показания к применению, проведение процедуры в домашних условиях
Электрофорез является физиотерапией, применяемой при различных патологиях. Суть процедуры состоит в том, что медицинское средство проникает сквозь слизистые в кожу при помощи электрического тока. Для того чтобы провести электрофорез, нужен определенный аппарат и лекарство Лидаза, которое увеличивает проницаемость капилляров. Основным плюсом этой методики является то, что ее можно применять не только в поликлинике, но и в домашних условиях.
Суть процедуры
Благодаря электрофорезу с Лидазой происходит электролитическая диссоциация, благодаря которой в водном растворе вещества разлагаются на ионы. Частицы начинают хаотично перемещаться и попадать в организм больного. В лимфе или в крови лекарственное средство начинает постепенно проникать и всасываться в тканях организма. Максимальное количество вещества распределяется в необходимой области, например, в зоне ушей.
Сила тока, возраст пациента, состояние больного, размер ионов и концентрация лекарственного вещества влияют на уровень всасывания.
Благодаря действию электрофореза происходит успокаивающая, обезболивающая, противовоспалительная активность. В период проведения процедуры:
- системы и органы насыщаются биологическими добавками;
- нормализуется питание тканей организма и крови;
- улучшается кровоток.
Основные преимущества
Основным преимуществом при использовании электрофореза является то, что распределение медицинского вещества происходит безболезненно, медленно, эффективно. На проведение процедуры необходимо намного меньше дозировки, чем при внутривенном или внутримышечном введении.
Применение вещества в большой дозе не влияет на эффективность терапии.
Процедура не имеет побочных явлений и неприятных ощущений в момент ее проведения. В отличие от внутривенного или внутримышечного введения кожный покров остается целым. Именно из-за этих достоинств специалисты назначают физиолечение для терапии разнообразных заболеваний. Этот доступный и простой метод снижает дозировку вводимого лекарства и уменьшает риск развития побочных явлений.
Показания и противопоказания
Электрофорез с Лидазой показан при любых воспалительных заболеваниях уха, в том числе и при экссудативном отите. Как и иные медицинские процедуры, электрофорез имеет показания, ограничения и противопоказания к применению. На них необходимо обращать внимание и учитывать при проведении процедуры в домашних условиях.
Противопоказаниями к процедуре являются такие состояния, как:
- тяжелая форма воспалительных процессов;
- наличие опухолей;
- гиперчувствительность к элементам, входящим в состав лекарственного средства;
- порок сердца;
- бронхиальная астма;
- внутреннее кровотечение;
- период вынашивания ребенка и грудного вскармливания;
- нарушение свертываемости крови.
При электрофорезе применяют ток разного типа:
- флюктуирующий;
- выпрямленный;
- гальванический;
- диадинамический.
Только лечащий врач определяет и назначает вид тока.
При проведении электрофореза с Лидазой на уши в домашних условиях необходимо заранее проконсультироваться со специалистом.
Воздействие электрофореза
Терапия ушных заболеваний электрофорезом с Лидазой практически не вызывает побочных явлений и является безболезненной процедурой. Чаще всего среди ЛОР-заболеваний встречаются воспалительные процессы в ухе. При назначении электрофореза предотвращается развития осложнений в виде:
- менингита;
- поражения сосудов;
- сепсиса;
Кроме того, ускоряется выздоровление пациента. Если воспалительный процесс в ушах проходит в острой форме, то назначают эндоназальные терапии, то есть введение электрофореза с Лидазой через нос. При хроническом виде заболеваний показан эндауральный тип лечения.
В период процедуры колебания проходят только через человеческое тело, при этом оказывается влияние на внутренние органы и ткани организма. Из-за такого воздействия повышается кровоток и начинают активно вырабатываться лейкоциты.
Довольно высокой эффективностью обусловлено частое назначение электрофореза с Лидазой при ушных патологиях.
Если есть большое количество гноя или запущенная форма болезней в ухе, срок терапии составляет не менее 14 сеансов.
Методика проведения
Методика проведения процедуры как в медицинских учреждениях, так и в домашних условиях не отличается:
- Для начала специалист назначает определенные подготовительные мероприятия индивидуально каждому пациенту в зависимости от степени воспаления ушей.
- Лидазу разводят в дистиллированной воде. Получается лечебный раствор с концентрацией 2–4%. Если препарат не растворяется в воде, то используют диметилсульфоксид.
- Пациенту необходимо находиться в лежачем положении в период проведения процедуры.
- Электроды предварительно смачивают в терапевтическом растворе и прикладывают их или вставляют в ушной канал. Если электрод нужно зафиксировать, то применяют специальные фиксирующие повязки. 15 мА является максимальной силой электрического тока. Основным плюсом методики считается то, что пациент не ощущает дискомфорта.
- Длительность процедуры составляет не более 20 минут.
Электрофорез с Лидазой на уши можно провести не только в поликлинике, но и в домашних условиях. Пациент должен соблюдать инструкцию по применению и следовать указаниям специалиста.
с Лидазой или йодистым калием?
До сих пор эффективность физиотерапии остается под вопросом, так как данный метод лечения и восстановления требует немало времени на получение первых результатов. Соответственно, ни врач, ни пациент на первых порах не могут утверждать, что проблема решается.
Электрофорез также относится к одной из разновидностей физиотерапии. Чтобы получить результат от его применения, больному придется пройти 10-15 сеансов в зависимости от сложности решаемой проблемы.
Например, лечение отита уха требует не менее 12 сеансов, но результат стоит того. Зачастую проводят электрофорез с калием или магнием, а также существует разновидность процедуры с Лидазой. С ее помощью излечивают не только уши, горло, но еще и ряд гинекологических заболеваний.
Принцип действия электрофореза
Вся суть данной процедуры заключается в сочетании воздействия на пораженный орган фармацевтического препарата и постоянного тока. Данный метод позволяет достичь нужной концентрации лекарственного препарата, введенного в организм больного, непосредственно в месте очага заболевания. Таким образом, лекарство начинает действовать быстрее, излечение наступает за более короткий промежуток времени.
Введение препарата в случае использования электрофореза осуществляется через протоки потовых и сальных желез. Естественно, даже такое направленное действие не может задерживать лекарство исключительно в очаге заболевания, небольшое количество распространяется по организму через кровь и лимфу.
Дозирование процедуры происходит в соответствии с подбором оптимальной для каждого отдельного случая силы тока, а также состояния кожи.
Ученые доказали, что оптимальный период времени, за который происходит накопление лекарства в очаге болезни — от 10 минут до получаса. Среди преимуществ использования электрофореза стоит выделить:
- существенное усиление действия лекарственных препаратов;
- отсутствие болевых ощущений или дискомфорта во время проведения процедуры;
- не требует нарушения целостности кожи или слизистых оболочек;
- возможность использования во время обострения заболевания или в периоды ремиссии;
- позволяет сэкономить на лекарственных средствах.
Процедура электрофорез основывается на ряде закономерностей, именно их берут во внимание врачи, планирующие курс лечения или реабилитации. Среди основных закономерностей, важно знать о том, что:
- Объем препарата, который поступил в организм под действием постоянного тока, пропорционален количеству электричества, прошедшего через ткани человеческого тела.
- Лучше проникает в ткани катионная форма действующего вещества, а не анионная.
- Скорость введения лекарства и достижения ним очага заболевания определяется заряд и размер ионов — чем выше данные показатели, тем медленнее происходит процесс введения.
Данные правила являются постулатами, на которых годами держится качество проведения такой важной для здоровья человека процедуры как электрофорез. Пренебрежение одним из них в процессе составления курса лечения может привести к снижению эффективности проведения процедуры и даже нанести непоправимый вред здоровью человека.
к оглавлению ↑Методика проведения процедуры
Реализуется электрофорез с использованием подвижных или стационарных электродов. Важно на протяжении всего цикла процедур сохранять одинаковую полярность активных электродов с нанесенными на них лечебными средствами. Дело в том, что такие изменения могут нарушать процесс передачи в ткани человеческого организма препарата, из-за чего общая эффективность данного типа физиотерапии будет существенно ниже ожидаемой.
В процедуре обязательно участвуют положительно и отрицательно заряженные электроды — анод и катод. Для удобства их распознавания катод обычно окрашивают в черный, а анод в красный цвет.
Также существует разделение на пассивные и активные электроды.
У активного меньшая площадь соприкосновения с поверхностью кожи, поэтому его используют для воздействия непосредственно на больной участок, а пассивный располагают в приближенной к очагу зоне. Данную методику называют двуполярным электрофорезом.
Между активным электродом и поверхностью кожи, на которую он накладывается, размещаются гидрофильные прокладки, заранее пропитанные лекарственным препаратом. Эти прокладки зачастую выполняются из марли и по размерам должны быть немного больше электрода, чтобы он не выходил за ее пределы и не касался незащищенных кожных покровов.
Для лечения болезней ушей используется методика электрофореза, при которой электрод помещается в нос или в ухо. При этом больной не должен ощущать дискомфорта, только легкое покалывание. Если во время процедуры возникает неприятное жжение или болезненные ощущения, врачу следует как можно быстрее уменьшить плотность тока, передаваемого от аппарата коже пациента.
Ученые доказали, что именно укладка электрода в уши — это совершенно новый метод лечения ЛОР-заболеваний, имеющий эффективность, которая в разы выше, чем при реализации чрескожного метода. В данном случае именно электрофорез с Лидазой позволит в кратчайшие сроки избавить пациентов от отитов, синуситов и других серьезных заболеваний верхних дыхательных путей.
Продолжительность курса физиотерапии и непосредственно каждой процедуры определяется типом использующегося лекарственного препарата. Средства с электролитическими свойствами разводятся обычной дистиллированной водой. Если же растворение веществ в составе препарата происходит медленно и дистиллята для этого недостаточно, может быть использован этиловый спирт.
к оглавлению ↑Особенности электрофореза с Лидазой
Эта разновидность физиотерапевтической процедуры также встречается в медицинской литературе под названием гальванотерапия или ионофорез. С ее помощью достигается максимальное воздействие на очаг заболевания.
Введение препарата осуществляется настолько точно и исключительно на участки, которые требуют воздействия. Можно не беспокоиться о сопутствующих поражениях слизистых и кожи, которые возможны при стандартной форме процедуры.
Также подобное лечение уха, горла или носа Лидазой минимизирует риск проявления индивидуальных реакций организма на медицинский препарат. Более того, зачастую используются минимальные дозировки, так как электрофорез — методика, благодаря которой все лекарство до капли будет доставлено в требующую лечения зону организма. Процесс же выведения препарата остается неизменно продолжительным, поэтому воздействие на организм Лидазой будет продолжаться достаточно долго, что положительно скажется на процессе выздоровления.
Почему для такой процедуры пользуются именно Лидазой? В ее основе находятся гиалуронидазы — вещества, основная работа которых заключается в расщеплении гиалуроновой кислоты.
Соответственно, Лидаза способна усиливать проницаемость тканей кожи и сосудов, а также улучшать ток жидкостей в них. Благодаря этому проникновение лекарственного препарата во время процедуры в уши, нос или горло происходит значительно быстрее, что защищает пациента от продолжительного воздействия на его организм постоянного тока.
Главный плюс использования Лидазы — физиологичность средства, что минимизирует риск возникновения аллергических реакций у человека даже в тех случаях, когда проводится длительная терапия. Помимо лечения ЛОР-заболеваний уха, горла или носа электрофорез с Лидазой часто используется в гинекологической сфере для избавления от спаек в трубах матки, отсутствие лечения которых может стать причиной развития бесплодия у женщин.
Многие врачи рекомендуют удалять такие спайки хирургическим путем, но все чаще в современных клиниках женщинам предлагается решение данной проблемы путем физиотерапии — электрофореза с Лидазой. Проходить подобную физиотерапию придется на протяжении длительного времени, но метод в разы безопаснее хирургического вмешательства.
Электрофорез — это безболезненное решение по избавлению от гинекологических проблем без возможности рецидива. Под воздействием постоянного тока, рубцы в матке размягчаются и сглаживаются, после чего образование новых, даже в воспаленных участках матки, невозможно.
В случаях лечения уха Лидазой эффективность процедуры в разы ниже по сравнению с результатами в гинекологии. Электрофорез препятствует загущению жидкостей в ухе. Но на этом действие терапии завершается, а для полноценного лечения излишки жидкостей из уха все же необходимо вывести. Противопоказаний к данной медицинской манипуляции нет, ее могут назначить по показаниям даже маленьким детям, страдающим от отита. Также эта процедура будет эффективна для детей, требующих лечения дисплазии тазобедренного сустава.
Противопоказание к использованию этой разновидности физиотерапии – наличие астмы, любого инфекционного или онкологического заболевания в острой форме, а также высокой температуры.
При любой другой клинической картине возможность использования данной разновидности физиотерапии стоит оговаривать с лечащим врачом. Он же подбирает и оптимальную продолжительность курса, и объемы используемого лекарственного препарата.
ФИЗИОТЕРАПИЯ ЛОР ОРГАНОВ » Лор-клиника «ЛОР-ПРАКТИКА» в Алматы, услуги врача ухо-горло-носа недорого для детей и взрослых
Основные задачи кабинета физиотерапии.
