражения предыдущими инфекциями.

Существует 3 типа В-клеток памяти, включая резидентные, центральные и эффекторные. Т-клетки памяти особенно важны для разработки вакцин [11].

5) Т-клетки натуральные киллеры

Т-клетки натуральные киллеры помогают связать адаптивную и врожденную иммунную системы. Они могут продуцировать цитокины и регулировать иммунный ответ против аутоантигенов [12].

Дефицит Т-клеток может привести к повреждению иммунной системы.Дефицит может вызвать наследственные заболевания, тяжелые грибковые инфекции, рак и другие хронические инфекции. Дефицит Т-клеток обычно присутствует у младенцев или детей ясельного возраста [13].

В-клетки

В-клетки в основном функционируют в адаптивной иммунной системе. Они секретируют антитела и цитокины и созревают в костном мозге. Они работают с антигенами, молекулами, вызывающими иммунный ответ, для производства антител [14].

6) В-клетки памяти

В-клетки памяти циркулируют по телу, чтобы инициировать быстрый ответ антител, когда они обнаруживают антиген.Они помогают иммунной системе быстрее реагировать после повторного заражения [14].

7) Регуляторные В-клетки

Регуляторные В-клетки помогают остановить лимфоциты, которые могут вызывать воспаление. Они также способствуют образованию регуляторных Т-клеток [15].

Т-клетки помогают активировать В-клетки, хотя есть некоторые В-клетки, которым не нужны Т-клетки для активации [14].

Аномальное распознавание В-клеток и трансформация В-клеток могут вызывать аутоиммунные заболевания, такие как артрит, диабет, волчанка, рассеянный склероз и рак [16].

Натуральные клетки-киллеры

Натуральные клетки-киллеры работают как часть врожденной иммунной системы. Они обеспечивают быструю реакцию на инфицированные клетки. Им не нужны антитела, чтобы инициировать иммунную реакцию [17].

Естественные клетки-киллеры также играют роль в адаптивном иммунном ответе, помогая при вторичных инфекциях. Они особенно необходимы для борьбы с раком и могут проявлять врожденную устойчивость к таким вирусам, как ВИЧ [17].

Измерение лимфоцитов

Простейшим тестом на лимфоциты является подсчет и дифференциальный анализ лейкоцитов.Для анализа требуется всего лишь капля крови либо с помощью ручного подсчета в микроскопических камерах, либо с помощью автоматических счетчиков. Костный мозг можно использовать для лучшего исследования, но чаще используются образцы крови [18].

Лабораторные результаты обычно отображаются в виде набора значений, известного как «референтный диапазон», который иногда называют «нормальным диапазоном». Референтный диапазон включает верхний и нижний пределы лабораторного теста, основанного на группе здоровых людей.

Ваш лечащий врач сравнит количество лимфоцитов с референсными значениями, чтобы определить, выходит ли оно за пределы диапазона ожидаемых значений.Таким образом, вы и ваш лечащий врач сможете получить подсказки, которые помогут определить возможные состояния или заболевания.

Помните, что некоторые лабораторные различия возникают из-за различий в оборудовании, методах и используемых химикатах. Не паникуйте, если ваш результат немного выходит за пределы допустимого диапазона в приложении — пока он находится в пределах нормы по данным лаборатории, проводившей тестирование, ваше значение в норме.

Однако важно помнить, что нормальный тест не означает отсутствие определенного заболевания.Ваш врач будет интерпретировать ваши результаты в сочетании с вашей историей болезни и результатами других анализов.

Но помните, что одного теста недостаточно для постановки диагноза. Ваш врач будет интерпретировать этот тест, принимая во внимание вашу историю болезни и другие тесты. Слегка низкий/высокий результат может не иметь медицинского значения, поскольку этот тест часто меняется изо дня в день и от человека к человеку.

Нормальные референтные диапазоны

Уровни лимфоцитов могут варьироваться в зависимости от расы, пола, местоположения и образа жизни.

У представителей европеоидной расы уровень CD4+-лимфоцитов может колебаться от 600 до 1000 клеток/мкл, а у жителей Азии и Ближнего Востока — от 500 до 900 клеток/мкл [19].

Уровни CD8+-лимфоцитов у представителей европеоидной расы в норме колеблются от 400 до 660 клеток/мкл, а у китайцев — от 400 до 800 клеток/мкл [19].

В Северной Америке референтные диапазоны, используемые при анализах крови, следующие:

  • 690 – 2540 клеток/мкл для CD3+ Т-лимфоцитов (оптимально около 1410 клеток/мкл)
  • 410 – 1590 клеток/мкл для CD4+ Т-лимфоцитов ( оптимальная ~ 880 клеток/мкл)
  • и 190 – 1140 клеток/мкл для CD8+ Т-лимфоцитов (оптимальная ~ 490 клеток/мкл)

Другие роли лимфоцитов

90 Может защищать от рака 3

Более высокие уровни лимфоцитов/Т-клеток указывают на общую выживаемость онкологических больных [20].

Специализированная терапия опухоль-инфильтрирующими лимфоцитами может лечить симптомы рака печени и может помочь предотвратить рецидив рака и опухолей [21].

2) Поддержание здоровья кишечника

Лимфоциты в кишечнике играют важную роль в поддержании гомеостаза кишечника. Они также имеют решающее значение для раннего ответа на кишечные инфекции [22].

3) Защита от артрита

У пациентов с артритом с высоким уровнем лимфоцитов в суставах было меньше повреждений хрящей и костей, чем у пациентов с низким уровнем лимфоцитов [23].

4) Влияние на артериальное давление

CD8(+), Th2, Th27 и Т-регуляторные Т-клетки по-разному влияют на артериальное давление [24].

Аномалии лимфоцитов

Состояния, которые мы здесь обсуждаем, обычно связаны с аномальными уровнями лимфоцитов, но одного этого симптома недостаточно для постановки диагноза. Поговорите со своим врачом, чтобы выяснить, какое основное заболевание может вызывать у вас необычно высокий или низкий уровень лимфоцитов, и разработайте соответствующий план по улучшению вашего здоровья.

1) Лимфома

Лимфомагенез – это развитие лимфомы или рака лимфатических узлов.

Лимфома может возникнуть в результате неконтролируемого роста лимфоцитов в организме. Мутации в путях, участвующих в подавлении опухоли, могут вызывать неконтролируемый рост В- и Т-лимфоцитов [25].

Гиперактивность В-клеток, связанная с аутоиммунными заболеваниями, и нарушение функции Т-клеток также могут приводить к лимфоме [26].

2) ВИЧ

Наиболее характерной чертой ВИЧ и СПИДа является снижение количества и функции Т-лимфоцитов в организме.Большинство ВИЧ-инфицированных клеток в организме также устойчивы к естественным клеткам-киллерам [27].

В исследованиях, проведенных на ВИЧ-инфицированных пациентах, CD4+ Т-лимфоциты были наиболее истощены в кишечнике [27].

ВИЧ заражает, вызывает функциональные нарушения и убивает CD4+ Т-клетки.

ВИЧ вызывает апоптоз Т-лимфоцитов (запрограммированную гибель клеток), в результате чего иммунная система становится слабой и неспособной бороться с инфекциями [28].

3) Рассеянный склероз

У пациентов с рассеянным склерозом (РС) повышено количество Т-клеток.CD8 Т-лимфоциты играют роль в формировании очагов рассеянного склероза. Т-клетки могут инициировать повреждение нервной системы [29].

4) Диабет 1-го типа

Цитотоксические Т-лимфоциты могут разрушать клетки, вырабатывающие инсулин, вызывая таким образом диабет 1-го типа [30].

5) Аллергия и астма

Дисбаланс Th2/Th3 приводит к проявлению астмы и аллергии. В основном это вызвано цитокинами Th3, которые помогают поддерживать воспалительную реакцию при аллергических заболеваниях [31].

6) Проблемы с кожей

Дерматит – это хроническое воспалительное заболевание кожи. Клетки Th3 и цитокины играют важную роль в воспалительной реакции и могут способствовать развитию дерматита [32].

7) Лимфоцитоз

Аномально высокое количество лимфоцитов (значительно выше 3000 на мл) или лимфоцитоз может указывать на проблемы с иммунной системой . Лимфоцитоз может быть вызван гриппом, ветряной оспой, туберкулезом, краснухой и др.Лейкемия также может быть причиной высокого количества лимфоцитов в крови. Некоторые лекарства также могут вызывать повышение уровня лимфоцитов [33, 34].

Лимфоцитоз не обязательно означает наличие проблемы с иммунной системой и может быть временным . Симптомы, сопровождающие лимфоцитоз, встречаются редко.

8) Лимфоцитопения

Аномально низкое количество лимфоцитов или лимфоцитопения может быть вызвано СПИДом, низким уровнем костного мозга, приемом стероидов или нервными заболеваниями, такими как рассеянный склероз .Другие наследственные заболевания также могут вызывать низкое количество лимфоцитов [35].

Как и лимфоцитоз, лимфоцитопения не обязательно указывает на нарушение иммунной системы. Это может произойти после простуды или другой распространенной инфекции . Причиной также могут быть сильный стресс, интенсивные физические упражнения или недоедание [36].

Как изменить уровень лимфоцитов

Как увеличить уровень лимфоцитов

Как правило, вы узнаете свой уровень лимфоцитов только в том случае, если врач запросил специальный анализ крови.Самое главное — это работать с врачом, чтобы диагностировать и лечить основные проблемы со здоровьем, которые могут вызывать аномальное количество лимфоцитов.

В зависимости от состояния врач может назначить следующие виды терапии:

  • Комбинированная антиретровирусная терапия при ВИЧ
  • Антибиотики, противовирусные, противогрибковые или противопаразитарные препараты при различных типах инфекций
  • Гамма-глобулин для профилактики инфекций у людей с В -клеточная лимфоцитопения
  • Трансплантация стволовых клеток костного мозга при некоторых видах рака (таких как лейкемия, множественная миелома и некоторые виды лимфомы)

Если лекарство вызывает низкий уровень лимфоцитов (напр.g., иммунодепрессанты и стероиды), ваш врач может уменьшить его дозу или отменить его.

Людям с низким уровнем лимфоцитов следует укреплять свою иммунную систему, придерживаясь диеты, богатой питательными веществами и обеспечивающей достаточное количество белков, витаминов и минералов. Врачи могут назначить специальную диету людям с ослабленной иммунной системой.

Кроме того, важно предотвращать инфекции путем:

  • частого мытья рук с мылом или дезинфицирующим средством
  • избегания людных мест
  • избегания контактов с больными людьми
  • избегания животных
  • или порезы на коже

Перечисленные ниже дополнительные добавки могут помочь вам изменить уровень лимфоцитов.Обсудите с врачом, могут ли они помочь в вашем случае. Ни одно из них никогда не должно применяться вместо того, что рекомендует или прописывает ваш врач!

  • Рейши гриб Добавка в течение 28 дней у 40 футболистов стимулировала образование Т-клеток [37].
  • Базилик святой ( Ocimum святилище ) экстракт травы увеличил количество Т-клеток и цитокинов после 4 недель приема у 40 здоровых добровольцев [38].
  • Креатин (Cr) проявляет антиоксидантную активность и защищает лейкоциты от окислительного повреждения. Креатин и его побочный продукт, креатинин, помогают защитить лимфоциты и продлить их жизнь [39].
  • Витамин А : Витамин А оказывает прямое воздействие на Т-лимфоциты и их активацию. Он также стабилизирует клетки Th2. Дефицит витамина А, хотя и редко, может вызвать проблемы с иммунной системой [40].
  • Витамин D : Этот витамин влияет на развитие внутриэпителиальных лимфоцитов.Дефицит витамина D связан с аутоиммунными и инфекционными заболеваниями [40].

Как снизить уровень лимфоцитов

В случае повышенного уровня лимфоцитов (лимфоцитоза) самое главное – выявить и лечить основную причину (чаще всего инфекции и лейкемию). Лимфоцитоз обычно проходит после разрешения состояния, вызвавшего его [41].

Поскольку высокий уровень лимфоцитов часто вызывается инфекциями, основной профилактической стратегией является снижение их риска [42]: Дезинфекция поверхностей и часто используемых предметов

Перечисленные ниже дополнительные стратегии могут помочь вам снизить уровень лимфоцитов.Обсудите с врачом, могут ли они помочь в вашем случае. Ни одно из них никогда не должно применяться вместо того, что рекомендует или прописывает ваш врач!

1) Лекарства

Следующие лекарства могут снизить количество лимфоцитов, если вы уже принимаете их по какому-либо другому состоянию здоровья, но никогда не начинайте их принимать и не увеличивайте дозу для этой цели . Всегда следуйте плану лечения, назначенному врачом.

  • Стероиды , такие как глюкокортикоиды, ингибируют пролиферацию лимфоцитов.Синтетические стероиды ингибировали как циркулирующие Т-, так и В-клетки [43].
  • Адалимумаб (Хумира) влияет на уровень и функцию Т-лимфоцитов у пациентов с ревматоидным артритом. Тем не менее, есть противоречивые сообщения о том, увеличивает или подавляет ли препарат лимфоциты. Эффекты также временные [44].
  • Иммунодепрессанты снижают уровень Т- и В-лимфоцитов в крови. В одном исследовании с участием 60 пациентов циклофосфамид, назначаемый с азатиоприном, снижал долю Т-лимфоцитов.В свою очередь, преднизолон, циклофосфамид, метотрексат, микофенолата мофетил и азатиоприн снижали более чем на 60% В-лимфоциты у мышей [45, 46].
  • Пентоксифиллин ингибирует ранние этапы активации Т-лимфоцитов [47].
2) Пищевые добавки
  • Эхинацея : у здоровых людей эхинацея сама по себе снижает IL-2 (цитокин Th2) и может ингибировать пролиферацию Т-клеток. С другой стороны, он увеличивает IL-10 (цитокин Th3) и может снижать воспалительную реакцию [48].
  • Рыбий жир : кормление мышей рыбьим жиром снижало активность Т-клеток против вируса простуды, но улучшало пролиферацию лимфоцитов [49].