Физиопроцедуры проводятся в соответствии с назначением врача. Проведение лечебных, восстановительных и профилактических мероприятий с применением физических факторов:
в КЛИНИКЕ ЛОР ПРАКТИКА в городе Алматы физиокабинеты оснащены передовыми физиоаппаратами
Большой биоптрон свето лечение .
Используется наиболее полезная часть света (полярная), которая стимулирует естественные процессы оздоровления организма. Оказывает улучшение кровотока ,тем самым способствует быстрому восстановлению тканей , уменьшает чувство боли , стимулирует механизмы организма.
Пари-синус
Является эффективным лечением экссудативных средних отитов ,острых и хронических риносинуситов (гайморитов)различной этиологии (аллергической ,вирусной, бактериальной).
Конструктивной особенностью прибора является пульсирующая подача аэрозоля, создающая условия для эффективного проникновения лекарственного препарата в полости придаточных пазух носа, а также через слуховую трубу в среднее ухо. Одновременно увлажняются и обрабатываются противовоспалительным средствами оболочки носа, носовых пазух и среднего уха ,уменьшается вязкость секрета ,происходит регенерация ресничек мерцательного эпителия , нормализуется дренажная функция. Предварительно при гнойном синусите проводится этап санации.
Во время процедуры необходимо создать отрицательное давление (вакуум)в полости носа. Для этого в одну половину носа вставляют окклюдор с подачей аэрозоля, а другую половину носа полностью закрывают и во время процедуры просим пациента делать глотательные движения или произносить звук КУ_КУ или 1,2,3.
Выполняется процедура перемещения по Проетцу (кукушка)или ЯМИК ,что позволяет эвакуировать патологический секрет из воспалительных пазух носа . По эффективности сочетание процедур перемещения по Проетцу и Пари-синуса не уступает пункционному (с применением прокола) лечению острого не осложненного синусита (гайморита). Процедура безболезненна и выполняется у детей старше3 лет.
Ингаляционная терапия – это быстрый и эффективный способ лечения нижних дыхательных путей (гортань, бронхи ) эффект противовоспалительный ,противоотечный, муколитический.
Преимущество: действует местно непосредственно на слизистую оболочку нижних дыхательных путей.
УльтразвукBTL –такая разновидность физиотерапевтических процедур ,как ультразвуковая терапия ,вот уже много лет успешно используется при лечении всевозможных ЛОР- заболеваний .Это лечение необыкновенно эффективно при отитах и ринитах ,ларингитах и тонзиллитах ,бронхитах и бронхиальной астме. Использование ультразвука «запускает»ряд сложных физических и химических процессов в организме ,в результате которых.
Меняется чувствительность нервных рецепторов
Клеточные мембраны становятся более проницаемыми
Происходит нормализация pH крови
Ускоряются процессы новых молекул
В результате бережного микромассажа тканей и клеточных структур ускоряются процессы рассасывания и выведения из организма естественным путем кровоизлияний и инфильтратов и.т.д.
Лечение при помощи ультразвука позволяет снять спазм и успокоить боль ,препятствует распространению воспалительного процесса ,а так же оказывает общетонизирующее действие на организм .
Ультразвук применяется с 2-х летнего возраста.
Дети до 14лет интенсивность до0,4Вт/см.кв от3-5
Взрослые интенсивность -0,5Вт/см.кв от5-10
Не применяют при t— тела ,АГ-3 ст. и.т.д.Беременность(1-й триместр) заболевания щитовидной железы,онкозаболевания
Лазерное излучение (Инфракрасный)— это электромагнитное излучение. Оказывает Противовоспалительное ,иммуностимулирующее ,регенеративное действие. Воздействие лазерного луча на ЛОР- органы снимают боль ,воспаление ,активирует местный иммунный ответ. Лазерный луч проникает в ткани на глубину 1,5 см. Улучшает капиллярное кровообращение ,восстанавливает поврежденные клетки сосудов ,усиливает обменный процесс.
Лазерное излучение-это воздействие на очаг воспаления монохромным пучком света определенной длины волны. От длины волны , мощности облучения зависит и эффект лазера- от терапевтического противовоспалительного до применения в оперативном лечении. Лазеротерапия как метод лечения существует более 40лет и за это время доказал свою эффективность в самых различных областях медицины ,в том числе ,в отоларингологии ,и продолжает развиваться и совершенствоваться . Лазерное излучение ,проникая в ткани на глубину 1,5см , усиливает обменные процессы ,активирует местный иммунитет ,стимулирует крово и лимфообращение ,оказывает противомикробное действие .
Запишитесь на прием онлайн
Без очередей и длительного ожидания, в удобное для вас время к любому врачу
УФО – ультрафиолетовое облучение (Солнышко)— оказывает бактерицидное действие. УФО вызывает гибель микробов как на поверхности раны ,так и в очагах воспаления . Так же оказывает противогрибковое , иммуностимулирующее ,метаболическое действие. УФО применяют (нос ,зев ,ухо ,ХГУ, пяточки)
Нагреваем 5мин- с 1мин ,последующие дни+15сек
Уфо применяют (нос ,зев,ХГУ,уха ,пяточки)
Нагреваем 5мин процедура длится 1мин ,а в последующие +15сек
Галоингалятор Галонеб– настольная соляная пещера
Для большей доступности применения гало-спелеотерапии (лечения в условиях соляных пещер) компания разработала метод индивидуальной галоингаляционной терапии, где для доставки аэрозоля в дыхательные пути используется настольный галоингалятор «Галонеб» («соляная пещера на Вашем столе»). Настольный галоингалятор «Галонеб™» предназначен для лечения и профилактики заболеваний органов дыхания с помощью сухого высокодисперсного аэрозоля хлорида натрия, моделирующего лечебный микроклимат соляной пещеры. Аэродисперсная среда образуется в камере галоингалятора и подается пациенту через трубку, соединенную с загубником или маской. Галоаэрозоль в своем составе имеет преимущественно респирабельную (более 90% состава) фракцию, обеспечивает два режима производительности и три временных режима.
Область применения:
- Восстановительная терапия
- Болезни органов дыхания (острый рецидивирующий бронхит, пневмония, хронический необструктивный и обструктивный бронхит, ХОБЛ, бронхиальная астма, бронхоэктазы, муковисцидоз, поллиноз и др.)
- ЛОР-патология (вазомоторный и аллергический ринит, аденоит, риносинусопатология, синуситы, фарингиты)
- Бронхиальная гигиена
- Курение. Производственные и атмосферные поллютанты. Частые ОРВИ. Поллиноз
- Профилактика
- ОРВИ. Респираторный аллергоз
Применяется в пульмонологии, аллергологии, оториноларингологии, педиатрии, для оснащения больниц, поликлиник, реабилитационных и восстановительных центров.
Записаться на консультацию к врачам клиники Лор Практика в городе Алматы вы можете по телефону
Консультация оториноларинголога
| Консультация оториноларинголога первичная | 7 800 тг |
| Консультация оториноларинголога повторная | 6 500 тг |
| Осмотр | 4 500 тг |
Электрофорез в медцентре ОНМЕД
Электрофорез в физиотерапии представляет собой медицинскую процедуру, основанную на сочетании постоянного тока с действиями лекарственных препаратов. Сегодня в медицине применимы несколько различных видов данной процедуры, с использованием разнообразной силы тока:
· диадинамический;
· постоянный (гальванический)
· синусоидальный модульный;
· выпрямленный;
· флюктуирующий.
Процедура электрофорезпроводится для поступления различных препаратов в организм, без инъекций и глотания таблеток. Эта методика лечения, являясь неотъемлемой частью физиотерапевтических процедур, завоевала устойчивые позиции.
Проникая в организм в основном через потовые железы, лекарство оказывает непосредственное влияние на зону воздействия, а также через лимфоток и кровоток распространяется к внутреннем органом
Применение электрофореза
Довольно часто процедуру электрофореза назначают в качестве дополнительного лечения при комплексной терапии. Она позволяет излечиться от многих заболеваний, связанных с нервной, сердечно-сосудистой, а также дыхательной системой. Показаниями для назначения могут послужить всевозможные сердечные и сосудистые патологии, при которых, с помощью электрических импульсов, в организм вводится кальций, а к примеру, применение йода способствует устранению глубоких рубцов, являющихся результатом травм или же хирургических операций. Методика электрофорезапозволяет излечиться от гайморита, отита, гипертонии, мигрени, цистита и даже патологии глаз. Процедура отлично помогает снять нервное расстройство и восстановить сон, вылечить ожоги, ушибы и растяжения связок. В косметологии, при помощи электрофореза, активно борются с целлюлитом и проводят омолаживающие процедуры.
Проведение электрофореза
Продолжительность процедуры занимает не более получаса, а длительность курса минимум 10 дней. Учитывая возраст и состояние больного, врач индивидуально подбирает необходимые препараты п длительность проведения процедур. Сегодня в продаже появилось огромное количество приборов для самостоятельного лечения. Однако, здоровье у каждого человека одно поэтому рисковать ним не стоит. Все сеансы лечения электрофорезомпроводятся профессиональными медработниками, имеющими представление о процедуре и высшее медицинское образование.
Провести качественно и профессионально процедуру электрофореза можно в медицинском центре «ОМЕД», который расположен по адресу: г. Москва, ВАО, (Ивановское, Измайлово, Гольяново) м. Щелковская, Первомайская, Новогиреево, Измайловская 7-я Парковая улица, дом 19.
физиотерапия, средний и экссудативный отит
Физиотерапевтическое лечение является самым безопасным воздействием на организм по сравнению с другими методиками. Задачи физиотерапии купировать воспаление, снимать отек, устранять боль и восстанавливать слух.
Физиотерапия при отите назначается в качестве монотерапии в индивидуальном порядке или идет в комплексе с другими видами лечения. Прежде чем рассмотреть особенности аппаратного лечения, поговорим вкратце об воспаления уха.
Содержание статьи
Отит органа слуха
Отит – это общее определение, подразумевающее ушные воспалительные заболевания. Начинается воспалительный процесс с постоянной ноющей боли в ухе. Неприятные ощущения имеют нарастающий характер, они сопровождаются слабостью, повышением температуры, головной болью, заложенностью и шумом в ушах. Узнать как снять боль в ухе можно тут.
Возникает процесс, как правило, на фоне инфекции попавшей в ухо из верхних дыхательных путей. Именно слуховая труба проводит болезнетворные возбудители в орган слуха. Также, причиной может выступить неправильная чистка уха, аллергия или частый контакт с водой.
Процедуры используемые в лечении
Классифицируют отит в зависимости от его нахождения. Бывает отит наружного, внутреннего и среднего уха. Чтобы поставить точный тип заболевания, доктор должен провести осмотр уха, и определить в каком отделе органа слуха происходят функциональные нарушения.
Если оставить появление отита без внимания, то он может принять более агрессивную форму, сопровождающуюся выходом гноя. Осложнение образуется из-за воспаления и распирает полость среднего уха, вызывая стреляющую боль. Болевые ощущения уменьшаются, если гной прорывается через барабанную перепонку и вытекает наружу.
Если вовремя обратиться к ЛОР-врачу и выявить причины отита на ранних стадиях, можно предотвратить воспаление внутреннего уха.
Физиотерапия при отите: самые эффективные процедуры
Проводить лечение отита должен только врач, после точной постановки диагноза и определения первопричины возникновения недуга. Попутно с медикаментозным лечением, специалисты ставят физиотерапевтические процедуры для больных всех возрастных групп.
Для купирования, регресирования или стабилизации отита выписывают:
- низкоинтенсивную ультравысокочастотную терапию;
- высокоинтенсивную сантиметровую терапию;
- красную и инфракрасную лазеротерапию;
- ультразвуковую терапию;
- локальную коротковолновую УФ-терапию;
- электрофорез антибактериальных препаратов.
Какие аппаратные вылечивающие воспаленное ухо существуют
Применение многих методик ведет к противовоспалительному, бактериостатическому, противоотечному, антиспастическому, регенеративному и сосудорасширяющему эффекту. Физиотерапия при отите среднего уха, подбирается для каждого пациента индивидуально. Здесь вы можете посмотреть какие существуют болезни среднего уха.
На что опирается врач при выборе физиопроцедур:
- пол и возраст обратившегося;
- психофизическое состояние;
- истории болезни и анамнез болеющих;
- длительность и стадию болезни;
- особенности патологии заболевания;
- тяжесть протекания заболевания.
Помните, самостоятельно определить точный диагноз не удастся, следовательно, самолечение без одобрения специалиста может закончиться плачевно.
Разновидностей физиотерапевтических процедур немало, их делят по оказываемому эффекту на три группы: стимулирующие, очищающие, согревающие. Рассмотрим каждую группу физиопроцедур отдельно.