Почему у меня увеличилось количество лимфоцитов?

В:  Мне 25 лет. Вчера мне сделали общий анализ крови. Месяц назад у меня появились красные высыпания с зудом на стопах, голенях и руках. Количество эозинофилов у меня было 1050 и 16%. Врач прописал Зентел и Беноцит Форте, которые я принимала в течение месяца.Вчера в анализе крови было 183 и 3% эозинофилов, а лимфоцитов было 49% (при норме 30-45%). У меня до сих пор есть красные высыпания на груди и внизу груди. В чем причина повышения количества лимфоцитов? Все другие дифференциальные подсчеты и эритроциты/лейкоциты в норме.

A: Лейкоциты в крови (лейкоциты) включают гранулоциты (клетки с гранулами в цитоплазме) и мононуклеарные клетки. Гранулоциты бывают трех типов – нейтрофилы, эозинофилы и базофилы, а мононуклеары – лимфоциты и моноциты.Нормальное общее количество лейкоцитов (лейкоцитов или лейкоцитов) зависит от возраста человека. Он также имеет суточный цикл, т. е. счета меняются в течение 24-часового дня. В норме они колеблются от 4000 до 10 000 на мл у взрослого человека. Лейкоцитоз — это увеличение общего количества лейкоцитов выше общепринятого нормального диапазона, тогда как лейкопения — это снижение ниже принятого нормального диапазона. Обычно за это увеличение или уменьшение отвечает только один тип клеток, но может быть одновременное увеличение/уменьшение нескольких типов клеток.Количество может повышаться из-за увеличения любого компонента лейкоцитов, то есть нейтрофилов (так называемый нейтрофилез), лимфоцитов (так называемый лимфоцитоз), моноцитов (так называемый моноцитоз), эозинофилов (так называемый эозинофилия) или базофилов (так называемый базофилия). Напротив, падение этих клеток называют нейтропенией, лимфопенией, моноцитопенией и т. д. Об этом можно судить по дифференциальному количеству лейкоцитов. Диапазон каждой из этих клеток также зависит от возраста человека. Существует множество причин увеличения или уменьшения количества нейтрофилов, лимфоцитов и т. д.Эозинофилы представляют собой тип лейкоцитов, продуцируемых в костном мозге и содержащих белки, которые способствуют иммунологическому ответу на возбудителей инфекционных заболеваний и повреждению тканей при аллергических и аутоиммунных заболеваниях. В норме абсолютное количество эозинофилов в крови составляет около 500 на мкл, но оно может увеличиваться при: аллергических состояниях (астма, аллергический ринит, лекарственные реакции), инфекционных заболеваниях (особенно при глистных инвазиях), некоторых заболеваниях соединительной ткани, злокачественных новообразованиях и т. д. Ваша эозинофилия, скорее всего, была реакцией на сыпь (причину которой необходимо установить), и показатели снизились в ответ на лечение.

границ | Регуляторная роль Fc-рецептора в фагоцитозе mIgM+ B-лимфоцитов камбалы (Paralichthys olivaceus)

Введение

Функция фагоцитоза относится к распознаванию и попаданию крупных частиц в фагосомы и играет важную роль в элиминации микробных патогенов и апоптотических клетки (1). Явление фагоцитоза в первую очередь существует в макрофагах, моноцитах и ​​нейтрофилах (2). Но недавние исследования показали, что В-клетки также обладают способностью к фагоцитозу.Было доказано, что у млекопитающих мышиные клетки B1 обладают способностью к фагоцитозу (3). У земноводных, например, Xenopus laevis , В-клетки обладают потенциальными фагоцитарными способностями (4). Также было доказано, что IgM + В-лимфоциты костистых костей обладают фагоцитарной активностью по отношению к внешним частицам у различных видов, таких как морской окунь ( Lateolabrax japonicus ) (5), полугладкая подошва языка ( Cynoglossus semilaevis ) (6) , камбала ( Paralichthys olivaceus ) (7), пинагор ( Cyclopterus lumpus ) (8) и нильская тиляпия ( Oreochromis niloticus ) (9).

Рецептор Fc (FcR) в основном функционирует как комплекс нескольких субъединиц и выполняет важные функции, особенно в антителозависимом клеточном фагоцитозе (ADCP) и антителозависимой клеточно-опосредованной цитотоксичности (ADCC) (10, 11) . FcR присутствуют у млекопитающих (12), птиц (13), земноводных (14), рыб (15–18) и других позвоночных и в основном экспрессируются на поверхности лейкоцитов, таких как В-клетки, Т-клетки и натуральные киллеры. (NK) клетки. У высших позвоночных, в то время как FcγRII распознает фрагмент Fc, киназы семейства Src индуцируют фосфорилирование тирозинкиназы селезенки (Syk) и мотива ITAM, тем самым активируя нижестоящие гены, связанные с фагоцитозом (19-21).Недавние исследования показали, что FcγRII экспрессируется на множестве типов иммунных клеток и подразделяется на три типа: FcγRIIa, FcγRIIb и FcγRIIc, из которых только FcγRIIb экспрессируется на В-клетках млекопитающих (22). Кроме того, FcγRIII был разделен на два типа, FcγRIIIa и FcγRIIIb, и играл важную роль в ADCC млекопитающих (23). Среди них FcγRIIIa был трансмембранным белком, в основном обнаруженным в моноцитах и ​​макрофагах, и был необходим для противовоспалительного ответа (24). FcγRIIIb представляет собой нетрансмембранный белок, который прикрепляется к поверхности мембраны иммунных клеток в состоянии покоя и сбрасывается с мембраны при связывании с Fc-фрагментом IgG, что приводит к значительному снижению уровня экспрессии FcγRIII в природном киллере (NK) клетки (25).Предыдущие исследования у костистых рыб только показали, что IgM-опсонизированный Aeromonas hydrophila может значительно увеличить скорость фагоцитоза IgM + B-лимфоцитов радужной форели (4), но роль FcR в этом иммунологическом процессе до сих пор неизвестна. Поэтому, чтобы выявить функцию FcR в костистых тканях mIgM + В-лимфоцитов ADCP, мы выбрали камбалу в качестве экспериментального животного и дополнительно исследовали роль FcγRII и FcγRIII в этом процессе.

В этом исследовании, чтобы проиллюстрировать роль FcR в процессе ADCP, была исследована способность к фагоцитозу mIgM + B-лимфоцитов периферической крови камбалы, в то время как бактерии Edwardsiella tarda подвергались опсонизации сыворотки, а также блокировались Fc или FcγRII. .Кроме того, экспрессия FcγRII, FcγRIII и Syk была обнаружена в фагоцитированных mIgM + В-лимфоцитах, отсортированных с помощью магнитных шариков, таким образом выясняя сигнальные события, которые запускают ADCP. Это исследование расширит наше понимание функций FcR в фагоцитозе В-клеток и обеспечит дальнейшее понимание роли В-клеток во врожденном иммунитете костистых рыб.

Материалы и методы

Заявление об этике

Это исследование было проведено в строгом соответствии с этическими критериями и целью «Положения об управлении делами, касающимися экспериментальных животных», провозглашенного Государственной научно-технической комиссией провинции Шаньдун. Провинция.Это исследование также было разрешено Комитетом по этике ухода за животными и экспериментов Океанического университета Китая. Перед экспериментом камбал анестезировали этил-3-аминобензоат-метансульфокислотой (MS222) перед умерщвлением.

Рыба

Камбалы (800 ± 40 г) были приобретены на акваферме в Жичжао, провинция Шаньдун, КНР. Рыб выращивали совместно в пруду с богатой кислородом и фильтрованной морской водой при температуре 20,0 ± 1,0°C в течение семи дней перед экспериментом.

Приготовление антисыворотки камбалы и поликлональных антител кролика против IgM

Патогенные E. tarda , выделенные из больных камбал, культивировали и инактивировали формалином, как описано ранее (26). Затем количество инактивированных бактерий доводили до 1,0 × 10 8 КОЕ/мл с помощью 0,1 М фосфатно-солевого буфера (PBS), а затем смешивали с полным адъювантом Фрейнда (1:1, об./об.). Каждой камбале внутрибрюшинно вводили 200 мкл эмульгированного E. tarda и тот же объем стерильного PBS, который вводили в качестве отрицательного контроля.Через 2 недели инактивированный E. tarda , эмульгированный с неполным адъювантом Фрейнда (1:1, об./об.), вводили в качестве бустерной иммунизации. Образцы крови собирали из хвостовой вены через 35 дней после первой иммунизации и оставляли свертываться при комнатной температуре в течение 1 ч, затем центрифугировали при 4 °C при 8000 г g в течение 15 мин для получения анти- E. tarda . сыворотка.

Для получения поликлональных антител против IgM камбалы IgM камбалы очищали из сыворотки в соответствии с описанной ранее процедурой с некоторыми модификациями (27, 28).Вкратце, неочищенный экстракт IgM выделяли из сыворотки высаливанием 50% насыщенным сульфатом аммония, а затем очищали с использованием колонки HiTrap ® Protein A (GE Healthcare) с помощью системы очистки белка (AKTA prime, Amersham). Чистоту IgM проверяли с помощью SDS-PAGE, а его концентрацию определяли по методу Брэдфорда и доводили до 1,0 мг/мл с помощью PBS. Затем новозеландских белых кроликов иммунизировали очищенным IgM для получения поликлональных антител в соответствии с предыдущей процедурой (29).

Характеристика антисыворотки камбалы и поликлональных антител кролика против IgM

Сначала мы проверили характеристики приготовленной сыворотки камбалы против E. tarda . Вкратце, лунки плоскодонных микропланшетов (96-луночных, Costar) покрывали в течение ночи 100 мкл/лунку 1,0 × 10 8 КОЕ/мл E. tarda при 4°C. Лунки трижды промывали 0,1 М PBS, 0,1% Tween 20 и pH 7,4 (PBST), а затем блокировали 3% BSA в PBS на 1 ч при 37°C.После промывки вносили по 100 мкл в лунку сыворотки (разведение 1:100 в PBS), отобранной у вакцинированной камбалы, и инкубировали 2 ч при 28°С. После промывки в каждую лунку добавляли 100 мкл моноклонального антитела (мАт) 2D8 против IgM камбалы (1:2000, разбавленного в PBS), которое было предварительно приготовлено в нашей лаборатории (28). После 1 ч инкубации при 37°C добавляли конъюгат козьего антимышиного Ig-щелочной фосфатазы (Sigma), разведенный 1:5000 в PBS, и инкубировали в течение 45 мин при 37°C. После последней промывки 100 мкл 0.1% (мас./об.) п-нитрофенилфосфата (pNPP, Sigma) в 50 мМ карбонатно-бикарбонатном буфере (pH 9,8), содержащем 0,5 мМ MgCl 2 , использовали для проявления окраски в течение 30 мин при 25°C перед измерением с помощью автоматический ридер для твердофазного иммуноферментного анализа (ELISA) (TECAN, Мэннедорф, Швейцария). Для анализа непрямой флуоресценции (IFA) разбавленную E. tarda помещали на предметные стекла на 2 ч и фиксировали 4% (об./об.) параформальдегидом в течение 20 мин при 20°C, после чего добавляли подготовленную антисыворотку. на предметные стекла и инкубируют 2 ч при 28°С; сыворотки здоровых камбал использовали в качестве контроля.Затем добавляли mAbs 2D8 (1:2000) после трехкратной промывки PBST в течение 1 ч при 37°C. Затем предметные стекла инкубировали с Alexa Fluor ® 649 козьих антимышиных IgG (Invitrogen, Molecular Probes) в течение 45 мин при 37°C. После последней промывки предметные стекла фиксировали 90% глицерином перед наблюдением под флуоресцентным микроскопом (Invitrogen™ EVOS™ FL Auto 2). Затем приготовленную сыворотку камбалы против E. tarda использовали для опсонизации E. tarda .

В то же время были охарактеризованы свойства полученных кроличьих поликлональных антител против IgM.Вкратце, для вестерн-блоттинга сыворотку камбалы разделяли с помощью SDS-PAGE и переносили на мембрану PVDF (Merck Millipore, Германия). Мембрану блокировали PBS, содержащим 3% бычьего сывороточного альбумина (BSA), а затем инкубировали с приготовленными кроличьими поликлональными антителами против IgM (разведенными в соотношении 1:2000 в PBS) при 37°C в течение 1 ч и использовали сыворотку здоровых кроликов. как отрицательный контроль. После трехкратной промывки PBST использовали конъюгат козьего антикроличьего IgG-щелочной фосфатазы (Merck Millipore) для обнаружения связывания антител при 37°C в течение 1 часа.После промывки реактивные полосы визуализировали в течение 5 мин в растворе субстрата (100 мМ NaCl, 100 мМ Трис, 5 мМ MgCl 2 , pH 9,5), содержащем NBT (Sigma) и BCIP (Sigma). Полученные кроличьи поликлональные антитела против IgM позже использовали для экспериментов по блокированию.

Анализ на фагоцитоз

Комплемент в приготовленных сыворотках здоровых и вакцинированных камбал инактивировали водяной баней при 56°С в течение 30 мин (30). E. tarda доводили до концентрации 1.0 × 10 10 КОЕ/мл, а затем инкубировали с сыворотками, инактивированными комплементом, в объемном соотношении 1:10 в течение 5 ч при осторожном встряхивании при 28°С. После центрифугирования при 10 000 90 143 g 90 144 в течение 5 мин был получен опсонизированный 90 143 E. tarda 90 144, который был разбавлен PBS до 1,0 × 10 90 439 8 90 440 КОЕ/мл. Затем сыворотку здоровой камбалы и антисыворотку, опсонизированную E. tarda , метили изотиоцианатом флуоресцеина (FITC) для подготовки к последующим экспериментам по фагоцитозу (5).

Лейкоциты, выделенные с помощью градиента Перколла от трех камбал, обрабатывали как три отдельных образца, которые затем подсчитывали и разводили до 1.0 × 10 7 клеток/мл со средой L-15. Суспензию клеток объемом 1000 мкл инкубировали с опсонизированной антисывороткой E. tarda в течение 1, 3 или 5 ч при 22°C в 24-луночных культуральных планшетах, в то время как опсонизированную сывороткой здоровой камбалы E. tarda использовали в качестве отрицательной контроль. Все соотношения клетки/бактерии были установлены как 1:40. Затем неприлипшие клетки собирали и смешивали с прикрепившимися клетками, разрыхленными с помощью трипсина-ЭДТА. Непроглоченные бактерии удаляли глюкозной подушкой (3 мл PBS, pH 7.3, с 3% (масса/объем) БСА и 4,5% (масса/объем) D-глюкозы) и центрифугировали при 100 g в течение 10 мин при 4°C. После приема внутрь выделенные клетки суспендировали в 1000 мкл PBS, содержащего 5% (об./об.) сыворотки новорожденных телят (NCS), с последующей инкубацией с mAb против IgM в качестве первичных антител. После промывания PBS, содержащим 5% (об./об.) NCS, клетки метили Alexa Fluor ® 649 козьих антимышиных IgG (Invitrogen, Molecular Probes). После последней промывки с помощью проточного цитометра BD Accuri C6 (Becton Dickinson.США). Для определения клеточных активных форм кислорода (АФК) mIgM + B-лимфоцит окрашивали с помощью набора для анализа ROS (Beyotime) после фагоцитоза с помощью антисыворотки, опсонизированной E. tarda , в течение 2 ч при 22°C, где сыворотка здоровой камбалы — опсонизированный Е. tarda использовали в качестве контроля.

Чтобы обратно проиллюстрировать функцию Fc-фрагмента IgM камбалы в антителозависимом клеточном фагоцитозе (ADCP), мы использовали приготовленные кроличьи анти-IgM-антитела для блокирования Fc-фрагмента на поверхности опсонизированной антисывороткой E.поздняя . Вкратце, поликлональные антитела кролика анти-IgM (разведенные в соотношении 1:1000) добавляли к опсонизированной антисывороткой камбалы E. tarda (1,0 × 10 10 КОЕ/мл), после чего они реагировали друг с другом при температуре инкубатора. 37°C в течение 12 ч, где в качестве отрицательного контроля использовали опсонизированную сыворотку здоровой камбалы E. tarda . Затем обработанный E. tarda был получен центрифугированием при 10000 g в течение 5 минут и доведен до 1,0 × 10 8 КОЕ/мл.Методы эксперимента и измерения скорости фагоцитоза и продукции клеточных АФК в mIgM + В-лимфоцитах были такими же, как в предыдущем описании. Наконец, фагоцитоз E. tarda , обработанный mIgM + В-лимфоцитами, различными способами наблюдали с помощью флуоресцентной микроскопии (Olympus DP70, Токио, Япония), как описано выше.

Обнаружение экспрессии генов, связанных с ADCP, в mIgM

+ B-лимфоцитах

Подробные методы сортировки mIgM + B-лимфоцитов из периферической крови описаны ранее (7).Чистоту mIgM + В-лимфоцитов до и после сортировки контролировали с помощью проточной цитометрии, а также флуоресцентной микроскопии. Сначала из отобранных mIgM + В-лимфоцитов выделяли тотальную РНК с помощью набора RNeasy Plus Mini (Qiagen, Германия) в соответствии с инструкциями производителя. Качество РНК анализировали на Bioanalyzer 2100 (Agilent Technologies, США). Все праймеры, использованные в этом исследовании, перечислены в Таблице 1. Специфичность праймеров была подтверждена кривыми плавления и секвенированием ампликонов.Количественную ПЦР в реальном времени (qRT-PCR) проводили в системе LightCycler ® 480 II Real Time System (Roche, Швейцария) компании SYBR GreenIMaster (Roche, Швейцария). Как один из наиболее консервативных генов у позвоночных, наши предыдущие исследования показали, что 18s рРНК наименее подвержена влиянию различных стимулов у камбалы, поэтому ген 18S рРНК был использован в качестве внутреннего эталона (7, 31). Все данные были связаны с геном 18S рРНК и проанализированы методом 2 -ΔΔCt . Различия между группой лечения и контрольной группой были проанализированы для оценки изменений в экспрессии генов.Уровни мРНК Syk, FcγRII и FcγRIII в mIgM + B-лимфоцитах исследовали с помощью qRT-PCR после инкубации с опсонизированной антисывороткой E. tarda в течение 2 ч при 22°C и опсонизированной сывороткой здоровой камбалы E. tarda использовали в качестве отрицательного контроля, как указано при выделении РНК. Для анализа на блокирование Fc-фрагмент IgM на E. tarda был заблокирован приготовленными анти-IgM поликлональными антителами, затем уровень экспрессии трех генов в mIgM + B-лимфоцитах также был определен с помощью qRT-PCR после инкубация с антисывороткой-опсонизированной E.tarda в течение 2 ч при 22°C, в то время как опсонизированная сыворотка здоровой камбалы E. tarda использовалась в качестве отрицательного контроля, как указано в выделении РНК.

Таблица 1 Праймы, используемые для количественной ПЦР в этом исследовании.

Выявление эффекта блокирования FcγRII на mIgM

+ Фагоцитоз В-лимфоцитов

На основании последовательности генома FcγRII камбалы (Genbank № XM_020105965.1), специфических праймеров (F: 5′-CGCA GCCACC9TGG2GCATCTG 3′, BamH I; R: 5′-CCC AAGCTT TCATTGGTCGAACCTCAGAGAC-3′, Hind III) были сконструированы для амплификации гена-мишени.Рекомбинантный белок FcγRII (rFcγRII) и кроличье поликлональное антитело против rFcγRII получали и характеризовали, как описано ранее (32). Мы обработали mIgM + В-лимфоциты приготовленным поликлональным антителом против rFcγRII для блокирования FcγRII на поверхности их мембраны. Вкратце, лейкоциты периферической крови, выделенные с помощью градиента Перколла (PBL), доводили до 1,0 × 10 7 клеток/мл с помощью PBS и инкубировали с антителами против rFcγRII (20:1, об./об.) в течение 1 ч для блокирования FcγRII. Затем антисыворотка-опсонизированная E.tarda инкубировали с блокированными лейкоцитами в течение 3 часов. Незаблокированные лейкоциты использовали в качестве контроля. После промывки mIgM + В-лимфоциты метили приготовленными анти-IgM mAb и Alexa Fluor ® 649 козьими антимышиными IgG, и скорость их фагоцитоза анализировали с помощью проточной цитометрии. FcγRII-заблокированные mIgM + В-лимфоциты сортировали после фагоцитоза, как описано ранее, и гены, связанные с ADCP и родственные фаголизосомам, выявляли в них с помощью qRT-PCR.

Статистический анализ

Статистический анализ проводили с помощью программного обеспечения Statistical Product and Service Solution (SPSS) (версия 20.0; IBM Corp., США), а статистическую значимость измеряли с помощью t-тестов для независимых выборок. Результаты представлены как среднее значение ± стандартное отклонение, а различия считались значимыми при P <0,05.

Результаты

Характеристики антисыворотки камбалы и поликлональных антител против IgM

По данным SDS-PAGE очищенный IgM имел две основные полосы с молекулярной массой приблизительно 72.0 кДа и 26,0 кДа, соответствующие предсказанным тяжелым и легким цепям IgM камбалы, соответственно, и почти не имели других белковых полос (Рисунок 1А, дорожка 1). Результаты ELISA показали, что титры антисыворотки камбалы и поликлональных антител кролика против IgM составляли 1/80 и 1/160000 соответственно (данные не представлены). Вестерн-блоттинг показал, что приготовленные кроличьи поликлональные антитела против IgM были способны специфически распознавать тяжелые и легкие цепи IgM сыворотки камбалы (рис. 1А, дорожка 3).Результаты IFA показали, что поверхности всех бактерий E. tarda демонстрировали сильный сигнал зеленой флуоресценции, что указывает на успешное мечение FITC. Кроме того, антисыворотка камбалы могла полностью прилипать к поверхности E. tarda , в то время как при использовании сыворотки здоровой камбалы не наблюдалось специфического связывания (рис. 1B).

Рисунок 1 Анализ характеристик кроличьей анти-IgM сыворотки и антисыворотки камбалы. (A) Сыворотки IgM сыворотки камбалы и анти-IgM сыворотки кролика анализировали с помощью SDS-PAGE и вестерн-блоттинга.Дорожка M, маркер молекулярной массы; дорожка 1, очищенная сыворотка IgM камбалы; дорожка 2, отрицательный контроль с использованием сыворотки неиммунизированного кролика; Дорожка 3, IgM сыворотки камбалы иммуноокрашивали поликлональными антителами против IgM. (B) Анализ связывающей активности сыворотки камбалы против E. tarda . B1 и B5: E . поздняя наблюдалась под дифференциальным интерференционным микроскопом. B2: Маркировка FITC E . поздняя . B6: Иммунофлуоресцентно окрашенные бактерии с антисывороткой камбалы, mAb против IgM и Alexa Fluor ® 649 козьих антимышиных IgG (B7) и сыворотки здоровых камбал использовали в качестве контроля (B3).B4 и B8: объединить изображения каждого флуоресцентного канала (Bar = 10 мкм).

Фагоцитоз скорости MIGM

+ B лимфоцитов пост Опсонизация E. Tarda и Fc Blocking

проточная цитометрия показала фагоцитоз скорости антисывора — Orosisized E. Tarda в периферической крови MIGM + B лимфоциты через 1, 3 или 5 ч составляли 51,1 ± 0,8%, 63,0 ± 0,4% и 77,5 ± 0,9% соответственно, что было значительно выше, чем в контрольных группах с 40.2 ± 0,7%, 50,9 ± 0,6% и 63,8 ± 0,8% соответственно (рис. 2). После блокирования Fc-фрагмента опсонизированного IgM на поверхности E. tarda приготовленными антителами скорость фагоцитоза опсонизированного E. tarda в mIgM + В-лимфоцитах периферической крови через 1, 2 или 3 ч составила 31,3. ± 1,0%, 39,9 ± 0,8% и 49,1 ± 0,6% соответственно, что было значительно ниже, чем у незаблокированных групп с 45,8 ± 0,7%, 51,9 ± 0,5% и 69,2 ± 0,6% соответственно (рис. 3).Флуоресцентная микроскопия показала, что среднее количество бактерий в каждом mIgM + В-лимфоците было больше 5 после фагоцитоза антисывороткой опсонизированных E. tarda , в то время как в контрольной группе было меньше 5, а доля фагоцитированных mIgM + (pha + /mIgM + ) В-лимфоцитов также было значительно выше, чем в контрольной группе. Когда Fc-фрагмент оспонизирующего IgM на поверхности E. tarda блокировался, количество фагоцитированных E.tarda в mIgM + B-лимфоцитах было значительно ниже, чем в группе опсонизации, и доля pha + /mIgM + B-лимфоцитов также была явно снижена по сравнению с группой опсонизации (рис. 4).

Рисунок 2 Анализ скорости фагоцитоза mIgM + В-лимфоцитов камбалы после инкубации с опсонизированным E . tarda с использованием сыворотки здоровых камбал и антисыворотки методом проточной цитометрии. (A–C) Скорость фагоцитоза mIgM + В-лимфоцитов после инкубации с E . с опозданием для 1 (A) , 3 (B) или 5 ч (C) . 1: Графики FSC/SSC для PBL. Графики рассеяния флуоресценции PBL, инкубированных с опсонизированным E . tarda с использованием сыворотки здоровой камбалы (2) и антисыворотки (3). 4: Скорости фагоцитоза mIgM + В-лимфоцитов и mIgM — лейкоцитов, суммированные из графиков рассеяния флуоресценции.Столбики погрешностей указывают стандартное отклонение трех биологических повторностей. Звездочки на столбиках представляют статистическую разницу скоростей фагоцитоза по сравнению с контрольной группой ( p < 0,05).

Рисунок 3 Анализ скорости фагоцитоза mIgM + В-лимфоцитов камбалы после опсонизации E . поздняя и блокировка Fc с помощью проточной цитометрии. (A–C) Скорость фагоцитоза mIgM + В-лимфоцитов после инкубации с E . с опозданием для 1 (A) , 2 (B) или 3 ч (C) . 1: Графики FSC/SSC для PBL. Графики рассеяния флуоресценции PBL, инкубированных с блокирующим Fc (2) и неблокированным (3) E . поздняя . 4: Скорости фагоцитоза mIgM + В-лимфоцитов и mIgM — лейкоцитов, суммированные из графиков рассеяния флуоресценции. Столбики погрешностей указывают стандартное отклонение трех биологических повторностей. Звездочки на столбиках представляют статистическую разницу скоростей фагоцитоза по сравнению с незаблокированной группой ( p < 0.05).

Рисунок 4 Анализ фагоцитарной способности mIgM + B-лимфоцитов после инкубации с по-разному обработанным E . поздняя с помощью флуоресцентной микроскопии. (A) Нефагоцитированный отрицательный контроль. (B, C) Опсонизация E . tarda с использованием сыворотки здоровой камбалы (B) и антисыворотки (C) . (D) Блокирование Fc антисыворотки, опсонизированной E . поздняя .1: окрашивание DAPI ядер клеток. 2: Маркировка FITC E . поздняя . 3: Иммунофлуоресцентное окрашивание mAb против IgM и Alexa Fluor ® 649 козьих антимышиных IgG. 4: Объедините изображения каждого флуоресцентного канала с увеличенными изображениями фагоцитированных mIgM + B-лимфоцитов. Стрелки указывают mIgM + B-лимфоцитов после фагоцитоза (Bar = 10 мкм).