Выбирать и назначать процедуру должен только врач
Очищающие методики
Когда требуется чистка слухового прохода, назначают эти физиотерапевтические терапии:
- Промывание уха. Процесс осуществляют только при гнойной форме отита. Промывание происходит теплой водкой или перекисью водорода, только с разрешения доктора. Процедуру делают до начала закапывания слухового органа. Как и чем проводят промывание можно прочитать тут. Проведение терапии без разрешения доктора может обернуться перфорацией перепонки и привести к ухудшению слуха.
- Продувание уха. Делают только при среднем отите, чтобы восстановить проходимость евстахиевой трубы. Проводит терапию только врач, если человек не страдает заболеванием дыхательных путей. Эта терапия на фоне воспаления слизистой носа или горла может перенести инфекцию в слуховой орган. Узнать как правильно продувать уши смотрите здесь.
Стимулирующие процедуры
Эти процедуры направлены на снятие отеков и нормализации кровотока:
- Магнитотерапия. Применение низкочастотного магнитного поля снимает отечность, повышает тонус венул, запускает лимфодренажные процессы.
- Пневмомассаж. Являет собой поочередный натиск воздушными потоками разного давления. Разные массы создаются специальным устройством, но можно проделывать терапию самостоятельно дома, нагоняя воздушные потоки руками на воспаленное ухо.
- Диадинамотерапия токами. Волны повышают кровоток и востанавливают движение слуховых косточек.
- Амплипульстерапия. Делают воздействие синусоидальных токов на пораженное ухо. Ток производит сокращение мышц, стабилизирует кровоток, убирает отечность и выводить застойные элементы из тканей.
Пневмомассаж
Согревающие методики
К физиотерапевтическим процедурам этой группы относятся:
- Соплюкс. Происходит воздействие светом, при помощи лампы УФО, помещённой в рефлектор. При отите прогревание осуществляют лампой, мощностью 200—300 em. Во время общего воздействия рефлектор закрепляют в метре от больного.
- УВЧ. Назначают при остром хроническом отите, когда происходит обострение. На орган слуха производят воздействие высокочастотным электромагнитным полем с определенной частотой. Вовремя УВЧ-терапии тепло проникает в ткани, где клетки его вбирают и преобразовывают в собственную тепловую энергию. УВЧ терапию ставят с особой осторожностью, так как она способствует образованию жидкости в полости среднего уха.
- Электрофорез при отите дает возможность заносить в ткани медикаменты: сульфат цинка и антибиотики. Так, организм напрямую получает достаточное количество препарата, чем сводит к минимуму развитие побочных эффектов.
Сегодня при отите наиболее распространена терапия Электрофорез. Эта процедура совершенно новый метод лечения ЛОР-заболеваний, дающая эффект в разы выше, нежели чем остальные терапевтические процедуры.
Аппарат электрофореза
Так как электрофорез позволяет в кратчайшие сроки устранить синусит, отит и другие серьезный заболевания, то ему стоит уделить отдельное внимание.
Лекарственный электрофорез
Как вы поняли, эта терапия с помощью электрического тока проводит лекарственные препараты сквозь кожу. Особенность процедуру заключается в сниженной доле концентрации лекарства введённого в организм пациента.
Введенные препараты начинают усваиваться в несколько раз быстрее. Выбор дозы назначается исходя из особенностей каждого отдельного случая. Метод терапии базируется на процессе электрической диссоциации, то есть лекарство разделяется в дистиллированной воде на частицы, имеющие электрический заряд.
Когда растворение препарата на ионы происходит очень медленно, воду меняют на этиловый спирт. Далее, частицы препарата под действие тока переносятся под кожный покров и всасываются в кровь.
Электрофорез при отите у детей и взрослых не должен вызывать дискомфорта, а также жжения. При процедуре характерно лишь легкое покалывание. Если есть болезненные ощущения нужно сообщить об этом врачу с целью уменьшения плотности тока, передаваемого от аппарата к больному.
Проведение физиопроцедуры
Длительность курса и каждой процедуры определяется типом назначенного лекарства. Например, при лечении экссудативного отита назначают многие процедуры, но самой эффективной выступает именно этот вид воздействия. Электрофорез при экссудативном отите вводит в организм стероидные гормональные лекарства и протеолитические ферменты (муколитики).
Обычно побочные эффекты идут из-за аллергической реакции на вводимый препарат. Может также остаться гиперемия, после снятия прокладки, но она проходит быстро. Чтобы негативных последствий не было важно полностью соблюдать технику проведения физиотерапевтической процедуры.
Заключение
Отит является довольно серьезным заболеванием, самолечение и бесконтрольный прием лекарственных средств недопустимо. Воспаление уха без адекватного лечения может нанести существенный вред здоровью, поэтому нужно довериться специалисту.
При лечении отита доктор назначит необходимые процедуры, которые проводятся амбулаторно. Но чтобы исключить риск возникновения заболевания нужно проводить профилактические меры. Они заключаются в тщательном высушивании слухового прохода после контакта с водой и правильной чистке уха от серы.
Электрофорез и проколотые ушки у ребенка
Функциональная диагностика и УЗИ
Дудин
Михаил Михайлович
Кузнецова
Екатерина Андреевна
Карпочев
Максим Викторович
Баранова
Юлия Викторовна
Фроловская
Людмила Викторовна
Базарнова
Евгения Васильевна
Басаков
Кирилл Сергеевич
Муртазалиева
Айна Абдулаевна
Рентгенология
Кивасев
Станислав Александрович
Нечаев
Валентин Александрович
Басарболиев
Алексей Викторович
Тихонова
Валерия Сергеевна
Мухин
Андрей Андреевич
Васильева
Юлия Николаевна
Шульц
Евгений Игоревич
Звездина
Дарья Максимовна
Андрианова
Вера Николаевна
Гончар
Анна Павловна
Бунак
Марк Сергеевич
Масри
Амир Гази
Терапия
Горбачева
Елена Владимировна
Карданова
Ольга Дмитриевна
Шашкова
Татьяна Валерьевна
Комиссаренко
Ирина Арсеньевна
Кускунова
Евгения Александровна
Михейкина
Ирина Васильевна
Ахкямова
Мария Альбертовна
Физиотерапия
Родина
Елена Вячеславовна
Хан
Иннокентий Евгеньевич
Кардиология
Горбачева
Елена Владимировна
Карданова
Ольга Дмитриевна
Шашкова
Татьяна Валерьевна
Комиссаренко
Ирина Арсеньевна
Ветрова
Зарема Давлетовна
Андреев
Дмитрий Александрович
Сапожникова
Ольга Алексеевна
Аудиология и слухопротезирование
Паукова
Марина Владимировна
Колтышева
Екатерина Борисовна
Левина
Юлия Викторовна
Неврология и мануальная терапия
Замерград
Максим Валерьевич
Небожин
Александр Иванович
Иванова
Татьяна Андреевна
Екушева
Евгения Викторовна
Толстенева
Александра Игоревна
Новиков
Сергей Александрович
Лабораторные услуги
Дерматология и трихология
Шуляк
Ирина Степановна
Массаж
Ермуш
Станислав Геннадьевич
Эндокринология
Бахтеева
Ирина Владимировна
Аллергология-иммунология
Стационар
Гнелица
Николай Викторович
Добролюбов
Евгений Евгеньевич
Антоненко
Дмитрий Валерьевич
Сагалович
Михаил Абрамович
Флебология
Даньков
Дмитрий Васильевич
Косметология
Шуляк
Ирина Степановна
Гепатология
Комиссаренко
Ирина Арсеньевна
Комкова
Эльвира Равиловна
Гинекология
Душкина
Ирина Александровна
Горский
Сергей Леонидович
Егорова
Елена Анатольевна
Афанасьев
Максим Станиславович
Баранова
Юлия Викторовна
Фроловская
Людмила Викторовна
Проктология
Мормышев
Вячеслав Николаевич
Бабаджанян
Арутюн Радионович
Педиатрия
Варенкова
Ольга Владимировна
Поддо
Галина Николаевна
Небожин
Александр Иванович
Харина
Дарья Всеволодовна
Маркина
Елена Александровна
Строк
Ирина Викторовна
Болучевский
Дмитрий Николаевич
Фроловская
Людмила Викторовна
Малышева
Ольга Дмитриевна
Шафоростова
Екатерина Васильевна
Толстенева
Александра Игоревна
Маргиева
Диана Анатольевна
Цибиков
Илья Владимирович
Криворотько
Михаил Сергеевич
Верещагин
Лев Владиславович
Кибизова
Лаура Георгиевна
Щербакова
Елена Михайловна
Мирончикова
Юлия Владимировна
Эндоскопия
Мардачев
Олег Александрович
Хайдурова
Татьяна Константиновна
Бабаджанян
Арутюн Радионович
Центр травматологии и ортопедии
ЛОР (оториноларингология)
Боклин
Андрей Кузьмич
Варенкова
Ольга Владимировна
Марковская
Наталья Геннадьевна
Харина
Дарья Всеволодовна
Мирошниченко
Андрей Петрович
Коршунова
Наталья Александровна
Малышева
Ольга Дмитриевна
Джафарова
Марьям Зауровна
Гастроэнтерология
Комиссаренко
Ирина Арсеньевна
Комкова
Эльвира Равиловна
Урология-андрология
Долженок
Андрей Николаевич
Болучевский
Дмитрий Николаевич
Маргиева
Диана Анатольевна
Шамов
Денис Алексеевич
Шарунов
Вячеслав Викторович
Стоматология. Терапия
Бабкина
Екатерина Сергеевна
Сизова
Елизавета Игоревна
Хирургия
Трофимова
Ольга Викторовна
Кипарисов
Владислав Борисович
Маргиева
Диана Анатольевна
Терехин
Алексей Алексеевич
Мещеряков
Виталий Львович
Психотерапия
Поддо
Галина Николаевна
Офтальмология
Миронкова
Елена Александровна
Паршунина
Ольга Алексеевна
Верещагин
Лев Владиславович
Кибизова
Лаура Георгиевна
Щербакова
Елена Михайловна
Центр головокружения и нарушения равновесия
Паукова
Марина Владимировна
Замерград
Максим Валерьевич
Колтышева
Екатерина Борисовна
Мельников
Олег Анатольевич
Иванова
Татьяна Андреевна
Травматология и ортопедия
Герасимов
Денис Олегович
Цибиков
Илья Владимирович
Криворотько
Михаил Сергеевич
Николаев
Антон Валерьевич
Загородний
Николай Васильевич
Шнайдер
Лев Сергеевич
Ильченко
Георгий Петрович
МРТ Ingenia 3.0T
Кивасев
Станислав Александрович
Нечаев
Валентин Александрович
Басарболиев
Алексей Викторович
Тихонова
Валерия Сергеевна
Мухин
Андрей Андреевич
Васильева
Юлия Николаевна
Шульц
Евгений Игоревич
Звездина
Дарья Максимовна
Бунак
Марк Сергеевич
Масри
Амир Гази
Компьютерная томография
Кивасев
Станислав Александрович
Нечаев
Валентин Александрович
Басарболиев
Алексей Викторович
Тихонова
Валерия Сергеевна
Мухин
Андрей Андреевич
Васильева
Юлия Николаевна
Шульц
Евгений Игоревич
Звездина
Дарья Максимовна
Бунак
Марк Сергеевич
Масри
Амир Гази
Маммография
Кивасев
Станислав Александрович
Басаков
Кирилл Сергеевич
Муртазалиева
Айна Абдулаевна
Гончар
Анна Павловна
Денситометрия
Кивасев
Станислав Александрович
Нечаев
Валентин Александрович
Басарболиев
Алексей Викторович
Тихонова
Валерия Сергеевна
Мухин
Андрей Андреевич
Звездина
Дарья Максимовна
Нефрология
Маркина
Елена Александровна
Центр нефрологии
Детская стоматология
Стоматология. Хирургия
Кулиш
Александр Александрович
Стоматология. Ортопедия
Богословский
Владимир Александрович
Захарченко
Александр Валериевич
Диагностика COVID-19
Маммология
Басаков
Кирилл Сергеевич
Муртазалиева
Айна Абдулаевна
Запиров
Гаджимурад Магомедович
Абрамович
Марк Семенович
Online-консультация врача от 1490 ₽
Паукова
Марина Владимировна
Варенкова
Ольга Владимировна
Душкина
Ирина Александровна
Карданова
Ольга Дмитриевна
Марковская
Наталья Геннадьевна
Шашкова
Татьяна Валерьевна
Поддо
Галина Николаевна
Комиссаренко
Ирина Арсеньевна
Иванова
Татьяна Андреевна
Маркина
Елена Александровна
Бахтеева
Ирина Владимировна
Строк
Ирина Викторовна
Коршунова
Наталья Александровна
Малышева
Ольга Дмитриевна
Герасимов
Денис Олегович
Толстенева
Александра Игоревна
Даньков
Дмитрий Васильевич
Шуляк
Ирина Степановна
Абрамович
Марк Семенович
Депозитная система
Служба помощи на дому
Слащева
Ольга Михайловна
Коршунова
Наталья Александровна
Ахкямова
Мария Альбертовна
Медицинские справки
Стоматология. Имплантология
Кулиш
Александр Александрович
МРТ открытого типа
Кивасев
Станислав Александрович
Нечаев
Валентин Александрович
Басарболиев
Алексей Викторович
Тихонова
Валерия Сергеевна
Мухин
Андрей Андреевич
Васильева
Юлия Николаевна
Шульц
Евгений Игоревич
Звездина
Дарья Максимовна
Бунак
Марк Сергеевич
Масри
Амир Гази
Центр маммологии
Стоматология. Ортодонтия
Шафоростова
Екатерина Васильевна
Ревматология
Ушакова
Мария Анатольевна
Старовойтова
Майя Николаевна
Вакцинация от COVID-19
Центр алгологии
Физиотерапия при нейросенсорной тугоухости Текст научной статьи по специальности «Клиническая медицина»
импотенции является углубление процессов охранительного торможения, успокаивающее действие, стимуляция защитных сил организма. Для устранения патологических доминантных соотношений в центральной нервной системе необходимо создать новый, более сильный очаг возбуждения, поэтому целесообразно воздействовать физическими факторами на обширные кожные зоны. При лечении кортикальной импотенции назначают гальванизацию по Щербаку и лекарственный электрофорез брома на воротниковую зону и зону пояса. Возможно воздействие на данные зоны и другими физическими факторами: это УВЧ, э.м. ДМВ и СМВ, ультрафиолетовое обучение, озокеритовые, грязевые, нафталановые аппликации. На протяжении года проводят 2-3 курса лечения с интервалом в 3-4 месяца. Из водных процедур наиболее эффективны разливные виды ванн: ароматические (хвойные, с настоем трав и цветов), минеральные (хлоридно-натриевые), газовые (углекислые, сульфидные, кислородные, жемчужные), лекарственные (йодо-бромные). Показаны также различные виды душей с постепенным снижением температуры воды до 22-29°. При непереносимости электролечения и водных процедур, назначают массаж воротниковой зоны и спины. Мужчинам с кортикальной формой импотенции показано санаторно-курортное лечение на климатических курортах в нежаркое время года. Обязательными элементами комплексного лечения являются лечебная физкультура, спортивные игры, лечебный туризм, пешеходные прогулки.