Уровни внутриклеточных АФК в mIgM

+ В-лимфоциты после фагоцитоза

Проточная цитометрия показала, что 32.1 ± 0,7% mIgM + В-лимфоцитов имели более высокие внутриклеточные уровни АФК после фагоцитоза антисывороткой опсонизированных E. tarda , которые были значительно выше, чем в контрольной группе (23,0 ± 0,5%). Кроме того, когда Fc-фрагмент опсонизирующего IgM на поверхности E. tarda блокировался, 14,5 ± 0,4% mIgM + В-лимфоцитов имели высокие внутриклеточные уровни АФК после фагоцитирования обработанного E. tarda , которые были значительно ниже, чем у группы опсонизации с 23.9 ± 0,6% (рис. 5).

Рисунок 5 Анализ внутриклеточной активности АФК mIgM + В-лимфоцитов с помощью проточной цитометрии. (A) Инкубация с антисывороткой, опсонизированной E. tarda . (B) Инкубация с блокированным Fc антисывороткой, опсонизированной E. tarda , обработанной. A1 и B1: графики FSC/SSC PBL. A2 и B2: В-лимфоциты mIgM + были отобраны для анализа. Процент mIgM + В-лимфоцитов с высокими внутриклеточными уровнями АФК в сыворотке здоровых камбал (A3, B3) и группах антисывороток, опсонизированных (A4, B4).A5 и B5: Процент В-лимфоцитов mIgM + с высокими внутриклеточными уровнями АФК, суммированный из гистограммы флуоресценции. Столбики погрешностей указывают стандартное отклонение трех биологических повторностей. Звездочки на столбиках представляют статистическую разницу внутриклеточных уровней АФК по сравнению с контрольной группой ( p < 0,05).

Профили экспрессии генов, связанных с ADCP, в mIgM

+ B-лимфоцитах после фагоцитоза

Чистота отсортированных и несортированных с помощью магнитных шариков mIgM+ B-лимфоцитов из лейкоцитов периферической крови, определенная с помощью проточной цитометрии, составляет 98.4% и 21,4% соответственно, что вполне соответствовало наблюдениям с помощью флуоресцентной микроскопии и могло быть использовано для последующего эксперимента (рис. 6А, В). Результаты qRT-PCR показали, что уровни экспрессии FcγRII и Syk в mIgM + B-лимфоцитах прогрессивно повышались с увеличением времени фагоцитоза в группе опсонизации, тогда как FcγRIII прогрессивно снижался (Фигура 6C). Когда фрагмент Fc опсонизирующего IgM на поверхности E.tarda был заблокирован, уровни экспрессии FcγRII, FcγRIII и Syk в В-лимфоцитах mIgM + не менялись в зависимости от времени фагоцитоза (рис. 6D).

Рисунок 6 Анализ чистоты отсортированных mIgM + В-лимфоцитов и уровней экспрессии генов, связанных с ADCP, после их фагоцитоза. (А, В) Анализ процентного содержания mIgM + В-лимфоцитов в несортированных (А) и отсортированных (В) клетках с помощью ИФА и проточной цитометрии.A1 и B1: окрашивание DAPI ядер клеток. A2 и B2: Иммунофлуоресцентное окрашивание mAb против IgM и Alexa Fluor ® 649 козьих антимышиных IgG. A3 и B3: Объедините изображения каждого флуоресцентного канала, и стрелки указывают mIgM + B-лимфоцитов (Bar = 20 мкм). Гистограмма флуоресценции показывала процент mIgM + B-лимфоцитов (шкала M) в несортированных лейкоцитах (A4) и отсортированных mIgM + B-лимфоцитов (B4). (C, D) Анализ qRT-PCR уровней экспрессии генов, связанных с ADCP, в mIgM + B-лимфоцитах после инкубации с антисывороткой, опсонизированной (C) и Fc-блокированным E.tarda (D) соответственно. C1 и D1: FcγRII. C2 и D2: FcγRIII. C3 и D3: Сык. Столбики погрешностей указывают стандартное отклонение трех биологических повторностей. Звездочки на столбиках представляют статистическую разницу экспрессии генов по сравнению с контрольной группой ( p < 0,05).

Очистка рекомбинантного FcγRII (rFcγRII) и характеристики полученных антител против rFcγRII регион (остатки 202–224) (рис. 7А).FcγRII был экспрессирован в

E. coli (DE3) с использованием плазмидной системы pET-32a, и анализ SDS-PAGE показал отчетливую полосу 49,6 кДа после индукции изопропил-β-D-1-тиогалактозидом (IPTG) (рис. 7B, дорожка 2). ). После проведения очистки с помощью аффинной хроматографии Ni 2+ и способов поэтапной рефолдинга диализом был получен белок rFcγRII высокой чистоты (рис. 7B, дорожка 3). Более того, вестерн-блоттинг показал, что приготовленные кроличьи антитела против rFcγRII могут распознавать молекулу PBL 31,7 кДа, что согласуется с теоретической молекулярной массой FcγRII камбалы (рис. 7B, дорожка 4).

Рисунок 7 Анализ рекомбинантной экспрессии FcγRII и характеристик антител против rFcγRII. (A) Анализ домена FcγRII камбалы. Розовая линия, зеленый круг и синий прямоугольник представляют домен низкой сложности, домены IG и трансмембранную область соответственно. (B) SDS-PAGE и вестерн-блоттинг белка rFcγRII и полученных антител против rFcγRII. Дорожка M, маркер молекулярной массы; Дорожка 1, трансформированная E. coli без индукции IPTG; Переулок 2, трансформированный Е.coli , индуцированная IPTG; дорожка 3, очищенный белок rFcγRII; Дорожка 4, лизат mIgM + В-лимфоцитов, инкубированный с приготовленным антителом против rFcγRII.

Гены фагоцитарных ставок и фагоцитозные гены, связанные с фагоцитозом. Экспрессия MIGM

+ B Lymphotes Post FCγRII Блокировка

Флуоресцентная микроскопия

Флуоресцентная микроскопия показала, что в MIGM + b лимфоциты + B, а также на других типах MIGM — лейкоциты мембраны (Рисунок 8A).Когда FcγRII mIgM + B-лимфоцитов был заблокирован, скорость фагоцитоза опсонизированных антисывороткой E. tarda составляла 39,0 ± 0,5%, что было значительно ниже, чем у незаблокированной группы с 54,0 ± 0,8% (рис. 8B). После блокировки FcγRII результаты qRT-PCR показали, что по сравнению с неблокированной группой уровни экспрессии генов FcγRII, Syk и генов, связанных с фаголизосомами, оказались значительно сниженными, тогда как FcγRIII не показал существенных различий в mIgM + В-лимфоцитах. после фагоцитоза (рис. 9).

Рисунок 8 Характеристики распределения FcγRII и его влияние на mIgM + В-лимфоцитов ADCP. (A) IFA-анализ характеристик распределения FcγRII в PBL. A1: окрашивание DAPI ядер клеток. A2: Иммунофлуоресцентно окрашенные лейкоциты с mAb против IgM и Alexa Fluor ® 649 козьих антимышиных IgG. A3: Иммунофлуоресцентно окрашенные лейкоциты с кроличьими антителами против rFcγRII и козьими антикроличьими IgG Alexa Fluor ® 488.A4: Объедините изображения каждого флуоресцентного канала, и стрелки указывают на FcγRII + /mIgM + B-лимфоциты (Bar = 10 мкм). (B) Проточный цитометрический анализ скорости фагоцитоза FcγRII-заблокированных mIgM + B-лимфоцитов после инкубации с антисывороткой, опсонизированной E. tarda . B1: Графики FSC/SSC для PBL. B2: Совместная инкубация с FcγRII-блокированными PBL и антисывороткой, опсонизированной E. tarda . B3: Совместная инкубация с PBL и антисывороткой, опсонизированной E.поздняя . B4: Скорости фагоцитоза mIgM + В-лимфоцитов, суммированные по графикам рассеяния флуоресценции. Столбики погрешностей указывают стандартное отклонение трех биологических повторностей. Звездочки на столбиках представляют статистическую разницу скоростей фагоцитоза по сравнению с контрольной группой ( p < 0,05).

Рисунок 9 Уровни экспрессии ADCP-связанных генов (A) и связанных с фаголизосомами (B) в FcgRII заблокированных и разблокированных mIgM+ B-лимфоцитах после фагоцитоза.Столбики погрешностей указывают стандартное отклонение трех биологических повторностей. нс, никакой существенной разницы. Звездочки на столбиках представляют статистическую разницу экспрессии генов по сравнению с контрольной группой (p < 0,05).

Обсуждение

FcR является важным рецептором-модулятором, который широко экспрессируется на всех типах лейкоцитов и может опосредовать фагоцитоз (33, 34). В-клетки представляют собой важный класс иммунных клеток, обладающих способностью секретировать антитела, презентировать антигены и фагоцитировать (35), но исследования функции FcR в фагоцитозе В-клеток отсутствуют.В настоящем исследовании комплемент в антисыворотке камбалы был инактивирован водяной баней, а затем использован для опсонизации E. tarda . Это было сделано для того, чтобы избежать рецепторов комплемента, которые могли бы помешать функции, выполняемой FcR во время эксперимента (36). Мы обнаружили, что скорость фагоцитоза опсонизированной антисывороткой E. tarda лимфоцитами mIgM + B камбалы была значительно выше, чем в группе опсонизированной сыворотки здоровой камбалы. Точно так же скорость фагоцитоза IgM-опсонизированных клеток Aeromonas hydrophila клетками IgM + радужной форели была значительно выше, чем у неопсонизированной группы (4).Более того, после блокирования Fc-фрагмента IgM на опсонизированной поверхности E. tarda приготовленными антителами мы обнаружили, что скорость фагоцитоза и количество поглощенных бактерий в mIgM + В-лимфоцитах были значительно ниже, чем у незаблокированные группы. Эти результаты демонстрируют, что FcR играет ключевую роль в опосредовании фагоцитоза mIgM + В-лимфоцитов камбалы.

Среди всех типов FcR FcγRII играет важную роль в фагоцитозе фагоцитов у млекопитающих (37, 38).Мы обнаружили, что FcγRII экспрессируется на мембране В-клеток mIgM + камбалы, что согласуется с данными, полученными на В-клетках человека (39). Когда FcγRII mIgM + B-лимфоцитов блокировали специфическими антителами, их скорость фагоцитоза опсонизированных антисывороткой E. tarda значительно снижалась, что указывало на то, что белковый структурный домен FcγRII камбалы был аналогичен таковому у млекопитающих (40). ), поэтому они могут иметь одинаковые биологические функции.Предыдущие исследования показали, что FcγRII может усиливать фагоцитоз и продукцию фаголизосом в нейтрофилах и клетках яичника китайского хомячка (CHO) соответственно (41, 42). Мы также обнаружили, что сигнальные пути ADCP и образования фаголизосом в mIgM + B-лимфоцитах камбалы оба ингибировались после блокирования FcγRII. У млекопитающих FcγRIII состоит из двух семейств, FcγRIIIa и FcγRIIIb (43). FcγRIIIa является трансмембранным белком и в основном распределяется на моноцитах, макрофагах и NK-клетках.FcγRIIIb не имеет трансмембранного домена и в основном распределяется на нейтрофилах и базофилах (44). Однако до сих пор не было обнаружено ни одного подсемейства гена FcγRIII у костистых костей (45), и то же самое было обнаружено для FcγRIII у камбалы на основании последовательности генома. Интересно, что мы обнаружили, что FcγRIII экспрессировался в mIgM + B-лимфоцитах камбалы, которые отделялись от поверхности mIgM + B-лимфоцитов после фагоцитоза независимо от того, блокировался FcγRII или нет. Возможная причина заключается в том, что FcγRIII камбалы, как и FcγIIIb млекопитающих, не имеет трансмембранного структурного домена и легко сбрасывается с клеточной поверхности после стимуляции, а затем вызывает воспалительную реакцию, приводящую к подавлению его экспрессии в mIgM + В-лимфоцитах (46). , 47).Эти результаты показывают, что FcγRII, а не FcγRIII, играет важную роль в процессе ADCP mIgM + В-лимфоцитов камбалы.

Протеинкиназа тирозинкиназы Syk играет центральную роль в FcγR-опосредованном фагоцитозе в адаптивной иммунной системе (48). Мы обнаружили, что экспрессия Syk и FcγRII в mIgM + В-лимфоцитах камбалы значительно повышалась после FcR-опосредованного фагоцитоза. Точно так же материнские антитела, опсонизированные микроглией, могут усиливать фагоцитарные способности и повышать экспрессию Syk и FcγR в фагоцитах (49).Было также обнаружено, что экспрессия FcγRIII в mIgM + В-лимфоцитах постепенно снижается при длительной инкубации с опсонизированной антисывороткой E. tarda . Это свидетельствует о том, что FcγRIII сбрасывается с поверхности мембран mIgM + В-лимфоцитов при активации Fc-фрагментом. То же явление было также обнаружено в NK-клетках после стимуляции IgG-опсонизированными тромбоцитами (50). При блокировании Fc-фрагмента IgM на опсонизированной поверхности E. tarda приготовленными антителами уровни экспрессии FcγRII, FcγRIII и Syk в mIgM + В-лимфоцитах оставались неизменными с увеличением времени инкубации.Это указывает на то, что покоящийся FcR не может индуцировать активацию связанных с ADCP генов в mIgM + В-лимфоцитах (51, 52). Кроме того, выявлен достоверно более высокий уровень экспрессии FcγRII в mIgM + В-лимфоцитах периферической крови, чем в селезенке и головке почки, в то время как уровень экспрессии FcγRIII достоверно не отличался. Уровень экспрессии Syk был значительно выше в mIgM + В-лимфоцитах периферической крови и головки почки, чем в селезенке.Мы предполагаем, что фагоцитарная способность mIgM + В-лимфоцитов периферической крови значительно выше, чем в селезенке и головной почке камбалы. По совпадению, скорость фагоцитоза Lactococcus lactis mIgM + В-лимфоцитов периферической крови была значительно выше, чем скорость фагоцитоза селезенки и головки почки у L. japonicus (5). В совокупности эти результаты показывают, что FcγRII камбалы опосредует ADCP через Syk, тогда как FcγRIII редко оказывает влияние на ADCP в mIgM + В-лимфоцитах камбалы.

Респираторный взрыв был неспецифическим и защитным механизмом по отношению к патогенному микроорганизму фагоцитов, а также участвовал во врожденном иммунитете посредством продукции внутриклеточных АФК, опосредованной многокомпонентным ферментом НАДФН-оксидазой (53, 54). Предыдущее исследование показало, что внутриклеточные уровни АФК mIgM + В-лимфоцитов были значительно выше после фагоцитоза бактерий (7). Мы также обнаружили, что внутриклеточные уровни АФК mIgM + В-лимфоцитов были значительно выше после фагоцитоза опсонизированных антисывороткой Е.tarda по сравнению с контрольной группой. Кроме того, при блокировании Fc-фрагмента IgM на поверхности опсонизированных E. tarda приготовленными антителами внутриклеточные уровни АФК в mIgM + В-лимфоцитах после фагоцитоза значительно снижались. Эти результаты демонстрируют, что FcR-опосредованный фагоцитоз значительно усиливает врожденный иммунный ответ mIgM + B-лимфоцитов.

В заключение, FcR камбалы может усиливать способность к фагоцитозу, внутриклеточное бактерицидное действие и индуцировать экспрессию генов, связанных с ADCP, в mIgM + В-лимфоцитах.Кроме того, мы идентифицировали FcγRII как ключевой компонент в семействе FcR, который оказывает влияние на ADCP mIgM + В-лимфоцитов. Это исследование способствует нашему пониманию FcR-опосредованного фагоцитоза в костистых тканях mIgM + В-лимфоцитов, а также дает представление о функциях В-клеток во врожденном иммунитете.

Заявление о доступности данных

Наборы данных, представленные в этом исследовании, можно найти в онлайн-репозиториях. Названия репозитория/репозиториев и инвентарные номера можно найти в статье/дополнительных материалах.

Заявление об этике

Исследование на животных было рассмотрено и одобрено Комитетом по этике ухода за животными и экспериментов Океанического университета Китая.

Вклад авторов

XT и YH приложили усилия к идее и плану этого эксперимента, провели множество экспериментов и статистического анализа, подготовили и модифицировали эту статью. JX, XS и HC принимали участие в планировании исследования и помогали анализировать эксперименты и информацию. WZ разработал исследование, составил статью и предложил экспериментальное оборудование и пространство.Все авторы внесли свой вклад в статью и одобрили представленную версию.

Финансирование

Это исследование было поддержано Национальным фондом естественных наук Китая (31730101, 31872590, 31672685, 31672684 и 3142295), Фондом естественных наук провинции Шаньдун (ZR2019MC029), фондами фундаментальных исследований центральных университетов ( 2018–2015 гг.) и Тайшаньской научной программы провинции Шаньдун.

Конфликт интересов

Авторы заявляют, что исследование проводилось при отсутствии каких-либо коммерческих или финансовых отношений, которые могли бы быть истолкованы как потенциальный конфликт интересов.

Примечание издателя

Все претензии, изложенные в этой статье, принадлежат исключительно авторам и не обязательно представляют претензии их дочерних организаций, издателя, редакторов и рецензентов. Любой продукт, который может быть оценен в этой статье, или претензии, которые могут быть сделаны его производителем, не гарантируются и не поддерживаются издателем.

Ссылки

3. Gao J, Ma X, Gu W, Fu M, An J, Xing Y, et al. Новые функции мышиных клеток B 1: активные фагоцитарные и микробицидные способности. Eur J Immunol (2012) 42(4):982–92. doi: 10.1002/eji.201141519

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

4. Li J, Barreda DR, Zhang Y, Boshra H, Gelman AE, LaPatra S, et al. В-лимфоциты ранних позвоночных обладают мощными фагоцитарными и микробицидными способностями. Nat Immunol (2006) 7(10):1116–24. doi: 10.1038/ni1389

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

5. Ян С., Тан С., Шэн С., Син Дж., Чжан В.Разработка моноклональных антител против IgM морского окуня ( Lateolabrax Japonicus ) и анализ фагоцитоза с помощью mIgM+ лимфоцитов. Рыба Моллюски Immunol (2018) 78:372–82. doi: 10.1016/j.fsi.2018.04.042

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

6. Yang S, Tang X, Sheng X, Xing J, Zhan W. Разработка моноклональных антител против IgM подошвы полугладкого языка ( Cynoglossus Semilaevis ) и анализ фагоцитоза флуоресцентных микросфер mIgM+ лимфоцитами. Рыба Моллюски Immunol (2017) 66:280–8. doi: 10.1016/j.fsi.2017.05.019

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

7. Tang X, Yang S, Sheng X, Xing J, Zhan W. Транскриптомный анализ иммунного ответа mIgM+ B-лимфоцитов японской камбалы ( Paralichthys Olivaceus ) на Lactococcus Lactis In Vitro показал, что IFN I -3 может усилить их фагоцитоз. Фронт Иммунол (2019) 10:1622. doi: 10.3389/fimmu.2019.01622

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

8. Rønneseth A, Ghebretnsae DB, Wergeland HI, Haugland GT. Функциональная характеристика IgM+ B-клеток и адаптивный иммунитет у пинагора ( Cyclopterus Lumpus L ). Dev Comp Immunol (2015) 52(2):132–43. doi: 10.1016/j.dci.2015.05.010

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

9. Wu L, Kong L, Yang Y, Bian X, Wu S, Li B, et al. Влияние клеточной дифференцировки на фагоцитарную активность IgM+ B-клеток у костистых рыб. Фронт Иммунол (2019) 10:2225. doi: 10.3389/fimmu.2019.02225

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

12. Кимберли Р.П., Салмон Дж.Э., Эдберг Дж.К. Рецепторы для иммуноглобулина G. Молекулярное разнообразие и последствия для болезней. Arthritis Rheum (1995) 38(3):306–14. doi: 10.1002/art.1780380303

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

13. Тейлор А.И., Гулд Х.Дж., Саттон Б.Дж., Калверт Р.А. Первый член семейства птичьих Ig-подобных Fc-рецепторов сочетает в себе черты FcR и FCRL млекопитающих. Immunogenetics (2007) 59(4):323–8. doi: 10.1007/s00251-007-0195-9

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

14. Гусельников С.В., Белл А., Наякшин А.М., Роберт Дж., Таранин А.В. Сигнальные гомологи субъединиц FcRγ и TCRζ у амфибий Xenopus Laevis . Dev Comp Immunol (2003) 27(8):727–33. doi: 10.1016/s0145-305x(03)00055-7

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

15. Фуджики К., Шин Д.Х., Накао М., Яно Т.Молекулярное клонирование и анализ экспрессии карпа ( Cyprinus Carpio ) Интерлейкин-1β, субъединица γ рецептора Fc высокоаффинного иммуноглобулина E и сывороточный амилоид A. Fish Shellfish Immunol (2000) 10(3):229–42. doi: 10.1006/fsim.1999.0253

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

16. О’Дауд AM, Эллис AE, Secombes CJ. Связывание иммунных комплексов с лейкоцитами периферической крови атлантического лосося. Dev Comp Immunol (1998) 22(4):439–48.doi: 10.1016/s0145-305x(98)00018-4

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

17. Yoder JA, Orcutt TM, Traver D, Litman GW. Структурные характеристики рыбок данио-ортологов адаптерных молекул, ассоциированных с трансмембранными иммунными рецепторами. Ген (2007) 401 (1-2): 154–64. doi: 10.1016/j.gene.2007.07.014

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

18. Stafford JL, Wilson M, Nayak D, Quiniou SM, Clem LW, Miller NW, et al.Идентификация и характеристика гомолога FcR у экзотермических позвоночных, канального сома ( Ictalurus Punctatus ). J Immunol (2006) 177(4):2505–17. doi: 10.4049/jimmunol.177.4.2505

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

19. Strzelecka-Kiliszek A, Kwiatkowska K, Sobota A. Lyn и Syk Киназы последовательно участвуют в фагоцитозе, опосредованном FcγR. J Immunol (2002) 169(12):6787–94. doi: 10.4049/jиммунол.169.12.6787

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

23. Дёбель Т., Кунце А., Бабац Дж., Транкнер К., Людвиг А., Шмитц М. и др. FcγRIII (CD16) наделяет незрелые 6-сульфо-LacNAc-экспрессирующие дендритные клетки (SlanDC) уникальной способностью обрабатывать антигены в комплексе с IgG. Кровь (2013) 121(18):3609–18. doi: 10.1182/blood-2012-08-447045

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

24. Ben Mkaddem S, Aloulou M, Benhamou M, Monteiro RC.Роль FcγRIIIA (CD16) в IVg-опосредованной противовоспалительной функции. J Clin Immunol (2014) 34 Приложение 1:S46–50. doi: 10.1007/s10875-014-0031-6

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

25. Romee R, Foley B, Lenvik T, Wang Y, Zhang B, Ankarlo D, et al. Поверхностная экспрессия и функция CD16 NK-клеток регулируются дезинтегрином и металлопротеазой-17 (ADAM17). Кровь (2013) 121(18):3599–608. doi: 10.1182/blood-2012-04-425397

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

26.Tang X, Zhan W, Sheng X, Chi H. Иммунный ответ японской камбалы Paralichthys Olivaceus на белок внешней мембраны Edwardsiella Tarda . Рыба Моллюски Immunol (2010) 28(2):333–43. doi: 10.1016/j.fsi.2009.11.015

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

27. Бромейдж Э.С., Йе Дж., Оуэнс Л., Кааттари И.М., Кааттари С.Л. Использование стафилококкового белка А в анализе структурного разнообразия иммуноглобулинов костистых костей. Dev Comp Immunol (2004) 28(7-8):803–14.doi: 10.1016/j.dci.2003.12.001

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

28. Li Q, Zhan W, Xing J, Sheng X. Производство, характеристика и применимость моноклональных антител к иммуноглобулину японской камбалы ( Paralichthys Olivaceus ). Рыба Моллюски Immunol (2007) 23(5):982–90. doi: 10.1016/j.fsi.2007.03.008

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

29. Xing J, Ma J, Tang X, Sheng X, Zhan W.Характеристика субпопуляций CD4-1, CD4-2 и CD8β Т-клеток в лейкоцитах периферической крови, селезенке и головной почке японской камбалы ( Paralichthys Olivaceus ). Мол Иммунол (2017) 85:155–65. doi: 10.1016/j.molimm.2017.02.015

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

30. Zhu Q, Zhang M, Shi M, Liu Y, Zhao Q, Wang W, et al. В-клетки человека обладают активной фагоцитарной способностью и подвергаются иммунной активации при фагоцитозе Mycobacterium Tuberculosis . Иммунобиология (2016) 221(4):558–67. doi: 10.1016/j.imbio.2015.12.003

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

31. Tian H, Xing J, Tang X, Chi H, Sheng X, Zhan W. Идентификация и характеристика основного фактора транскрипции клеток Th2, T-Bet, внутри камбалы ( Paralichthys Olivaceus ). Фронт Иммунол (2021) 12:704324. doi: 10.3389/fimmu.2021.704324

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

32.Tang X, Qin Y, Sheng X, Xing J, Zhan W. Характеристика CD3+ T-лимфоцитов японской камбалы ( Paralichthys Olivaceus ) и их ответ после иммунизации инактивированным формалином Edwardsiella Tarda . Рыба Моллюски Immunol (2017) 63:220–7. doi: 10.1016/j.fsi.2017.02.024

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

35. Накашима М., Киношита М., Накашима Х., Хабу Ю., Миядзаки Х., Шоно С. и др. Pivotal Advance: Характеристика фагоцитарных В-клеток печени мышей в условиях врожденного иммунитета. J Leukoc Biol (2012) 91(4):537–46. doi: 10.1189/jlb.0411214

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

37. Ричардс Дж.О., Карки С., Лазар Г.А., Чен Х., Данг В., Дежарле Дж.Р. Оптимизация связывания антител с FcγRIIa усиливает фагоцитоз макрофагов опухолевых клеток. Mol Cancer Ther (2008) 7(8):2517–27. doi: 10.1158/1535-7163.MCT-08-0201

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

38. Харт С.П., Александр К.М., Дрансфилд И.Иммунные комплексы преимущественно связываются с FcγRIIA (CD32) на апоптотических нейтрофилах, что приводит к усиленному фагоцитозу макрофагами и высвобождению провоспалительных цитокинов. J Immunol (2004) 172(3):1882–7. doi: 10.4049/jimmunol.172.3.1882

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

39. Horejs-Hoeck J, Hren A, Mudde GC, Woisetschläger M. Ингибирование синтеза иммуноглобулина E через FcγRII (CD32) с помощью механизма, независимого от перекрестного связывания B-клеточного рецептора. Иммунология (2005) 115(3):407–15. doi: 10.1111/j.1365-2567.2005.02162.x