При спинальной форме импотенции эффективными методами лечения являются воздействия физическими факторами, на кожные рецепторы соответствующих рефлекторных спинальных центров эрекции и эякуляции (пояснично-крестцовая область). Наибольший эффект оказывает назначение синусоидальных модулированных токов (СМТ). Проведение этого лечения способствует восстановлению нарушенной копулятивной функции. Назначение интерференционных токов улучшает периферическое кровообращение, повышает биоэлектрическую активность, функциональную лабильность и электровозбудимость нервно-мышечного аппарата. При спинальной форме импотенции показано также назначение гальванизации зоны трусов по Щербаку и воздействие ультразвуком на пояснично-крестцовую область.
При нейрорецепторной форме импотенции наиболее физиологической методикой является СМТ-электростимуляция предстательной железы, проводимая через прямую кишку. СМТ вызывает возбуждение рецепторного аппарата железы, улучшает кровообращение и оказывает противовоспалительный эффект, тем самым способствует выраженной стимуляции спинальных центров эрекции и эякуляции и восстановлению половой функции. Из бальнеотерапевтических процедур при нейрорецепторной форме импотенции назначают промежностный (восходящий) душ при индифферентной температуре.
В итоге можно сделать вывод о том, что профессионально проведенная диагностика вида импотенции и назначение своевременного и комплексного метода лечения способствует нормализации нарушенной копулятивной функции у мужчин с различными формами импотенции.
ФИЗИОТЕРАПИЯ ПРИ НЕЙРОСЕНСОРНОЙ ТУГОУХОСТИ М.В. Супова, С.Н. Смирнова
Московский областной научно-исследовательский клинический институт
Современные данные статистики говорят о том, что выраженная тугоухость, затрудняющая общение между людьми, в 80% случаях обусловлена нейросенсорной тугоухостью. «Нейросенсорная тугоухость» — это обобщающее понятие, которое заменило существующие ранее понятия «неврит слухового нерва», «кохлеарный неврит».
Нейросенсорная тугоухость может быть вызвана перенесенными инфекционными заболеваниями, травмами, интоксикацией, связанной с применением ототоксических лекарственных препаратов (стрептомицин, гентомицин, исомицин и др.), длительным воздействием шума у людей, таких профессий, как артиллеристы, машинисты, летчики и др. Очень часто нейросенсорная тугоухость связана с возрастными изменениями, некоторыми другими сопутствующими заболеваниями (болезнь Меньера, отосклероз, остеохондроз позвоночника и др.)
Как правило, тугоухость развивается постепенно и редко выявляется на ранних стадиях. Несмотря на большое разнообразие причин, вызывающих снижение слуха, их в значительной степени объединяет одно -нарушение кровоснабжения слуховых рецепторов и, как следствие, нарушение звуковоспринимающей функции.
Лечение нейросенсорной тугоухости представляется весьма сложным. Поэтому лечение должно быть комплексным, последовательным, начинать его следует в максимально ранние сроки после начала заболевания.
В арсенале врачей имеются десятки лекарственных средств различного действия, однако их эффективность, как правило, снижена из-за нарушенного кровоснабжения в пораженной области. Именно поэтому актуальным оказывается применение физических методов в лечении данной патологии.
В острой стадии развития нейросенсорной тугоухости, с целью улучшения мозгового кровообращения, применяют эндоуральный электрофорез галантамина, кроме того, электрофорез на воротниковую область калия, дибазола, никотиновой кислоты, эуфиллина, магния и др.; ингаляции мелкодисперсных аэрозолей 1% димедрола, 5% аскорбиновой кислоты, лизоцима, диоксирибонуклеазы, и др. через нос. При хронической форме заболевания главным образом с целью уменьшения ушных шумов назначают электрофорез но-шпы, массаж
околоушной, затылочной и воротниковой области; воздействия синоусоидальных модулированных токов на шейные симпатические узлы и на проекцию позвоночной артерии. С целью стимуляции проведения слухового восприятия назначают импульсные токи прямоугольной формы, частотой 400-2500 Гц. С целью улучшения проводимости и регенерации нерва используется электрофорез витамина В, прозерина, галантамина, дибазола, веществ, улучшающих энергетический обмен нервных клеток (аминолона, метионина, глютаминовой кислоты, цистеина), бальнеотерапия (сульфидные, родоновые, хлорно-натриевые ванны).
Из новых методов физиолечения в последее время широко применяют виброакустическую терапию от аппарата «Цитафон». Аппарат контактным способом возбуждает в тканях микровибрацию непрерывно меняющейся звуковой частоты, что позволяет увеличивать крово- и лимфоток. Поэтому применение «Цитафона» улучшает кровоснабжение слуховых рецепторов, заметно повышая эффективность применяемых лекарственных препаратов, и может быть полезно на всех этапах лечения нейросенсорной тугоухости.
Процедуры выполняют в спокойной обстановке в положении сидя или лежа. Один виброфон устанавливается над сосцевидным отростком, другой — на область перед козелком уха. Процедуры проводятся 1-2 раза в день по 5-10 минут на каждое ухо. В курс лечения, который продолжается 14 дней, включается воздействие на область почек (для улучшения их работы в плане очищения организма) и на шейный отдел позвоночника для влияния на тонус сосудов головного мозга.
Рекомендуется проводить 3-4 курса лечения, с перерывом между курсами — 10-14 дней.
При лечении нейросенсорной тугоухости также используется аппарат «Биомас», действие которого основано на вращении постоянных магнитов, ориентированных полюсами по оси вращения. Скорость вращения меняется во времени, перекрывая интервалы лабильности нервных клеток, а периоды возрастания и падения скорости вращения соответствуют средней частоте дыхания человека. Магнитное поле, меняющееся в пространстве в течение каждого полного оборота, способствует расширению сосудов, увеличению объемной скорости кровотока. Это позволяет применять аппарат «Биомас» у больных с нейросенсорной тугоухостью для уменьшения шума в ушах и улучшения слуха.
Разделение бета2-трансферрина денатурирующим гель-электрофорезом для обнаружения спинномозговой жидкости в ушной и носовой жидкости
Фон: Вытекание спинномозговой жидкости (ЦСЖ) — критическое состояние со значительным риском менингита. Мы исследовали использование анализа изоформ трансферрина в качестве диагностического маркера для обнаружения утечки спинномозговой жидкости в образцах жидкости.
Методы: Мы проанализировали 241 образец от пациентов с утечкой спинномозговой жидкости, чаще всего проявляющейся как оторея или ринорея, с помощью электрофореза в полиакриламидном геле с додецилсульфатом натрия (SDS-PAGE) с последующим вестерн-блоттингом и иммуноокрашиванием на трансферрин.Слезы, слюна, носовая жидкость и выделения из ушей (по 20 образцов в каждом) анализировались параллельно, и нормальная человеческая сыворотка служила контролем в каждом эксперименте. Мы сравнили минимальный объем добавленной спинномозговой жидкости, который может быть обнаружен в секреции с помощью нашего анализа, с минимальным объемом, обнаруженным с помощью теста на простагландин-D-синтазу (бета-следы). СМЖ смешивали с кровью в различных пропорциях, чтобы определить влияние загрязнения крови на структуру трансферрина.
Полученные результаты: Во всех образцах ЦСЖ бета1- и бета2-трансферрин присутствовали примерно в равных количествах.В слезах и ушных секретах бета2-трансферрин мигрировал в геле таким же образом, как и в спинномозговой жидкости, но его концентрация была заметно ниже, чем у бета1-трансферрина, разница, которая позволила четко отличить трансферрин от структуры спинномозговой жидкости. В слюне также присутствовали обе изоформы трансферрина, но их можно было отличить от таковых из других жидкостей по характеру электрофоретической миграции, а не по относительным концентрациям. При тесте на бета-следы для обнаружения требовалось минимум 5 мкл спинномозговой жидкости, тогда как наш анализ с бета2-трансферрином дал сигнал сопоставимой интенсивности с минимум 2 мкл спинномозговой жидкости.
Заключение: Анализ структуры микрогетерогенности трансферрина с помощью SDS-PAGE для идентификации утечки спинномозговой жидкости является высокочувствительным и специфическим методом, который заслуживает рассмотрения как рутинный метод.
Разделение β2-трансферрина с помощью денатурирующего гель-электрофореза для обнаружения спинномозговой жидкости в ушной и носовой жидкости | Клиническая химия
Абстрактные
Предпосылки: Вытекание спинномозговой жидкости (ЦСЖ) — критическое состояние со значительным риском менингита.Мы исследовали использование анализа изоформ трансферрина в качестве диагностического маркера для обнаружения утечки спинномозговой жидкости в образцах жидкости.
Методы: Мы проанализировали 241 образец от пациентов с утечкой спинномозговой жидкости, чаще всего проявляющейся как оторея или ринорея, с помощью электрофореза в полиакриламидном геле с додецилсульфатом натрия (SDS-PAGE) с последующим вестерн-блоттингом и иммуноокрашиванием на трансферрин. Слезы, слюна, носовая жидкость и выделения из ушей (по 20 образцов в каждом) анализировались параллельно, и нормальная человеческая сыворотка служила контролем в каждом эксперименте.Мы сравнили минимальный объем добавленной CSF, который может быть обнаружен в секреции с помощью нашего анализа, с минимальным объемом, обнаруженным с помощью теста на простагландин-D-синтазу (β-следы). СМЖ смешивали с кровью в различных пропорциях, чтобы определить влияние загрязнения крови на структуру трансферрина.
Результаты: Во всех образцах спинномозговой жидкости β 1 — и β 2 -трансферрин присутствовали примерно в равных количествах. В слезах и ушных секретах β 2 -трансферрин мигрировал в геле таким же образом, как и в спинномозговой жидкости, но его концентрация была заметно ниже, чем у β 1 -трансферрина, разница, которая позволила четко отличить от трансферрина. узор из CSF.В слюне также присутствовали обе изоформы трансферрина, но их можно было отличить от таковых из других жидкостей по характеру электрофоретической миграции, а не по относительным концентрациям. При тесте на β-следы для обнаружения требовалось минимум 5 мкл CSF, тогда как наш анализ β 2 -трансферрина дал сигнал сопоставимой интенсивности с минимум 2 мкл CSF.
Заключение: Анализ структуры микрогетерогенности трансферрина с помощью SDS-PAGE для идентификации утечки спинномозговой жидкости является высокочувствительным и специфическим методом, который заслуживает рассмотрения как рутинный метод.
Утечка спинномозговой жидкости (ЦСЖ) — критическое состояние, в котором существует значительный риск менингита с потенциально летальным исходом. Поскольку ринорея и оторея могут состоять из различных выделений жидкости организма, надежная идентификация утечки спинномозговой жидкости имеет решающее значение для адекватного клинического ведения. Для диагностики использовались различные методы, включая рентгеновский и магнитно-резонансный анализ, оценку концентрации глюкозы и химические исследования белков, но ни один из них не дал полностью удовлетворительных результатов.Тестам на глюкозу не хватает чувствительности и специфичности, и от них в основном отказались. Методы рентгенографии и магнитной визуализации не всегда успешны и требуют дорогостоящих и длительных процедур (1).