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

40. Патель К.Р., Робертс Дж.Т., Барб А.В. Множественные переменные при воздействии на клеточную поверхность лейкоцитов Fc γ-рецептор-зависимых механизмов. Фронт Иммунол (2019) 10:223. doi: 10.3389/fimmu.2019.00223

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

41. Worth RG, Mayo-Bond L, Kim MK, van de Winkel JG, Todd F 3rd, Petty HR, et al.Цитоплазматический домен FcγRIIA (CD32) участвует в образовании фаголизосом. Кровь (2001) 98(12):3429–34. doi: 10.1182/blood.v98.12.3429

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

42. Rivas-Fuentes S, García-García E, Nieto-Castañeda G, Rosales C. Рецепторы Fcγ демонстрируют разный потенциал фагоцитоза в нейтрофилах человека. Cell Immunol (2010) 263(1):114–21. doi: 10.1016/j.cellimm.2010.03.006

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

43.ван Зорге Н.М., ван дер Поль В.Л., ван де Винкель Дж.Г. Полиморфизмы FcγR: влияние на функцию, восприимчивость к заболеваниям и иммунотерапию. Тканевые антигены (2003) 61(3):189–202. doi: 10.1034/j.1399-0039.2003.00037.x

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

45. Fei C, Pemberton JG, Lillico DM, Zwozdesky MA, Stafford JL. Биохимическое и функциональное понимание интегрированной регуляции врожденных иммунных клеточных ответов рецепторами иммунного типа костистых лейкоцитов. Биология (Базель) (2016) 5(1):13. doi: 10.3390/biology5010013

Полный текст CrossRef | Google Scholar

46. Selvaraj P, Fifadara N, Nagarajan S, Cimino A, Wang G. Функциональная регуляция рецепторов Fc γ нейтрофилов человека. Immunol Res (2004) 29(1-3):219–30. doi: 10.1385/IR:29:1-3:219

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

47. Golay J, Da Roit F, Bologna L, Ferrara C, Leusen JH, Rambaldi A, et al. Гликоинженерное антитело к CD20 обинутузумаб активирует нейтрофилы и опосредует фагоцитоз через CD16B более эффективно, чем ритуксимаб. Кровь (2013) 122(20):3482–91. doi: 10.1182/blood-2013-05-504043

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

48. Shi Y, Tohyama Y, Kadono T, He J, Miah SMS, Hazama R, et al. Протеин-тирозин-киназа Syk необходима для поглощения патогенов при комплемент-опосредованном фагоцитозе. Кровь (2006) 107(11):4554–62. doi: 10.1182/blood-2005-09-3616

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

49. Иллоуз Т., Никола Р., Бен-Шушан Л., Мадар Р., Бирагын А., Окунь Э.Материнские антитела облегчают клиренс β-амилоида путем активации фагоцитоза, опосредованного Fc-рецептором Syk. Коммун Биол (2021) 4(1):329. doi: 10.1038/s42003-021-01851-6

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

50. Goodier MR, Lusa C, Sherratt S, Rodriguez-Galan A, Behrens R, Riley EM. Устойчивое опосредованное иммунным комплексом снижение экспрессии CD16 после вакцинации регулирует функцию NK-клеток. Фронт Иммунол (2016) 7:384. doi: 10.3389/fimmu.2016.00384

Аннотация PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

51. Lemke MM, McLean MR, Lee CY, Lopez E, Bozich ER, Rerks-Ngarm S, et al. Системный подход к выяснению персонализированных механистических сложностей активации рецептора антитело-Fc после вакцинации. Cell Rep Med (2021) 2(9):100386. doi: 10.1016/j.xcrm.2021.100386

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

52. DiLillo DJ, Ravetch JV. Взаимодействия Fc-рецептор регулируют как цитотоксические, так и иммуномодулирующие эффекторные функции терапевтических антител. Cancer Immunol Res (2015) 3(7):704–13. doi: 10.1158/2326-6066.CIR-15-0120

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

54. Гоберт А.П., Уилсон К.Т. Полиамино- и НАДФН-зависимая генерация АФК во время инфекции Helicobacter Pylori: замаскированное благословение. Free Radic Biol Med (2017) 105:16–27. doi: 10.1016/j.freeradbiomed.2016.09.024

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

Лимфоциты, инфильтрирующие опухоли яичников человека: Синергизм между фактором некроза опухоли α и интерлейкином 2 в образовании эффекторов CD8+ из инфильтрирующих опухоль лимфоцитов1 | Исследование рака

Опухолеинфильтрирующие лимфоциты (TIL) были выделены ферментативным расщеплением и градиентным центрифугированием из 18 карцином яичников человека.Эти клетки культивировали в полной среде с добавлением только рекомбинантного интерлейкина 2 (IL2) или рекомбинантного IL2 плюс рекомбинантный фактор некроза опухоли α (TNF-α), и определяли их рост и противоопухолевую цитотоксичность. TIL, культивируемый в присутствии IL2 плюс TNF-α (1000 единиц/мл каждого) в течение 6 дней, показал значительно более высокую цитотоксичность в отношении свежих аутологичных опухолевых мишеней, чем TIL, культивируемый только с IL2 (, например, , средние литические единицы/10 7 клеток для 8 препаратов TIL были 290 против 74, P < 0.05). Между этими культурами TIL не наблюдалось различий в поглощении [ 3 H]тимидина или активности естественных клеток-киллеров. В экспериментах по титрованию оптимальные синергетические концентрации IL2 и TNF-α были определены как 10 2 и 10 3 ЕД/мл соответственно. При использовании этих концентраций для культивирования TIL развивались эффекторные клетки, которые предпочтительно лизировали аутологичную опухоль и демонстрировали фенотип CD8 + (до 75% положительных). Однако цитотоксичность аутологичной опухоли, опосредованная этими культивированными TIL на 6-й день, была недолговечной.К 12 дню она была заменена активностью, подобной клеткам-киллерам, не ограниченной главным комплексом гистосовместимости, активируемой лимфокинами, опосредованной эффекторными клетками CD3 — CD56 + . Одновременно в этих культурах снижалась продукция γ-интерферона и интерлейкина-1. В отличие от TNF-α, анти-CD3-антитела в синергизме с IL2 усиливали пролиферацию TIL в 2–3 раза, но не повышали их цитотоксическую активность в отношении аутологичных опухолевых клеток-мишеней. Эти данные свидетельствуют о том, что TNF-α и IL2 взаимодействуют на ранних стадиях культивирования, индуцируя опухоль-реактивные эффекторы CD8 + , некоторые из которых могут быть специфичными для аутологичных опухолевых клеток яичников.Однако условия, необходимые для поддержания специфического ответа аутологичной опухоли в долгосрочных культурах TIL человека, еще предстоит определить.

1

При поддержке гранта IM27077 Американского онкологического общества для TLW. Это вторая статья в серии; см. ссылку 7.

уровней гематокрита | Анализ крови HCT на рак крови

Хотя определенные признаки и симптомы могут указывать на то, что у человека есть ИП, для подтверждения диагноза необходима серия тестов.Важно иметь точный диагноз, так как это помогает врачу: 

  • Оценить, как будет прогрессировать заболевание
  • Определить соответствующее лечение

Медицинский анамнез и медицинский осмотр

Обследование пациента с подозрением на ИП должно начинаться с подробного сбора анамнеза и физического осмотра.

История болезни должна включать сведения о пациенте:

  • Сердечно-сосудистые факторы риска
  • Перенесенные болезни и травмы
  • Текущие и прошлые лекарства и методы лечения
  • История тромба (сгустка крови) или геморрагического явления (потеря крови из поврежденных кровеносных сосудов)
  • Семейный анамнез 
  • Текущие симптомы

После сбора анамнеза врач проведет медицинский осмотр.Во время медицинского осмотра врач может:

  • Прослушивание сердца и легких пациента
  • Осмотр тела пациента на наличие признаков заболевания
  • Проверка различных органов тела

Анализы крови

  • Полный анализ крови (CBC) с дифференциальным:  Этот тест измеряет количество эритроцитов, лейкоцитов и тромбоцитов в образце крови. Он также измеряет количество богатого железом белка, который переносит кислород в эритроцитах, и процент цельной крови, состоящей из эритроцитов (гематокрит).Люди с PV имеют высокое количество эритроцитов. У них также часто бывают:
    • Повышение уровня гемоглобина
    • Повышение уровня гематокрита
    • Повышение количества лейкоцитов и тромбоцитов
  • Мачечный тест эритроцитов:  Эта процедура используется для измерения объема (количества) эритроцитов по отношению к объему плазмы (жидкости) в цельной крови. У пациентов с ИП может наблюдаться абсолютное увеличение массы эритроцитов. Этот тест нечасто проводится в Соединенных Штатах из-за высокой стоимости, сложности с получением соответствующих тестовых материалов и появления новых анализов крови, таких как молекулярное тестирование.
  • Химический профиль крови:  Этот анализ крови измеряет уровни определенных веществ, выделяемых в кровь органами и тканями организма. Эти вещества включают электролиты (такие как натрий, калий и хлорид), жиры, белки, глюкозу (сахар в крови), мочевую кислоту и ферменты. Результаты теста показывают, насколько хорошо у человека работают почки, печень и другие органы. Хотя этот тест не используется для диагностики ИП, если результаты показывают, что в крови присутствует аномальное количество определенного вещества, это может быть признаком заболевания или какой-либо другой проблемы со здоровьем.
  • Уровень эритропоэтина (ЭПО). Этот тест измеряет уровень эритропоэтина (ЭПО) в крови. ЭПО — это гормон, который в основном вырабатывается в почках для стимуляции образования новых эритроцитов. У людей с ИП высокое количество эритроцитов может снизить уровень ЭПО. Результаты тестов на ЭПО могут быть использованы для диагностики ИП.

Анализы костного мозга

Ваш врач может исследовать ваш костный мозг, даже если тест не требуется для диагностики ИП.

Тестирование костного мозга включает два этапа, которые обычно выполняются одновременно в кабинете врача или в больнице:

  • Аспирация костного мозга для взятия жидкого образца костного мозга
  • Биопсия костного мозга для удаления небольшого количества кости, заполненной костным мозгом

При ИП в костном мозге обнаруживается повышенное количество клеток крови и аномальное количество тромбоцитообразующих клеток, называемых «мегакариоцитами» в костном мозге.Патолог также исследует хромосомы клеток костного мозга, чтобы исключить другие заболевания крови.

Молекулярные тесты

Эти тесты ищут аномальные изменения в генах, хромосомах, белках или других молекулах в раковых клетках пациента. Они используются для диагностики и планирования лечения.

Полимеразная цепная реакция (ПЦР): Это очень чувствительный тест, используемый для обнаружения и измерения специфических генетических мутаций, которые слишком малы, чтобы их можно было увидеть под микроскопом.ПЦР-тестирование в основном амплифицирует (увеличивает) небольшие количества определенных фрагментов ДНК, чтобы их было легче обнаружить и измерить в образце клеток. Он ищет наличие или отсутствие специфических генных мутаций. ПЦР-тестирование может проводиться с образцами крови или костного мозга.

секвенирование ДНК: секвенирование ДНК относится к ряду различных лабораторных тестов, которые исследуют точную последовательность (порядок) ДНК. Сравнивая последовательность ДНК в раковых клетках с ДНК в нормальных клетках, врачи могут обнаружить генетические изменения, которые являются уникальными для раковых клеток и могут способствовать росту рака у пациента.Секвенирование ДНК может быть выполнено с образцами крови или костного мозга.

При подозрении на PV необходимо провести тестирование на мутацию гена JAK2. Мутация JAK2 V617F обнаруживается более чем у 95% пациентов с ИП. Если у пациента нет мутации JAK2 V617F, необходимо провести тестирование на наличие других мутаций. Около 2-3% пациентов с ИП имеют мутацию экзона 12 JAK2.

Для получения дополнительной информации о тестах костного мозга и других лабораторных тестах см. бесплатную публикацию LLS Understanding Lab and Imaging Tests.
 

Критерии диагностики истинной полицитемии

В 2016 году Всемирная организация здравоохранения опубликовала новые критерии диагностики ИП.

Для постановки диагноза требуется 3 больших критерия ИЛИ 2 больших критерия + 1 малый критерий.

Основные критерии 1.   Очень высокое количество эритроцитов, обычно идентифицируемое как A, B, или C ниже:

  • A. Повышенный уровень гемоглобина
    • Уровни гемоглобина выше 16,5 г/дл у мужчин
    • Уровень гемоглобина выше 16.0 г/дл у женщин
  • B. Повышенный уровень гематокрита
    • Гематокрит более 49 процентов у мужчин
    • Гематокрит более 48 процентов у женщин
  • C. Увеличение массы эритроцитов

Основные критерии 2. Биопсия костного мозга, показывающая аномально высокое количество клеток крови в костном мозге (так называемая «гиперклеточность») в зависимости от возраста человека. Это включает повышенное количество эритроцитов, лейкоцитов и тромбоцитов (состояние, называемое «панмиелоз») и пролиферацию зрелых мегакариоцитов (клеток, образующих тромбоциты), которые различаются по размеру и форме

.