Высокая эффективность разделения может быть достигнута с относительно ограниченным количеством оборудования за счет использования электрофоретических методов, которые позволяют обнаруживать, проверять чистоту и качественно характеризовать олигоклональные полосы. По этой теме были опубликованы многочисленные исследования, в некоторых из них использовались полиакриламидные гели (2) (3) (4) или агарозные гели (5) (6) в сочетании с иммунофиксацией (7) (8) или с флуоресцеином (5), кумасси бриллиантовым синим. (4) или окрашивание серебром (3).Помимо различий в структуре полос, 2 белка, простагландин-D-синтаза (β-след) и транстиретин (преальбумин), были идентифицированы как возможные специфические составляющие CSF.
В этом исследовании мы исследовали применимость трансферрина в качестве диагностического маркера ликвореи. Трансферрин представляет собой железосвязывающий мономерный гликопротеин с молекулярной массой ~ 78 кДа и содержащий 4 отрицательно заряженные группы сиаловой кислоты (9) (10). Этот белок связывает железо очень сильно, но обратимо, защищая организм от повреждения свободными радикалами, связанного с несвязанным железом (11) (12).Установлено местонахождение гена трансферрина вместе со многими его структурными особенностями и аминокислотной последовательностью его белкового продукта (13) (14). В спинномозговой жидкости могут быть обнаружены 2 изоформы трансферрина, а некоторые патологические и физиологические состояния могут вызывать изменения в структуре микрогетерогенности трансферрина (15). На протяжении многих лет было разработано множество экспериментов для изучения значимости гетерогенности трансферрина не только для утечки спинномозговой жидкости, но и для различных заболеваний центральной нервной системы (16) (17) (18).Эти подходы, хотя и полезны, не всегда позволяли отследить трансферрин в случаях небольших или отсроченных утечек спинномозговой жидкости (19).
Проведя предварительные эксперименты по тестированию различных методов электрофоретического разделения, включая изоэлектрическое фокусирование и электрофорез на дисках и в агарозном геле, мы поставили перед собой задачу убедиться в воспроизводимости и надежности электрофореза в полиакриламидном геле додецилсульфата натрия (SDS-PAGE) и продемонстрировать чувствительность и специфичность гетерогенности трансферрина и его превосходство над оценкой β-следовых количеств и транстиретина в диагностике ликвореи.
Материалы и методы
сборник образцов
В этом ретроспективном исследовании образцы спинномозговой жидкости у 241 пациента без острых или хронических инфекционных заболеваний были собраны с 1998 по 2003 год в отделении оториноларингологии, хирургии головы и шеи Кильского университета имени Кристиана Альбрехта. Сбор образцов проводился в соответствии с Хельсинкской декларацией 1975 года, пересмотренной в 1996 году, и все пациенты дали письменное информированное согласие.Все образцы спинномозговой жидкости были собраны во время регулярных диагностических процедур. Пациенты поступили с ринореей или отореей с подозрением на утечку спинномозговой жидкости. Утечки CSF были установлены путем окрашивания флуоресцеином (интратекальное нанесение флуоресцеина) во всех случаях. Кроме того, была проведена компьютерная томография с высоким разрешением и последовательная магнитно-резонансная томография для обнаружения дефектов и оценки их степени. Из образцов спинномозговой жидкости 173 были получены от пациентов с переломами костей базального черепа.В 98 из этих случаев ликворея протекала как отоликворея, а в 75 случаях — как риноликворея. У остальных 68 пациентов не удалось подтвердить перелом основания черепа, но у 53 из этих пациентов в анамнезе были операции либо на придаточных пазухах носа, либо на среднем ухе. В этих случаях утечка спинномозговой жидкости не была обнаружена во время хирургического вмешательства из-за небольшого размера дефекта и отсутствия очевидного дренажа спинномозговой жидкости. Тем не менее послеоперационная оценка флуоресцеина выявила ликворею, указывающую на утечку твердой мозговой оболочки.В 15 случаях причина ликвореи осталась неясной.
Во всех случаях образцы спинномозговой жидкости получали путем введения сухого впитывающего кусочка ваты либо в носовую полость, либо в слуховой проход. В зависимости от степени протечки впитывающая вата оставалась на месте до 30 мин. Затем хлопок помещали в пробирку для сбора и центрифугировали, а супернатант анализировали.
Для контрольных экспериментов слезы, слюна и выделения из носа и ушей были получены от пациентов без ликвореи в анамнезе.Во время операции было собрано двадцать образцов серозного, слизистого и серозно-слизистого секрета из среднего уха пациентов, страдающих отитом. В этих случаях жидкость собиралась с помощью всасывающей трубки со встроенной трубкой для сбора. Жидкость из носовой полости у 20 здоровых людей получали, как описано выше, у пациентов с риноликвореей. Кроме того, образцы слез от 20 здоровых добровольцев без признаков заболевания глазной поверхности были собраны в стеклянные капиллярные микропипетки.Образцы плазмы были получены от здоровых доноров. Наконец, образцы спинномозговой жидкости, смешанные с кровью в различных пропорциях, были проанализированы, чтобы определить, как загрязнение спинномозговой жидкости кровью влияет на структуру трансферрина.
гель-электрофорез
Для SDS-PAGE образцы центрифугировали (20000 г в течение 5 минут) и денатурировали нагреванием при 95 ° C в течение 3 минут в модифицированном буфере для загрузки геля, содержащем 15 г / л глицина, 3,5 г / л Трис. -HCl (pH 6,8), 1 г / л SDS, 100 мл / л глицерина и 1 г / л бромфенолового синего, но без β-меркаптоэтанола.После денатурации аликвоты супернатантов объемом 20 мкл наносили на гели толщиной 1 мм и разделяли электрофорезом с использованием прерывистой буферной системы Laemmli (20) при постоянной 10 Вт и 10 ° C до тех пор, пока бромфеноловый синий не достигал анодной границы гель. При тестировании различных количеств образца к образцу добавляли фосфатно-солевой буфер для получения загрузочного объема 20 мкл. Для каждого цикла в качестве контроля использовали нормальную сыворотку крови человека, разбавленную 1: 120 буфером для загрузки геля.
Вестерн-блоттинг
После электрофоретического разделения белки переносили на нитроцеллюлозные мембраны полусухим блоттингом в течение 45 минут с использованием электроблоттера Biometra при постоянном токе 100 мА и температуре 10 ° C.Мембранам давали возможность реагировать в течение 30 мин с первичным козьим антителом против трансферрина человека (Calbiochem), направленным против специфических аминокислотных последовательностей, общих для обеих изоформ (β 1 и β 2 ) белка трансферрина. Комплекс антиген-антитело визуализировали с использованием биотинилированного кроличьего антикозьего иммуноглобулина и пероксидазы хрена (Dako). Реакцию останавливали промыванием нитроцеллюлозы 0,5 моль / л HCl. Транстиретин выявляли с использованием первичной кроличьей поликлональной антисыворотки (Dako), разведенной 1: 400, и козьего антикроличьего иммуноглобулина в качестве вторичных антител.Для оценки β-следов мы использовали кроличьи поликлональные антитела (наш собственный продукт) и те же вторичные антитела, что и выше. Оптимальную концентрацию (1: 500) антисыворотки против β-следов определяли с помощью серийных разведений высокоочищенных β-следов из спинномозговой жидкости человека (стандарт N-белка UY). При разведении 1: 500 антисыворотка обнаруживала β-след при минимальной концентрации 0,1 г / л в Вестерн-блоттинге и окрашивала единственную полосу в Вестерн-блот-анализе неразбавленных образцов CSF и сыворотки крови.Интенсивность полосы измеряли полуколичественным методом денситометрии с использованием системы документации BioDoc-II (Biometra). Отрицательный контроль был получен путем исключения первичного антитела.
статистический анализ
Статистический пакет для программного обеспечения социальных наук (SPSS), вер. 10.0 (SPSS, Inc.), запускаемая на ПК, использовалась для всех расчетов. Для каждой электрофореграммы были созданы денситометрические профили и рассчитаны средние и медианные (SD) значения.Категории выборок сравнивались с использованием критерия Манна – Уитни U , критерия Краскела – Уоллиса и статистики χ 2 . Специфичность и чувствительность оценивали с помощью анализа кривой ROC.
Результаты
Сложность и разнообразие белкового состава в спинномозговой жидкости, сыворотке крови, слезах, слюне, носовой жидкости и ушных секретах оценивали с помощью предварительного электрофоретического анализа (рис. 1 1 ). При сравнении индивидуальных моделей миграции сходства не обнаружено.Во всех образцах наиболее сильно окрашенные полосы имели относительно высокую молекулярную массу (70–90 кДа), и некоторые из них присутствовали во всех образцах. Однако большинство белков проявляли отчетливые миграционные характеристики и, таким образом, оказались специфичными для образца. Среди проанализированных образцов было обнаружено, что выделения из носа демонстрируют наибольшую белковую гетерогенность.
После анализа SDS-PAGE трансферрин был идентифицирован в сложной белковой смеси CSF с использованием вестерн-блоттинга и окрашивания трансферрин-специфическим антителом, которое распознало как изоформы β 1 , так и β 2 .Наименьшее количество ЦСЖ, позволяющее обнаружить трансферрин, составило 0,1 мкл, что демонстрирует очень высокую аналитическую чувствительность нашего метода (рис. 2 2 ).
В спинномозговой жидкости 2 изоформы трансферрина (β 1 и β 2 ) регулярно присутствовали в почти равных количествах. Когда плотность полосы β 1 принималась равной 100%, средняя (SD) плотность полосы β 2 составляла 86,9 (11,2)%. Как правило, для рутинного анализа использовали 2 мкл CSF, количество, достаточное для уверенной оценки отдельных образцов.Все образцы спинномозговой жидкости каждый раз сравнивали с сыворотками здоровых доноров, которые служили контролем. Контрольные образцы показали только изоформу β 1 при разведении 1: 120. Таким образом, обнаружения полосы β 2 -трансферрина с относительной плотностью> 60% было достаточно для диагностики утечки спинномозговой жидкости со 100% чувствительностью и 100% специфичностью ( P <0,0001). Изоформа β 2 также присутствует в сыворотке крови, но ее концентрация намного ниже, чем концентрация β 1 ; следовательно, при указанном разведении он не обнаруживался.
Характерные образцы трансферрина для слез, слюны и выделений из ушей и носа показаны на рис. 3 3 . Рисунок полос показывает присутствие 2 изоформ трансферрина в слезах. Хотя концентрация β 1 почти аналогична концентрации в спинномозговой жидкости, полоса β 2 едва заметна [относительная плотность 7,6 (3,3)%; P <0,0001]. В слюне характер миграции явно отличался от такового в слезах и спинномозговой жидкости. Обе изоформы β 1 и β 2 были обнаружены, и интенсивности соответствующих сигналов были примерно одинаковыми [средняя плотность полосы β 2 , 97 (5.7)%; P не имеет значения]. Однако был отмечен сдвиг в миграции изоформы β 2 , указывающий на физическую или химическую модификацию этого белка. При анализе равных объемов образцов концентрация трансферрина в слюне была в ~ 10 раз ниже, чем в спинномозговой жидкости.
В секретах среднего уха интенсивность полосы β 1 была в 20 раз сильнее, чем в спинномозговой жидкости при исследовании равных объемов, тогда как были обнаружены только следы изоформы β 2 [средняя относительная плотность 3.7 (1,2)%; P <0,0001]. Изоформа β 2 обычно становилась очевидной только при увеличении объема образца, когда количество ушных выделений в ~ 3 раза превышало необходимое для получения сигнала, подобного тому, который наблюдается с 2 мкл спинномозговой жидкости.
Анализ структуры трансферрина в выделениях из носа выявил только изоформу β 1 ( P <0,0001). Хотя интенсивность окрашивания β 1 увеличивалась пропорционально объему образца, полоса, соответствующая изоформе β 2 , не проявлялась даже при загрузке большого количества образца.
Электрофоретическое исследование спинномозговой жидкости затруднено в случае заражения крови, которое может возникнуть в результате различных травм или хирургических вмешательств. Поскольку сыворотка крови содержит как изоформы β 1 , так и β 2 , с относительным избытком изоформы β 1 , загрязненный CSF трудно отличить от крови. Влияние контаминации крови на структуру трансферрина в спинномозговой жидкости показано на рис. 4 4 . Изоформа β 1 может быть замечена, когда CSF смешивается всего с 1% крови (по объему), а преобладание изоформы β 1 становится более очевидным при добавлении увеличивающейся доли крови.Это наблюдение особенно важно для интерпретации паттернов β-трансферрина. Действительно, сдвиг в относительной интенсивности полосы в сторону увеличения изоформы β 1 , вероятно, указывает на то, что загрязнение крови размывает картину трансферрина в спинномозговой жидкости, так что она больше не является отличительной. Облитерация полосы β 2 избытком β 1 происходит, как только доля контаминации крови достигает 2% от объема пробы (рис. 4 4 ).
Чтобы продемонстрировать полезность обнаружения β 2 -трансферрина для диагностики спинномозговой жидкости, мы сравнили чувствительность тестов на простагландин-D-синтазу (β-след) и протеин транстиретина с нашим анализом β 2 -трансферрина путем одновременного анализа. анализ трех белков в одних и тех же образцах спинномозговой жидкости с помощью вестерн-блоттинга и последующего иммуноокрашивания соответствующими антителами. Как показано на фиг. 5 5 , минимум 5 мкл CSF необходимо для обнаружения сигнала β-следа, тогда как 2 мкл CSF дали двойную полосу β-трансферрина сопоставимой интенсивности.
Транстиретин, с другой стороны, обнаруживался как в сыворотке крови, так и в спинномозговой жидкости, а интенсивность сигнала, полученная с разбавленным образцом сыворотки, приблизительно соответствовала интенсивности сигнала, обнаруженной в 5 мкл спинномозговой жидкости (рис. 6 6 ). Это открытие указывает на то, что обнаружение транстиретина не является специфическим для спинномозговой жидкости и что даже количественный анализ вряд ли позволит дифференцировать сыворотку от спинномозговой жидкости.
Обсуждение
Хотя несколько недавних исследований показали, что ЦСЖ можно идентифицировать с помощью различных электрофоретических методов, предназначенных для разделения изоформ трансферрина (21) (22) (23) (24) (25), дифференциальная диагностика отореи и ринореи в ЦСЖ остается чрезвычайно сложной.Трансферрин встречается в большом количестве изоформ (26), и его микрогетерогенность может варьироваться в зависимости от ряда патологических и физиологических состояний (15). Тем не менее, первоначальный диагноз утечки спинномозговой жидкости может быть сделан путем изучения паттерна микрогетерогенности, который также зависит от генетически детерминированных вариаций в аминокислотной последовательности (15) или от различных степеней сиалирования и галактозилирования (27). Таким образом, анализ относительной интенсивности полос изоформ β 1 и β 2 в спинномозговой жидкости может сделать возможным раннюю диагностику утечки спинномозговой жидкости и последующую профилактику менингита.
Это исследование продемонстрировало, что SDS-PAGE с высоким разрешением для анализа β-трансферрина в спинномозговой жидкости, метод, позволяющий одновременно анализировать до 20 зондов за 4–5 часов, является высокочувствительным и воспроизводимым. Особым преимуществом этого метода является то, что белки не теряются, тогда как при использовании других методов окрашивания белки часто диффундируют из геля, поскольку они не фиксируются необратимо в фокусирующих или нативных гелях (28).
Для нашего метода требуются свежие образцы спинномозговой жидкости, не содержащие твердых частиц или осадков, которые мешают разделению, блокируя поры матрицы.Еще один важный фактор — это буфер для образцов. Буферы для образцов для SDS-электрофореза обычно содержат меркаптоэтанол, который уменьшает дисульфидные мостики белков и вызывает диссоциацию как изоформ β 1 -, так и β 2 -трансферрина на 2 субъединицы каждая. Следовательно, буфер для образцов без меркаптоэтанола должен использоваться для обнаружения 2 недиссоциированных изоформ трансферрина в спинномозговой жидкости.
Согласно отчетам многочисленных исследований, посвященных отореи или ринореи в спинномозговой жидкости, β 2 является единственной характерной изоформой трансферрина для спинномозговой жидкости и не встречается в слезах, носовой жидкости, слюне или сыворотке (26) (29) (30) .Напротив, представленные здесь результаты подтверждают неизменное присутствие изоформ β 1 и β 2 в крови, слезах, ушных секретах и слюне. Было обнаружено, что только в выделениях из носа отсутствует изоформа β 2 .
В слезах и ушных секретах β 2 -трансферрин мигрирует в геле таким же образом, как и в спинномозговой жидкости, но его концентрация заметно ниже, чем концентрация β 1 , разница, которая позволяет четко отличить от трансферрина. узор из CSF.Обе изоформы трансферрина также присутствуют в слюне, существенное различие в которой заключается в подвижности изоформы β 2 , которая объясняется измененной молекулярной массой. Сыворотка также содержит обе изоформы трансферрина, но преобладает β 1 . Следовательно, надежное обследование на ринорею или оторею в спинномозговой жидкости невозможно, если спинномозговая жидкость загрязнена кровью. Как показано на рис. 4 4 , даже следы крови вызывают перегрузку изоформы β 1 , что затрудняет диагностическое обследование.Этот феномен известен из предыдущего исследования, в котором изучали возможность обнаружения β 2 -трансферрина в различных смесях спинномозговой жидкости и сыворотки крови (31).
Еще одно предостережение заключается в том, что определенные патологические состояния могут нарушать типичный образец микрогетерогенности трансферрина в сыворотке. Было показано, что тяжелый хронический алкоголизм вызывает повышение относительных концентраций β 2 -трансферрина (32), по-видимому, в результате снижения активности глюкозилтрансферазы печени (33).Поэтому при дифференциальной диагностике ликвореи могут быть рекомендованы функциональные пробы печени.
В более ранних исследованиях изучалась простагландин-D-синтаза (β-следовой белок) для диагностики ликвореи и различных неврологических заболеваний (21) (22) (23). Поэтому мы сравнили этот тест с нашим анализом β 2 -трансферрина путем одновременного обнаружения обоих белков в одной и той же аликвоте CSF. Результаты показали, что, хотя тест на β-следы специфичен, предел обнаружения намного выше, чем у β 2 -трансферрина.Это наблюдение согласуется с отчетом о доле ложноотрицательных результатов в анализе β-следов с использованием ракетного иммуноэлектрофореза Laurell (34).
Поскольку отсутствие свищей спинномозговой жидкости в наших контрольных случаях не было подтверждено клиническими или радиологическими методами, ложноотрицательные результаты не могут быть исключены в нашем анализе трансферрина или в анализах для других белков, исследованных в этом исследовании. Однако мы считаем вероятность утечки спинномозговой жидкости у здоровых людей достаточно низкой, чтобы оправдать дизайн нашего исследования.
Недавно была разработана автоматизированная процедура количественного определения β-следов белка в биологических жидкостях (34) (35). Этот нефелометрический анализ показал высокую специфичность, высокую эффективность и чувствительность в диапазоне 92–100% (35) (36) (37). В одном исследовании качественная оценка β 2 -трансферрина в выделениях из носа показала чувствительность 93% и специфичность 97% (36). Хотя это наблюдение ясно указывает на более низкую чувствительность метода иммунофиксации по сравнению с SDS-PAGE и вестерн-блот-анализом, обнаружение ложноположительных результатов (~ 3%) трудно интерпретировать в свете наших наблюдений, подтверждающих отсутствие β 2. -трансферрин в носовой жидкости.Обнаружение небольших количеств изоформы β 2 в выделениях из носа пациентов без утечки спинномозговой жидкости может, тем не менее, быть связано с контаминацией сывороткой или слезами.
Транстиретин (преальбумин) также был предложен в качестве диагностического маркера спинномозговой жидкости (32). В этом исследовании мы регулярно обнаруживали транстиретин в разбавленных образцах сыворотки крови в концентрациях, аналогичных таковым в спинномозговой жидкости, что указывает на то, что этот белок вряд ли предоставит диагностическую информацию при анализе с помощью нашего метода.Наши результаты связаны с денатурацией белка во время SDS-PAGE, что затрудняет дифференциацию между CSF-специфической мономерной формой и тетрамерной формой, присутствующей в крови (38). Это различие потребует более сложных методов (39), которые вряд ли станут рутинными процедурами, но могут быть полезны в сложных ситуациях, например, в случае заражения крови.
Таким образом, мы обнаружили, что утечку спинномозговой жидкости при оторее или ринорее всегда можно обнаружить путем идентификации изоформы трансферрина β 2 .Хотя слюна, слезы и выделения из ушей также демонстрируют микрогетерогенность трансферрина, характер концентрации изоформ белка отличается от такового в спинномозговой жидкости. Следовательно, CSF также может быть обнаружен в смеси, содержащей эти жидкости и секреты. Представленный здесь метод прост в применении и поэтому хорошо подходит для рутинных приложений. Хотя это требует больше времени, чем нефелометрический тест β-следа, наш анализ может быть особенно полезен для обнаружения небольших количеств спинномозговой жидкости в выделениях из носа и уха, которые могут попасть в диагностическую серую зону при нефелометрическом подходе (35). (36).Тем не менее, наш метод разделяет с другими, основанными на иммунологических реакциях, проблему идентификации изоформы β 2 в образцах СМЖ, загрязненных кровью. В настоящее время все анализы для выявления отореи или ринореи в спинномозговой жидкости проводятся с использованием поликлональных антисывороток, распознающих все существующие генетические варианты трансферрина. Следовательно, невозможно предсказать эффективность, с которой данная поликлональная антисыворотка будет обнаруживать различные антигенные эпитопы иммобилизованного денатурированного белка-мишени.С целью повышения специфичности нашей методики в настоящее время мы разрабатываем иммунологический анализ, основанный на реактивности моноклональных антител, направленных исключительно против изоформы β 2 .
Рисунок 1.
SDS-полиакриламидный гель, окрашенный кумасси бриллиантовым синим.
Отчетливые белковые структуры наблюдаются в спинномозговой жидкости ( дорожка 1, ), сыворотке, разведенной 1: 120 ( дорожка 2 ), слезах ( дорожка 3 ), выделениях из уха ( дорожка 4 ), носовой жидкости ( дорожка). 5 ) и слюна ( переулок 6 ).Стрелка указывает приблизительное положение трансферрина. Молекулярные массы размерных маркеров показаны на слева .
Рисунок 1.
SDS-полиакриламидный гель, окрашенный кумасси бриллиантовым синим.
Отчетливые белковые структуры наблюдаются в спинномозговой жидкости ( дорожка 1, ), сыворотке, разведенной 1: 120 ( дорожка 2 ), слезах ( дорожка 3 ), выделениях из уха ( дорожка 4 ), носовой жидкости ( дорожка). 5 ) и слюна ( переулок 6 ).Стрелка указывает приблизительное положение трансферрина. Молекулярные массы размерных маркеров показаны на слева .
Рисунок 2.
Иммунологическое обнаружение иммобилизованных изоформ трансферрина после того, как белки были перенесены из SDS-полиакриламидных гелей на твердый носитель.
Разбавленная сыворотка (1: 120), используемая в качестве контроля, показывает только изоформу β 1 , тогда как обе изоформы β 1 и β 2 четко обнаруживаются в разных объемах спинномозговой жидкости.
Рисунок 2.
Иммунологическое обнаружение иммобилизованных изоформ трансферрина после того, как белки были перенесены из SDS-полиакриламидных гелей на твердый носитель.
Разбавленная сыворотка (1: 120), используемая в качестве контроля, показывает только изоформу β 1 , тогда как обе изоформы β 1 и β 2 четко обнаруживаются в разных объемах спинномозговой жидкости.
Рис. 3.
Типичные образцы изоформ трансферрина, обнаруженные в различных жидкостях и секретах, по сравнению с образцом микрогетерогенности трансферрина в спинномозговой жидкости после SDS-PAGE и вестерн-блоттинга.
Рис. 3.
Типичные образцы изоформ трансферрина, обнаруженные в различных жидкостях и секретах, по сравнению с образцом микрогетерогенности трансферрина в спинномозговой жидкости после SDS-PAGE и вестерн-блоттинга.
Рис. 4.
Трансферринная картина спинномозговой жидкости, смешанной с сывороткой.
Сигнал β 1 все больше затмевает сигнал β 2 , когда пропорция добавок сыворотки: дорожки показывают примеси 1% ( A ), 2% ( B ), 5% ( C ) , 10% ( D ) и 50% сыворотки ( E ) по объему.
Рис. 4.
Трансферринная картина спинномозговой жидкости, смешанной с сывороткой.
Сигнал β 1 все больше затмевает сигнал β 2 , когда пропорция добавок сыворотки: дорожки показывают примеси 1% ( A ), 2% ( B ), 5% ( C ) , 10% ( D ) и 50% сыворотки ( E ) по объему.
Рисунок 5.
Вестерн-блоттинг, иллюстрирующий иммунологическое обнаружение изоформ трансферрина в сравнении с β-следовым белком.
β-Следы не обнаруживаются в <5 мкл спинномозговой жидкости, тогда как сильная двойная полоса, соответствующая трансферрину, проявляется уже в 2 мкл спинномозговой жидкости.
Рисунок 5.
Вестерн-блоттинг, иллюстрирующий иммунологическое обнаружение изоформ трансферрина в сравнении с β-следовым белком.
β-Следы не обнаруживаются в <5 мкл спинномозговой жидкости, тогда как сильная двойная полоса, соответствующая трансферрину, проявляется уже в 2 мкл спинномозговой жидкости.
Рис. 6.
Транстиретин обнаруживается как в спинномозговой жидкости, так и в сыворотке в разведении 1: 120.
Концентрация белка в спинномозговой жидкости может быть выше, но эта особенность, по-видимому, не позволяет дифференцировать.
Рис. 6.
Транстиретин обнаруживается как в спинномозговой жидкости, так и в сыворотке в разведении 1: 120.