Основные критерии 3. Наличие мутации JAK2V617F или JAK2 экзона 12 гена

Малый критерий: Очень низкий уровень эритропоэтина

 

Ссылки по теме

PayPerView: CD49d активируется в циркулирующих Т-лимфоцитах у пациентов, инфицированных HTLV-1

Джанаху Л.Т.A. a,b · Da Costa C.A. c · Vallinoto A.C.R. c · Santana B.B. c · Ribeiro-Lima J. a · Santos-Oliveira J.R. a,d,g · Chometon T.Q. h · Берто А.Л. e · Савино В. f,g · Да-Крус А.М. a,g · Гомеш-Сильва А. i

Принадлежности автора

a Междисциплинарная лаборатория медицинских исследований, Институт Освальдо Круза, Фонд Освальдо Круза, Рио-де-Жанейро, Бразилия
b Nucleus of Tropical Medicine, Федеральный университет штата Пара, Белен, Бразилия Университет Пара, Белен, Бразилия
d Центр прикладных биомедицинских наук, Федеральный институт образования, науки и технологий Рио-де-Жанейро, Рио-де-Жанейро, Бразилия
e Лаборатория иммунопаразитологии, Институт Освальдо Круза, Фонд Освальдо Круза , Рио-де-Жанейро, Бразилия
f Лаборатория исследований тимуса, Институт Освальдо Круза, Фонд Освальдо Круза, Рио-де-Жанейро, Бразилия
g Национальный научно-технический институт нейроиммуномодуляции, Институт Освальдо Круза, Фонд Освальдо Круза, Рио де-Жанейро, Бразилия
h Основной центр проточной цитометрии, Институт Освальдо Круза, Фонд Освальдо Круза n, Рио-де-Жанейро, Бразилия
i Лаборатория клинических исследований микобактерий, Национальный институт инфекционных заболеваний им. Эвандро Шагаса, Фонд Освальдо Круза, Рио-де-Жанейро, Бразилия

NAD-связанные механизмы дерепрессии генов и новая роль CtBP в персистирующей аденовирусной инфекции лимфоцитов | Virology Journal

  • Edwards KM, Thompson J, Paolini J, et al.Аденовирусные инфекции у детей раннего возраста. [Интернет]. Педиатрия. 1985; 76:420–4. Доступно по адресу: http://pediatrics.aappublications.org/content/76/3/420.

    ПабМед КАС ПабМед Центральный Google ученый

  • Garnett CT, Talekar G, Mahr JA, et al. Аденовирусы латентного вида С в тканях миндалин человека. Дж Вирол. 2009; 83: 2417–28.

    ПабМед Статья КАС ПабМед Центральный Google ученый

  • Лайон Т.Аденовирусные инфекции у иммунокомпетентных и иммунодефицитных пациентов. Clin Microbiol Rev. 2014; 27:441–62.

    ПабМед ПабМед Центральный Статья КАС Google ученый

  • Тхунаоджам А.Д., Балакришнан А., Мун А.Б. Обнаружение и молекулярное типирование аденовирусов человека, связанных с респираторными заболеваниями, в штате Керала. Jpn J Infect Dis. 2016;69:500–4.

    ПабМед Статья КАС ПабМед Центральный Google ученый

  • Garnett CT, Erdman D, Xu W, et al.Распространенность и количественный анализ ДНК аденовируса вида С в лимфоцитах слизистой оболочки человека. Дж Вирол. 2002; 76: 10608–16.

    ПабМед ПабМед Центральный Статья КАС Google ученый

  • ЭВАНС А.С. Латентные аденовирусные инфекции дыхательных путей человека. Am J Hyg. 1958; 67: 256–66.

    ПабМед КАС ПабМед Центральный Google ученый

  • HOGG JC.Роль латентных вирусных инфекций в развитии хронической обструктивной болезни легких и бронхиальной астмы. Am J Respir Crit Care Med. 2001; 164:S71–5.

    ПабМед Статья КАС ПабМед Центральный Google ученый

  • Косулин К., Гейгер Э., Вечей А. и др. Персистенция и реактивация аденовирусов человека в желудочно-кишечном тракте. Клиническая микробиология и инфекции. 2016;22:381.e1–8.

    Артикул КАС Google ученый

  • Косулин К., Беркович Б., Маттес С. и др.Выделение кишечного аденовируса перед аллогенной трансплантацией стволовых клеток является фактором риска инвазивной посттрансплантационной инфекции. ЭБиоМедицина. 2018;28:114–9.

    ПабМед ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Минарек М., Ганценмюллер Т., Мюллер-Хайне А. и др. Пациент, вирус и связанные с лечением факторы риска аденовирусной инфекции у детей после трансплантации стволовых клеток: результаты рутинной программы мониторинга.Трансплантация костного мозга Биол. 2014;20:250–6.

    ПабМед Статья ПабМед Центральный Google ученый

  • Wurzel DF, Mackay IM, Marchant JM, et al. Аденовирус вида С ассоциирован с хроническими гнойными заболеваниями легких у детей. Клин Инфекция Дис. 2014;59:34–40.

    ПабМед ПабМед Центральный Статья КАС Google ученый

  • Кампманн Б., Кубитт Д., Уоллс Т. и др.Улучшение исхода у детей с диссеминированной аденовирусной инфекцией после аллогенной трансплантации стволовых клеток. Бр Дж Гематол. 2005; 130: 595–603.

    ПабМед Статья КАС ПабМед Центральный Google ученый

  • DSouza A, Fretham C. Текущее использование и результаты трансплантации гемопоэтических клеток (HCT): Сводные слайды CIBMTR, 2018 [Интернет]. ЦИБМТР. Доступно по адресу: https://www.cibmtr.org, [цитировано 30 августа 2019 г.].

  • Waye MMY, Sing CW.Противовирусные препараты против аденовирусов человека. Фармацевтика. 2010;3:3343–54.

    Центральный пабмед Статья КАС Google ученый

  • Lee YJ, Prockop SE, Papanicolaou GA. Подход к аденовирусным инфекциям в условиях трансплантации гемопоэтических клеток. Curr Opin Infect Dis. 2017;30:377–87.

    ПабМед Статья ПабМед Центральный Google ученый

  • Fox JP, Brandt CD, Wassermann FE и др.Программа наблюдения за вирусами: постоянное наблюдение за вирусными инфекциями в столичных семьях Нью-Йорка. VI. Наблюдения за аденовирусными инфекциями: характер экскреции вируса, реакция антител, эффективность эпиднадзора, характер инфекций и связь с заболеванием. Am J Эпидемиол. 1969; 89: 25–50.

    ПабМед Статья КАС ПабМед Центральный Google ученый

  • Zhang Y, Huang W, Ornelles DA, et al. Моделирование латентности аденовируса в клеточных линиях лимфоцитов человека.Дж Вирол. 2010; 84: 8799–810.

    ПабМед ПабМед Центральный Статья КАС Google ученый

  • Маркел Д., Лам Э., Харсте Г. и др. Типозависимые модели персистенции аденовируса человека в клеточных линиях Т-лимфоцитов человека. J Med Virol. 2014; 86: 785–94.

    ПабМед Статья КАС ПабМед Центральный Google ученый

  • Кшивковски Т., Чифтци С., Ассадян Ф. и др.Одновременный одноклеточный In Situ анализ паттернов экспрессии ДНК и мРНК аденовируса человека типа 5 при литической и персистирующей инфекции. Дж Вирол. 2017;91:e00166–17.

    ПабМед ПабМед Центральный Статья КАС Google ученый

  • Furuse Y, Ornelles DA, Cullen BR. Постоянно инфицированные аденовирусом лимфоидные клетки экспрессируют микроРНК, полученные из вирусной РНК VAI и особенно РНК VAII. Вирусология. 2013; 447:140–5.

    ПабМед Статья КАС ПабМед Центральный Google ученый

  • Мурали В.К., Орнеллес Д.А., Гудинг Л.Р. и др. Белок смерти аденовируса (АДФ) необходим для литической инфекции лимфоцитов человека. Дж Вирол. 2014; 88: 903–12.

    ПабМед ПабМед Центральный Статья КАС Google ученый

  • Racioppi L, означает AR. Кальций/кальмодулинзависимая киназа IV в иммунных и воспалительных реакциях: новые пути для древнего путешественника.Тренды Иммунол. 2008; 29: 600–7.

    ПабМед Статья КАС ПабМед Центральный Google ученый

  • Гиберсон А.Н., Дэвидсон А.Р., Паркс Р.Дж. Хроматиновая структура ДНК аденовируса на протяжении всей инфекции. Нуклеиновые Кислоты Res. 2012;40:2369–76.

    ПабМед Статья КАС ПабМед Центральный Google ученый

  • Мацумото К., Окуваки М., Кавасе Х. и др. Стимуляция транскрипции ДНК фактором репликации из генома аденовируса в хроматин-подобной структуре.Дж. Биол. Хим. 1998; 270:9645–50.

    Артикул Google ученый

  • Окуваки М., Нагата К. Фактор-I, активирующий матрицу, ремоделирует структуру хроматина и стимулирует транскрипцию с матрицы хроматина*. Дж. Биол. Хим. 1998; 273:34511–8.

    ПабМед Статья КАС ПабМед Центральный Google ученый

  • Boyd JM, Subramanian T, Schaeper U, et al.Область на С-конце белка E1a аденовируса 2/5 необходима для ассоциации с клеточным фосфопротеином и важна для отрицательной модуляции опосредованной T24-ras трансформации, онкогенеза и метастазирования. EMBO J. 1993; 12: 469–78.

    ПабМед ПабМед Центральный Статья КАС Google ученый

  • Schaeper U, Boyd JM, Verma S, et al. Молекулярное клонирование и характеристика клеточного фосфопротеина, который взаимодействует с консервативным С-концевым доменом аденовируса E1A, участвующим в негативной модуляции онкогенной трансформации.Proc Natl Acad Sci U S A. 1995; 92:10467–71.

    ПабМед ПабМед Центральный Статья КАС Google ученый

  • Stankiewicz TR, Gray JJ, Winter AN, et al. С-концевые связывающие белки: центральные игроки в развитии и заболевании. Биомолекулярные концепции. 2014;5:489–511.

    ПабМед Статья КАС ПабМед Центральный Google ученый

  • Sewalt RGAB, Gunster MJ, van der Vlag J и др.С-концевой связывающий белок представляет собой репрессор транскрипции, который взаимодействует с определенным классом белков Polycomb позвоночных. Мол Селл Биол. 1999; 19: 777–87.

    ПабМед ПабМед Центральный Статья КАС Google ученый

  • Bellesis AG, Jecrois AM, Hayes JA и др. Сборка С-концевого связывающего белка человека (CtBP) в тетрамеры. Дж. Биол. Хим. 2018; 293:9101–12.

    ПабМед ПабМед Центральный Статья КАС Google ученый

  • Ши Ю., Савада Дж.-И., Суй Г. и др.Скоординированные модификации гистонов, опосредованные ко-репрессорным комплексом CtBP. Природа. 2003; 422: 735–8.

    ПабМед Статья КАС ПабМед Центральный Google ученый

  • Чжан К., Поршень Д.В., Гудман Р.Х. Регуляция функции корепрессора ядерным НАДН. Наука. 2002; 295:1895–7.

    ПабМед КАС ПабМед Центральный Google ученый

  • Кумар В., Карлсон Дж. Э., Оги К. А. и др.Транскрипция Corepressor CtBP представляет собой NAD+-регулируемую дегидрогеназу. Мол Ячейка. 2002; 10: 857–69.

    ПабМед Статья КАС ПабМед Центральный Google ученый

  • Мани-Теланг П., Сутриас-Грау М., Уильямс Г. и др. Роль связывания НАД и каталитических остатков в корепрессоре С-концевого связывающего белка. ФЭБС лат. 2007; 581:5241–6.

    ПабМед Статья КАС ПабМед Центральный Google ученый

  • Shen Y, Kapfhamer D, Minnella AM, et al.Биоэнергетическое состояние регулирует врожденные воспалительные реакции через транскрипционный корепрессор CtBP. Нац коммун. 2017: 1–13.

  • Дэн Ю, Ли Х, Инь Х и др. С-концевой связывающий белок 1 модулирует окислительно-восстановительный потенциал клеток посредством обратной регуляции MPC1 и MPC2 в клетках меланомы. Медицинский научный монит. 2018;24:7614–24.

    ПабМед ПабМед Центральный Статья КАС Google ученый

  • Пелка П., Аблэк Дж. Н.Г., Фонсека Г.Дж. и др.Внутреннее структурное нарушение аденовируса E1A: вирусный молекулярный узел, связывающий множество разнообразных процессов. Дж Вирол. 2008; 82: 7252–63.

    ПабМед ПабМед Центральный Статья КАС Google ученый

  • Брутон Р.К., Пелка П., Мапп К.Л. и др. Идентификация второго сайта связывания CtBP в консервативной области E1A аденовируса типа 5 3. J Virol. 2008; 82: 8476–86.

    ПабМед ПабМед Центральный Статья КАС Google ученый

  • Субраманиан Т., Чжао Л.Дж., Чиннадурай Г.Взаимодействие CtBP с аденовирусом Е1А подавляет иммортализацию первичных эпителиальных клеток и усиливает репликацию вируса при продуктивной инфекции. Вирусология. 2013; 443:313–20.

    ПабМед ПабМед Центральный Статья КАС Google ученый

  • Земке Н.Р., Берк А.Я. С-конец аденовируса E1A подавляет отсроченный противовирусный ответ и модулирует передачу сигналов RAS. Клеточный микроб-хозяин. 2017;22:789–800.e5.

    ПабМед ПабМед Центральный Статья КАС Google ученый

  • Субраманиан Т., Ла Регина М., Чиннадураи Г.Усиленная трансформация клеток, опосредованная онкогеном ras, и онкогенез мутантами аденовируса 2, лишенными С-концевой области белка E1a. Онкоген. 1989; 4: 415–20.

    ПабМед КАС ПабМед Центральный Google ученый

  • Subramanian T, Malstrom SE, Chinnadurai G. Необходимость C-концевой области аденовируса E1a для трансформации клеток в сотрудничестве с E1b. Онкоген. 1991; 6: 1171–3.

    ПабМед КАС ПабМед Центральный Google ученый

  • Коэн М.Дж., Юсеф А.Ф., Массими П. и др.Рассечение C-концевой области E1A переопределяет роли CtBP и других клеточных мишеней в онкогенной трансформации. Дж Вирол. 2013;87:10348–55.