Концентрация белка в спинномозговой жидкости может быть выше, но эта особенность, по-видимому, не позволяет дифференцировать.
Мы благодарим профессора Дойшля (кафедра неврологии Кильского университета, Германия) за предоставленные образцы спинномозговой жидкости. Мы также хотим поблагодарить А. Рёэн и К.Клозе за отличную техническую помощь.
1Rouah E, Rogers BB, Buffone GJ. Анализ трансферрина методом иммунофиксации как помощь в диагностике отореи спинномозговой жидкости.
Arch Pathol Lab Med
1987
;111
:756
-757.2Reisinger PWM, Hochstrasser K. Диагностика спинномозговой фистулы на основе обнаружения β2-трансферрина электрофорезом в полиакриламидном геле и иммуноблоттингом.
Clin Chem Clin Biochem
1989
;27
:169
-172.3Бленнов К., Фредман П. Обнаружение утечки спинномозговой жидкости с помощью изоэлектрической фокусировки на полиакриламидных гелях с окрашиванием серебром с использованием PhastSystem.
Acta Neurochir (Wien)
1995
;136
:135
-139,4Райалл Р.Г., Павлин М.К., Симпсон Д.А. Полезность анализа β2-трансферрина при обнаружении утечки спинномозговой жидкости после травмы головы.
J Neurosurg
1992
;77
:737
-739.5Оберашер Г., Аррер Э. Новый метод использования флуоресцеина для демонстрации ото- и риноликвореи.
Арка Оториноларингол
1986
;243
:117
-120,6Arrer E, Oberascher G, Gibitz HJ. Распределение белков в перилимфе.
Акта Отоларингол
1988
;106
:117
-123,7Middelweerd MJ, de Vires N, Callioauw J, van Camp GJ. Новый биохимический анализ в диагностике утечки спинномозговой жидкости через нос.
Евро Арка Оториноларингол
1995
;252
:336
-339,8Зарет Д.Л., Моррисон Н., Гулбрансон Р., Керен Д.Ф. Иммунофиксация для количественного определения трансферрина β2 в спинномозговой жидкости для обнаружения утечки спинномозговой жидкости из-за травмы черепа.
Clin Chem
1992
;38
:1908
-1912,9Huobore I, Huobore E, Pinoh CA. Открытие трансферрина у беспозвоночных.
Protides Biol Fluids
1984
;32
:59
-61.10Aisen P, Leibman A, Reich HA. Исследования связывания железа с трансферрином и кональбумином.
J Biol Chem
1966
;24
:1666
-1671,11Fletcher J, Huehns ER. Значение связывания железа трансферрином.
Nature
1967
;215
:584
-586.12Kallee E, Lohss F, Debiasi S. Иммунологическая демонстрация обратимого связывания Fe 59 с трансферрином.
Nucl Med
1963
;1
:111
-118.13Янг Ф., Ламм Дж. Б., МакГилл Дж. Р., Мур С. М., Нейлор С. Л., ван Брагт PH и др. Трансферрин человека: характеристика кДНК и хромосомная локализация.
Proc Natl Acad Sci U S A
1984
;8
:2752
-2756.14McGillivray RTA, Mendez E, Shewal JG, Sinha SK, Lineback-Zins J, Brew K. Первичная структура трансферрина сыворотки человека. Структуры семи фрагментов цианогенбромида и сборка полной структуры.
J Biol Chem
1983
;258
:3543
-3553.15De Jong G, van Dijk JP, van Eijk HG. Биология трансферрина.
Clin Chim Acta
1990
;190
:1
-46,16Saiz A, Graus F, Dalmau J, Pifarre A, Marin C, Tolosa E, et al. Обнаружение мозгового белка 14-3-3 в спинномозговой жидкости у пациентов с паранеопластическими неврологическими расстройствами.
Ann Neurol
1999
;46
:774
-777,17Contini C, Fainardi E, Cultrera R, Seraceni S, Castellazzi M, Peyron F и др.Доказательства наличия свободных каппа-легких цепей в спинномозговой жидкости у больных СПИДом с энцефалитом Toxoplasma gondii .
J Нейроиммунол
2000
;108
:221
-226,18Нагамицу С., Мацуиши Т., Ямашита Ю., Ямада С., Като Х. Экстрапонтинный миелинолиз с паркинсонизмом после быстрой коррекции гипонатриемии: высокий уровень гомованилловой кислоты в спинномозговой жидкости и успешное лечение дофаминергическими препаратами.
Neural Transm
1999
;106
:949
-953.19Меурман О.Х., Ирьяла К., Суонпаа Дж., Лоран Б. Новый метод определения утечки спинномозговой жидкости.
Acta Otolaryngol
1979
;87
:366
-369.20Laemmli UK. Расщепление структурных белков при сборке головки бактериофага Т4.
Природа
1970
;227
:680
-686.21Grunewald S, Huyben K, de Jong JG, Smeitink JA, Rubio E, Boers GH, et al. Бета-следовые белки в спинномозговой жидкости человека: диагностический маркер дефектов N-гликозилирования в головном мозге.
Biochim Biophys Acta
1999
;1455
:54
-60.22Тумани Х., Нау Р., Фельгенгауэр К. Бета-следовой белок в спинномозговой жидкости: оценка, связанная с гемато-ликворным барьером при неврологических заболеваниях.
Ann Neurol
1998
;44
:882
-889,23Ямашима Т., Сакуда К., Тохма Й., Ямасита Дж., Ода Х., Ирикура Д. и др. Синтаза простагландина D (β-следы) в клетках паутинной оболочки и менингиомы человека: роль клеточного маркера или абсорбции спинномозговой жидкости, туморогенеза и процесса кальцификации.
J Neurosci
1997
;17
:2376
-2382,24Оберашер Г. Современная концепция диагностики спинномозговой жидкости при ото- и ринорее.
Ринология
1988
;26
:89
-103.25Thalmann I, Kohut RI, Ryu JH, Thalmann R. Двумерный электрофорез высокого разрешения: методика и потенциальная применимость к изучению заболеваний внутреннего уха.
Am J Otol
1995
;16
:153
-157.26Knight JA. Успехи в анализе спинномозговой жидкости.
Ann Clin Lab Sci
1997
;27
:93
-104,27Ван Камп Г.Дж., Малдер К., Койпер М., Вольтерс Э.С. Изменено сиалирование трансферрина при болезни Паркинсона.
Clin Chim Acta
1995
;235
:159
-167,28Вестермайер Р.
Электрофорез на практике, 1-е изд.
1993
:277pp
VCH New York..29Оберашер Г. Спинномозговая жидкость, оторея. Новые тенденции в диагностике.
Am J Otol
1988
;9
:102
-108,30Левенсон MJ, Desloge RB, Parisier SC. Бета-2 трансферрин: ограничения использования в качестве клинического маркера перилимфы.
Ларингоскоп
1966
;106
:159
-161.31Кляйне Т.О., Дамм Т., Альтхаус Х. Количественная оценка β-следовых белков и обнаружение изоформ трансферрина в смесях спинномозговой жидкости и сыворотки крови в качестве моделей диагностики ринореи и отореи.
Fresenius J Anal Chem
2000
;366
:382
-386.32Петрен С., Вестерберг О. Различия в концентрации изоформ трансферрина в крови алкоголиков во время злоупотребления и воздержания.
Clin Chim Acta
1988
;175
:183
-187.33Stibler H, Borg S. Активность гликопротеингликозилтрансферазы в сыворотке у злоупотребляющих алкоголем пациентов и здоровых людей из контрольной группы.
Scand J Clin Lab Invest
1991
;51
:43
-51.34Бахманн Г., Некич М., Мишель О. Клинический опыт с β-следовым белком в качестве маркера спинномозговой жидкости.
Анн Отол Ринол Ларингол
2000
;109
:1099
-1102.35Petereit HF, Bachmann G, Nekic M, Althaus H, Pukrop R. Новый нефеломерный анализ на β-следовые белки (простагландин D-синтаза) как индикатор ликвореи.
J Neurol Neurosurg Psychiatry
2001
;71
:347
-351.36Arrer E, Meco C, Oberascher G, Piotrowski W, Albegger K, Patsch W. β-следовой белок как маркер ринореи спинномозговой жидкости.
Clin Chem
2002
;48
:939
-941.37Bachmann G, Petereit H, Djenabi U, Michel O. Прогностические значения β-следового белка (простагландин D-синтазы) с помощью лазерно-нефелометрического анализа для идентификации спинномозговой жидкости.
Нейрохирургия
2002
;50
:571
-576.38Дэвидссон П., Экман Р., Бленноу К. Новая процедура обнаружения белков мозга в спинномозговой жидкости.
J Neural Transm
1997
;104
:711
-720,39Марчи Н., Фацио В., Кукулло Л., Кайт К., Масарик Т., Барнетт Г. и др. Мономер транстиретина в сыворотке как возможный маркер нарушения барьера между кровью и спинномозговой жидкости.
J Neurosci
2003
;23
:1949
-1955.© 2005 Американская ассоциация клинической химии
Внутреннее ухо является мишенью для передачи сигналов инсулина и инсулинорезистентности: данные мышей и слуховых клеток HEI-OC1
Введение
Обширные данные показывают, что диабет 1 и 2 типа отрицательно влияет на функцию вестибулярной и слуховой систем как в люди и в моделях животных.1–5 Хотя было предложено несколько теорий (например, микроангиопатия, конечные продукты гликирования, реактивный окислительный стресс и митохондриальная дисфункция, демиелинизация слухового нерва, потеря спирального ганглия и атрофические изменения органа кортиевых клеток 5–9), точная лежащая в основе механизмы, ответственные за вызванное диабетом повреждение слуховой системы, остаются неясными.
Сообщалось, что прогрессирование потери слуха у мышей с диабетом типа 1, индуцированным стрептозотоцином, или диабетом типа 2, вызванным гибелью с высоким содержанием жира (HFD), соответственно, имеет различные характеристики, измеренные по слуховой реакции ствола мозга и продуктам искажения отоакустической эмиссии. (DPOAE).10 Кроме того, гиперинсулинемия, маркер инсулинорезистентности и диабета 2 типа, была предложена для объяснения различий в дисфункции конкретных слуховых путей при двух типах диабета в комплексном нейроэлектрофизиологическом исследовании на мышах.11 У людей резистентность к инсулину, нарушение уровня глюкозы натощак и дисфункция бета-клеток были зарегистрированы как независимые факторы риска нарушения слуха даже до начала диабета 2 типа.12 Таким образом, ряд исследований согласуются с сообщениями, показывающими вредное влияние индуцированной гиперинсулинемии на метаболизм и метаболизм во внутреннем ухе. ионный гомеостаз.13–16
Роль улитки как прямого органа-мишени для действия инсулина не была хорошо изучена. Недавно сообщалось, что рецептор инсулина специфически экспрессируется в поддерживающих клетках органа Corti17, что согласуется с ранними исследованиями, показывающими сайты связывания с высоким сродством для инсулина в улитке.18 Кроме того, предыдущие результаты нашей лаборатории продемонстрировали экспрессию инсулина. рецептор, субстрат 1 рецептора инсулина, протеинкиназа B (PKB / Akt), чувствительная к инсулину фосфодиэстераза (PDE) 3B, а также мишени, такие как регулируемый инсулином переносчик глюкозы 4, в сенсорном эпителии мешочка человека.19 20
Штамм мышей C57BL / 6, получавший HFD, является широко используемой животной моделью для изучения патофизиологии инсулинорезистентности, нарушения гомеостаза глюкозы и раннего диабета 2 типа.21 В настоящем исследовании мы исследовали влияние инсулинорезистентности на размер компартмента эндолимфатической жидкости улитки (EFC) in vivo у мышей C57BL / 6J, получавших HFD, с использованием МРТ с контрастированием. Эндолимфатическая водянка (EH), расширение EFC, рассматривалась как маркер риска развития кохлеарной дисфункции.Ранее мы использовали МРТ и контраст гадолиния, чтобы продемонстрировать, что ГЭ развивается в ответ на лечение вазопрессином и селективными ингибиторами ФДЭ, цилостамидом, ролипрамом и силденафилом соответственно20 22, и, кроме того, показали, что водянку можно предотвратить введением спиронолактона в определенных условиях23
Для изучения передачи сигналов инсулина in vitro были использованы слуховые клетки House Ear Institute-Organ of Corti 1 (HEI-OC1), одна из немногих линий слуховых клеток, доступных для исследовательских целей.24 Клетки HEI-OC1 считаются моделью органа клеток Корти, поскольку они экспрессируют маркеры как волосковых клеток, так и поддерживающих клеток.
Методы
Животные и диета с высоким содержанием жиров
Всего 20 самок мышей C57BL / 6J в возрасте 8 недель (Taconic, Дания) находились на 12-часовом световом цикле с неограниченным потреблением пищи и воды.
Исследование 1: шесть мышей C57BL / 6J кормили HFD (D12492, содержание жира 60 Е%; Research Diets, Нью-Брансуик, Нью-Джерси, США), а шесть мышей кормили контрольной диетой (CD) в течение 30 дней.После этого области EFC оценивали с помощью МРТ с гадолиниевым контрастом, как описано в разделе «Магнитно-резонансная томография».