    ПабМед ПабМед Центральный Статья КАС Google ученый

  • Чжао Л.Дж., Субраманиан Т., Чиннадураи Г. Изменения в С-концевом связывающем белке 2 (CtBP2) корепрессорного комплекса, индуцированные E1A, и модуляция транскрипционной активности E1A с помощью CtBP2. Дж. Биол. Хим. 2006; 281:36613–23.

    ПабМед Статья КАС ПабМед Центральный Google ученый

  • Чжао Л.Дж., Субраманиан Т., Чжоу Ю. и др. Ацетилирование p300 регулирует ядерную локализацию и функцию транскрипционного Corepressor CtBP2. Дж. Биол. Хим. 2006; 281:4183–9.

    ПабМед Статья КАС ПабМед Центральный Google ученый

  • Чжао Л.Дж., Субраманиан Т., Виджаялингам С. и др.PLDLS-зависимое взаимодействие E1A с CtBP: регуляция ядерной локализации CtBP и транскрипционных функций. Онкоген. 2007; 26:7544–51.

    ПабМед ПабМед Центральный Статья КАС Google ученый

  • Кляйн Г., Линдал Т., Джондал М. и др. Непрерывные линии лимфоидных клеток с характеристиками В-клеток (полученные из костного мозга), лишенные генома вируса Эпштейна-Барр и полученные из трех лимфом человека. Proc Natl Acad Sci.1974; 71: 3283–6.

    ПабМед Статья КАС ПабМед Центральный Google ученый

  • Bett AJ, Krougliak V, Graham FL. Последовательность ДНК делеции/вставки в ранней области 3 Ad5 dl 309. Virus Res. 1995; 39: 75–82.

    ПабМед Статья КАС ПабМед Центральный Google ученый

  • McNees AL, Mahr JA, Ornelles D, et al. Постинтернализационное ингибирование экспрессии генов аденовирусов и продукции инфекционных вирусов в линиях Т-клеток человека.Дж Вирол. 2004; 78: 6955–66.

    ПабМед ПабМед Центральный Статья КАС Google ученый

  • Ornelles DA, Gooding LR, Dickherber ML, et al Ограниченные, но стойкие изменения экспрессии клеточных генов в модели латентной аденовирусной инфекции отражаются в лейкозных клеточных линиях у детей. [Интернет]. Virology 2016; 494 IS -:67–77. Доступно по адресу: http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0042682216300356.

  • Ливак К.Дж., Шмитген Т.Д.Анализ данных об относительной экспрессии генов с использованием количественной ПЦР в реальном времени и метода 2-ΔΔCT. Методы. 2001; 25: 402–8.

    Артикул КАС Google ученый

  • Берк А. Аденовирусные промоторы и трансактивация Е1А. Анну Рев Жене. 1986; 20:45–79.

    ПабМед Статья КАС ПабМед Центральный Google ученый

  • Берк А.Дж. Аденовирусы. В: Knipe DM, Howley PM, редактор (ы).Вирусология Филдса, 6-е издание. Филадельфия, Пенсильвания: Липпинкотт Уильямс и Уилкинс; 2013. с. 1704–1731 гг.

  • Crisostomo L, Soriano AM, Mendez M, et al. Временная динамика экспрессии гена аденовируса 5 в нормальных клетках человека. ПЛОС Один. 2019;14:e0211192–18.

    ПабМед ПабМед Центральный Статья КАС Google ученый

  • Невинс Дж. Р., Гинзберг Х. С., Бланшар Дж. М. и др. Регуляция первичной экспрессии ранних единиц транскрипции аденовируса.Дж Вирол. 1979; 32: 727–33.

    ПабМед ПабМед Центральный КАС Google ученый

  • Логан Дж. С., Шенк Т. Транскрипционный и трансляционный контроль экспрессии гена аденовируса. Microbiol Rev. 1982;46:377–83.

    ПабМед ПабМед Центральный КАС Google ученый

  • Шипкова М., Виланд Е. Поверхностные маркеры активации лимфоцитов и маркеры клеточной пролиферации.Клин Чим Акта. 2012; 413:1338–49.

    ПабМед Статья КАС ПабМед Центральный Google ученый

  • Гай Кью, Джеймс К.Б.Л. Идентификация области гена аденовируса E1A, ответственной за индукцию промотором опухоли сложного эфира форбола. Биология клеточного развития in vitro. 2001; 37: 465–70.

    ПабМед Статья КАС ПабМед Центральный Google ученый

  • Бакбиндер Л., Мираллес В.Дж., Рейнберг Д.TPA может преодолевать потребность в EIa и совместно действовать синергетически, стимулируя экспрессию промотора аденовируса EIII. EMBO J. 1989; 8: 4239–50.

    ПабМед ПабМед Центральный Статья КАС Google ученый

  • Шарер К.Д., Барвик Б.Г., Янгблад Б.А. и др. Глобальное ремоделирование метилирования ДНК сопровождает эффекторную функцию CD8 Т-клеток. Дж Иммунол. 2013; 191:3419–29.

    ПабМед ПабМед Центральный Статья КАС Google ученый

  • Scharer CD, Bally APR, Gandham B, et al.Передовой край: доступность хроматина программирует память Т-клеток CD8. Дж Иммунол. 2017;198:2238–43.

    ПабМед ПабМед Центральный Статья КАС Google ученый

  • Акимова Т., Бейер У.Х., Лю Ю. и др. Гистоновые/протеиновые деацетилазы и Т-клеточный иммунный ответ. Кровь. 2012;119:2443–51.

    ПабМед ПабМед Центральный Статья КАС Google ученый

  • Бергер Н.А., Бергер С.Дж., Сикорский Г.В. и др.Амплификация пулов пиридиновых нуклеотидов в митоген-стимулированных лимфоцитах человека. Разрешение ячейки опыта. 1982; 137: 79–88.

    ПабМед Статья КАС ПабМед Центральный Google ученый

  • ван дер Кнаап Дж.А., Веррижзер С.П. Под прикрытием: контроль генов с помощью метаболитов и метаболических ферментов. Гены Дев. 2016;30:2345–69.

    ПабМед ПабМед Центральный Статья КАС Google ученый

  • Прусинкевич М.А., Мымрик Ю.С.Метаболическое перепрограммирование клетки-хозяина аденовирусной инфекцией человека. Вирусы. 2019;11:141–21.

    Центральный пабмед Статья КАС Google ученый

  • Сантидриан А.Ф., Мацуно-Яги А., Ритланд М. и др. Активность митохондриального комплекса I и баланс NAD+/NADH регулируют прогрессирование рака молочной железы. Джей Клин Инвест. 2013; 123:1068–81.

    ПабМед ПабМед Центральный Статья КАС Google ученый

  • Флинт Дж., Шенк Т.ВИРУСНЫЕ ТРАНСАКТИВИРУЮЩИЕ БЕЛКИ. Анну Рев Жене. 1997; 31: 177–212.

    ПабМед Статья КАС ПабМед Центральный Google ученый

  • Гудинг Л.Р., Акино Л., Дюрксен-Хьюз П.Дж. и др. Белок E1B 19000 молекулярной массы аденовирусов группы C предотвращает цитолиз фактора некроза опухоли клеток человека, но не клеток мыши. Дж Вирол. 1991;65:3083–94.

    ПабМед ПабМед Центральный КАС Google ученый

  • Gomez-Gutierrez JG, Nitz J, Sharma R, et al.Комбинированная терапия онколитическим аденовирусом и темозоломидом усиливает виротерапию рака легкого in vitro и in vivo. Вирусология. 2016; 487: 249–59.

    ПабМед Статья КАС ПабМед Центральный Google ученый

  • Блевинс М.А., Кузнецова Ю., Крюгер А.Б., и др. Небольшая молекула, NSC95397, ингибирует взаимодействие CtBP1-белок-партнер и опосредованную CtBP1 репрессию транскрипции. J Биомоль Экран. 2015;20:663–72.

    ПабМед Статья КАС ПабМед Центральный Google ученый

  • Rodríguez E, Ip WH, Kolbe V, et al.Гуманизированные мыши воспроизводят острую и персистентную аденовирусную инфекцию человека. J заразить дис. 2017;215:70–9.

    ПабМед Статья КАС ПабМед Центральный Google ученый

  • Greiner EF, Guppy M, Brand K. Необходим для пролиферации и индукции гликолитических ферментов, провоцирующих переход к гликолитической выработке энергии. Дж. Биол. Хим. 1994; 269:31484–90.

    ПабМед КАС ПабМед Центральный Google ученый

  • MacIver NJ, Michalek RD, Rathmell JC.Метаболическая регуляция Т-лимфоцитов. Анну Рев Иммунол. 2013; 31: 259–83.

    ПабМед ПабМед Центральный Статья КАС Google ученый

  • Хван Э.С., Сон С.Б. Никотинамид является ингибитором SIRT1 in vitro, но может быть стимулятором в клетках. Cell Mol Life Sci. 2017;74:3347–62.

    ПабМед Статья КАС ПабМед Центральный Google ученый

  • Чжан С., Лю Дж., Цао С.Метаболический контроль Т-клеточного иммунитета посредством эпигенетических механизмов. Селл Мол Иммунол. 2018;15:203–5.

    ПабМед Статья ПабМед Центральный Google ученый

  • Алмейда Л., Лохнер М., Берод Л. и др. Метаболические пути активации Т-клеток и дифференцировки клонов. Семин Иммунол. 2016;28:514–24.

    ПабМед Статья КАС ПабМед Центральный Google ученый

  • Чиннадураи Г.CtBP, нетрадиционный транскрипционный корепрессор в развитии и онкогенезе. Молекулярная клетка. 9: 213–24.

    ПабМед Статья КАС ПабМед Центральный Google ученый

  • Мэдисон Д.Л., Вирц Дж.А., Сисс Д. и др. Индуцированная никотинамидадениндинуклеотидом мультимеризация корепрессора CtBP1 зависит от переключения триптофана. Дж. Биол. Хим. 2013; 288:27836–48.

    ПабМед ПабМед Центральный Статья КАС Google ученый

  • Субраманиан Т., Чиннадураи Г.Ассоциация деацетилаз гистонов класса I с транскрипционным корепрессором CtBP. ФЭБС лат. 2003; 540: 255–8.

    ПабМед Статья КАС ПабМед Центральный Google ученый

  • Sollerbrandt K, Chinnadurai G, Svensson C. Связывающий домен CtBP в аденовирусном белке E1A контролирует CR1-зависимую трансактивацию. Нуклеиновые Кислоты Res. 1996; 24: 2578–84.

    Артикул Google ученый

  • Эберт О., Финке С., Салахи А. и др.Апоптоз лимфоцитов: индукция методами переноса генов. Джин Тер. 1997; 4: 296–302.

    ПабМед Статья КАС ПабМед Центральный Google ученый

  • Zhao Y, Zheng Z, Cohen CJ, et al. Высокоэффективная трансфекция первичных Т-лимфоцитов человека и мыши с использованием электропорации РНК. Мол Тер. 2005; 13:151–9.

    ПабМед ПабМед Центральный Статья КАС Google ученый

  • Линь Х, Сун Б, Лян М и др.Противоположная регуляция Corepressor CtBP путем SUMOylation и связывания PDZ. Мол Ячейка. 2003; 11:1389–96.

    ПабМед Статья КАС ПабМед Центральный Google ученый

  • Бергман Л.М., Моррис Л., Дарли М. и др. Роль уникального N-концевого домена CtBP2 в определении субклеточной локализации белков семейства CtBP. BMC клеточная биология. 2006;7.

    ПабМед ПабМед Центральный Статья КАС Google ученый

  • Criqui-Filipe P, Ducret C, Maira S-M, et al.Net, отрицательный Ras-переключаемый TCF, содержит второй домен ингибирования, CID, который опосредует репрессию посредством взаимодействия с CtBP и деацетилирования. EMBO J. 1999; 18:3392–403.

    ПабМед ПабМед Центральный Статья КАС Google ученый

  • Алпатов Р., Мунгуба Г.К., Катон П. и др. Ядерный спекл-ассоциированный белок Pnn/DRS связывается с корепрессором транскрипции CtBP и снимает опосредованную CtBP репрессию гена E-кадгерина.Мол Селл Биол. 2004; 24:10223–35.

    ПабМед ПабМед Центральный Статья КАС Google ученый

  • Zheng Y, Stamminger T, Hearing P. Белки семейства E2F/Rb опосредуют индуцированную интерфероном репрессию аденовирусной непосредственной ранней транскрипции, что способствует персистирующей вирусной инфекции. PLoS Патог. 2016;12:e1005415–24.

    ПабМед ПабМед Центральный Статья КАС Google ученый

  • Коюнку Э., Будаева Х.Г., Митева Ю.В. и др.Сиртуины являются эволюционно законсервированными факторами рестрикции вирусов mBio. 2014;5:e02249–14.

  • Матиас А.А., Серра А.Т., Сильва А.С. и др. Остатки португальского виноделия как потенциальный источник природных антиаденовирусных агентов. Int J Food Sci Nutr. 2010;61:357–68.

    ПабМед Статья КАС ПабМед Центральный Google ученый

  • Picchione KE, Bhattacharjee A. Замалчивание вирусного генома с помощью нейронального сиртуина 1.J Нейро-онкол. 2010;17:184–188.

    Google ученый

  • Небензаль-Шарон К., Шарф Р., Амер Дж. и др. Взаимодействие с PARP-1 и ингибирование парилирования способствуют ослаблению передачи сигналов о повреждении ДНК аденовирусным белком E4orf4. Дж Вирол. 2019; 93: 738–20.

    Google ученый

  • Гибсон Б.А., Краус В.Л. Новое понимание молекулярных и клеточных функций поли(АДФ-рибозы) и PARP.

    • Добавить комментарий

    Ваш адрес email не будет опубликован.