Исследование 2: восемь мышей C57BL / 6J кормили HFD в течение 30 дней. Площади EFC оценивали дважды для каждой мыши, как до, так и после 30 дней HFD, с использованием МРТ с гадолиниевым контрастом.
Магнитно-резонансная томография
Животных анестезировали 3,5% изофлураном в смеси с 200 мл / мин кислорода и 200 мл / мин закиси азота и поддерживали на уровне 1.5% –2% изофлурана внутри магнита. Контрастное вещество гадолиний (Dotarem, Guerbet, Villepinte, Франция) (гадотерная кислота, 279,3 мг / мл, 0,5 ммоль / мл) вводили внутрибрюшинно (100 мкг / 20 г) в левый квадрант брюшной полости за 55–65 мин до МРТ. Индукционная камера поддерживалась теплой при 37 ° C. Внутри магнита контролировали частоту дыхания животного (SA Instruments, Нью-Йорк, США) и температуру тела поддерживали с помощью циркуляционной водяной бани Lauda Rc6 CS (Köningshofen, Германия).
МРТ выполняли, как описано ранее20 22 23, с магнитом 9,4 Тл (Agilent, Пало-Альто, США) с использованием электроники Avance III (Bruker, Эттлинген, Германия). Система оборудована системой градиента с внутренним диаметром 12 см с максимальной силой градиента 670 мТл / м. Изображения животных получали с помощью квадратурного передающего / принимающего криозонда (Bruker). Трехмерные (3D) изображения, взвешенные по T1, были получены с помощью 3D-последовательности градиентного эхо-сигнала; время повторения TR: 11 мс, время эха TE: 3,695 мс, количество усреднений: 2, размер матрицы данных 220 × 220 × 147 пикселей, поле зрения 15 × 15 × 10 мм 3 .Изображения были реконструированы путем заполнения нулями для увеличения видимого разрешения изображения до размера матрицы 440 × 440 × 294 пикселей и видимого разрешения пикселей 0,034 мм.
Количественная оценка гадолиния в эндолимфатическом пространстве относительно перилимфатического пространства
Synedra view personal 16 (Synedra, Innsbruck, Австрия), а также Adobe Photoshop CS5 (Adobe, Сан-Хосе, США) использовались для постпродакшн обработки изображений для количественной оценки интенсивности сигнала в интересующих областях, а также для маркировки и демонстрации перилимфы в барабанной лестнице (ST) и преддверии лестницы (SV) и эндолимфы в средней лестнице (SM).Для измерений использовались изображения, параллельные модиолусу улитки мыши.20 22 23 Чтобы оценить влияние различных методов лечения на размер EFC, относительную площадь SM в базальном повороте улитки оценивали путем расчета отношения между SM (эндолимфа, без контрастного усиления) и SM плюс SV (перилимфа, с усиленным контрастом). Соотношение площадей впоследствии было преобразовано в процентное соотношение, как показано на рисунках 1 и 2. Наблюдатель, оценивающий и очерчивающий перилимфатические и эндолимфатические размеры, был не осведомлен о назначенном лечении.
Рисунок 1Кормление с использованием диеты с высоким содержанием жиров (HFD) вызывает расширение компартмента эндолимфатической жидкости у мышей C57BL / 6J по сравнению с мышами, получавшими контрольную диету (CD). (A) Относительные площади эндолимфатических отделов в отдельных ушах. (B) Уши в группах CD и HFD (среднее значение ± SEM: 65,3 ± 2,5 и 70,4 ± 3,4, соответственно; p = 0,00088). (C) Правое и левое ухо в группах CD и HFD (среднее значение ± SEM: 64,7 ± 3,7 и 70,7 ± 4,3; p = 0,028 для правого уха и 66,0 ± 1,1 и 70,0 ± 3,1; p = 0,011 для левого уха). R, правый; L, слева.(D) Показан пример изображений, параллельных modiolus улитки мышей, получавших HFD или CD, проанализированных с помощью МРТ. Контраст гадолиния перемещается в перилимфу (SV и ST), но не в эндолимфу (SM), поэтому перилимфа выглядит белой, а эндолимфа — черной. Обратите внимание на значительное уменьшение относительной площади SV после кормления HFD. Относительную площадь SM в базальном повороте улитки оценивали, как описано в разделе «Методы». Соотношение площадей впоследствии было преобразовано в процентное соотношение, как показано на A – C.SV, преддверие лестницы; ST, scala tympani; SM, scala media; 1-я, первая очередь; 2-я, вторая очередь. (E) Динамика изменений массы тела от исходного уровня в возрасте 8 недель и в течение 30 дней на CD (шесть мышей) и HFD (шесть мышей). МРТ была проведена в указанный день. Данные представлены как средние значения ± стандартное отклонение. * P <0,05, ** p <0,01, *** p <0,001, HFD против CD.
Рисунок 2Кормление с использованием диеты с высоким содержанием жиров (HFD) вызывает расширение компартмента эндолимфатической жидкости у мышей C57BL / 6J при сравнении одного и того же уха до и после кормления.(A – C) Данные представлены как: (A) означает ± SEM, соответствующее всем животным в исследовании, показанном для всех ушей (T), правого уха (R) и левого уха (L) (среднее значение ± SEM: до HFD ( до), 66,4 ± 0,50 (T), 65,6 ± 0,7 (R), 67,2 ± 0,6 (L) и после HFD (после), 72,7 ± 1,1 (T), 73,7 ± 1,7 (R), 71,6 ± 1,5 (L) соответственно; p = 0,000073 (T), 0,015 (R), 0,021 (L), (B) как отдельные значения до и после HFD и (C) как отдельные значения для каждого уха с предварительными значениями, установленными на 1. (D) Пример изображений, параллельных модулю улитки, проанализированных с помощью МРТ, как до, так и после кормления HFD.Контраст гадолиния перемещается в перилимфу (SV и ST), но не в эндолимфу (SM), поэтому перилимфа выглядит белой, а эндолимфа — черной. Обратите внимание на значительное уменьшение относительной площади SV после кормления HFD. Относительную площадь SM в базальном повороте улитки оценивали, как описано в разделе «Методы». Соотношение площадей впоследствии было преобразовано в процентное соотношение, как показано на A – C. SV, преддверие лестницы; ST, scala tympani; SM, scala media. (E) Динамика изменений массы тела от исходного уровня в возрасте 8 недель и в течение 30 дней на HFD (восемь мышей).МРТ проводилась в указанные дни. Данные представлены как средние значения ± стандартное отклонение. * P <0,05, ** p <0,01, *** p <0,001 по сравнению с -1 день.
Слуховые клетки HEI-OC1 и культура
Клетки HEI-OC1 культивировали в 6-луночных планшетах (6-луночный стандарт планшетов TC (культура ткани), Sarstedt, Numbrecht, Германия) в разрешающих условиях (33 ° C, 10%). CO 2 ) в среде Игла с высоким содержанием глюкозы, модифицированной Дульбекко (Sigma), содержащей 10% фетальной телячьей сыворотки (Sigma) без антибиотиков.24 После достижения слияния 70–80% клетки дважды промывали фосфатно-солевым буфером и предварительно инкубировали в течение 2 часов в бикарбонатном буфере Кребса-Рингера, содержащем 2 мМ глюкозы, 10 мМ HEPES, pH 7.4, 120 мМ NaCl, 5 мМ NaHCO 3 , 5 мМ KCl, 1,2 мМ KH 2 PO 4 , 2,5 мМ CaCl 2 , 1,2 мМ MgSO 4 и 0,2% бычий сывороточный альбумин (BSA) . После этого добавляли свежий буфер и клетки обрабатывали, как указано в разделе «Результаты». После обработки клетки собирали в буфере, содержащем 50 мМ TES (N- [Трис (гидроксиметил) метил] -2-аминоэтансульфоновая кислота), pH 7,4, 250 мМ сахарозы, 1 мМ EDTA, 2 мМ этиленгликольтетрауксусной кислоты (EGTA ), 40 мМ фенилфосфата, 5 мМ фторида натрия, 1 мМ дитиотреитола (DTT), 50 мкМ ванадата натрия, Pefabloc (Sigma), Complete (Roche, ингибиторы протеаз) и 1% NP40 (200 мкл / лунку) и подвергали воздействию обработка ультразвуком (10 коротких импульсов).Лизаты центрифугировали в течение 5 минут при 5000 × g, 4 ° C и супернатанты использовали для дальнейшего анализа.
SDS-PAGE и вестерн-блот-анализ
Лизаты клеток HEI-OC1 (20–30 мкг белка по данным Брэдфорда) смешивали с буфером для образцов LDS (лаурилдодецилсульфат) 4X (Invitrogen), содержащим 300 мМ DTT, и подвергали электрофорезу на 4–12% бисакриламидных гелях (Novex, Invitrogen). Белки переносили на мембраны Immobilon-P, PVDF (поливинилиденфторид) (Merck Millipore), блокировали 10% молоком в трис-буферном физиологическом растворе твин-20 (50 мМ Трис, pH 7.6, 150 мМ NaCl и 0,1% твин-20) в течение 30 мин и инкубировали при 4 ° C в течение ночи с указанными первичными антителами. Мембраны инкубировали со вторичными антителами, конъюгированными с пероксидазой хрена (HRP), в течение 1 часа при комнатной температуре, инкубировали с реагентом SuperSignal West Pico ECL (ферментная хемилюминесценция) (Thermo Scientific, Rockford, США) в течение 10 минут с последующей визуализацией (Molecular Imager ChemiDoc XRS + , Bio-Rad Laboratories, Сольна, Швеция) и количественной оценки (программное обеспечение Image lab, V.3.0, Bio-Rad Laboratories).
Флуоресцентная визуализация с полным внутренним отражением
Клетки HEI-OC1 культивировали на чашках со стеклянным дном (MatTek) и предварительно инкубировали, как описано, в течение 2 часов в бикарбонатном буфере Кребса-Рингера, содержащем 2 мМ глюкозы, 10 мМ HEPES, pH 7,4, 120 мМ NaCl, 5 мМ NaHCO 3 , 5 мМ KCl, 1,2 мМ KH 2 PO 4 , 2,5 мМ CaCl 2 , 1,2 мМ MgSO 4 и 0,2% БСА при 33 ° C. Клетки стимулировали без или с 10 нМ инсулина в течение 7 мин. Затем клетки фиксировали с использованием 4% параформальдегида и инкубировали с антителами, как указано (1 час на первичное антитело и 1 час на вторичное антитело) в буфере, содержащем 1% BSA, 1% козьей сыворотки и 0.05% сапонина. Для визуализации актина клетки инкубировали с фаллоидином (Invitrogen) в течение 1-2 часов.
Для получения изображений методом флуоресценции с полным внутренним отражением (TIRF) мы использовали коммерческую систему TIRF на основе микроскопа Nikon Ti-E eclipse, оснащенного масляным иммерсионным объективом 100 × Apo TIRF DIC с числовой апертурой 1,49 (Nikon Instruments), iXon Ultra Камера DU-897 EMCCD (Andor Technology) и четыре основных лазерных луча: 405 (куб, когерентный), 488 (меллес-грио), 561 (сапфировый, когерентный) и 640 (куб, когерентный) с соответствующими наборами фильтров.
Антитела
Следующие первичные антитела были использованы для вестерн-блот-анализа / TIRF-микроскопии, как указано: pACC Ser79 # 3661, ACC # 3662, pPKBSer473 # 9271, PKB # 9272, pAMPK Thr172 # 2535, anti-AMPK # 2603 (все от Cell Signaling), антитела PDE1B и PDE4D были от Scottish Biomedical, антитело PDE3B было произведено на дому, Hsp 90 (610418, BD Biosciences), GAPDH (Sigma-Aldrich, Сент-Луис, Миссури, США), синтаза жирных кислот (FAS ) (sc20140) были из Санта-Крус. Вторичные антитела против кролика и мыши, конъюгированные с HRP, были получены от Thermo Fisher Scientific (Рокфорд, Иллинойс, США) и GE Healthcare (Литтл Чалфонт, Великобритания) соответственно.
Иммунопреципитация и анализ активности AMP-активированной киназы in vitro
Лизаты, содержащие 5 мкг белка, инкубировали при 4 ° C в течение 1-2 часов на платформе для встряхивания с 2 мкг антитела AMPKα1, полученного в домашних условиях путем иммунизации кроликов пептидом включающие остатки 344–358 крысиного AMPKα1 (TSPPDSFLDDHHLTR) (Innovagen, Лунд, Швеция), конъюгированного с 5 мкл упакованного белка G-сефарозы (GE Healthcare Biosciences, Упсала, Швеция). Анализ AMP-активированной киназы (AMPK) выполняли точно так же, как описано ранее, с использованием пептида AMARA (AMARAASAAALARRR) (GL Biocem, Шанхай) в качестве субстрата (в течение 20 мин при 30 ° C).25 Включение 32 Р-фосфата выражали как пмоль включенного АТФ / мг белка / мин (мЕ / мг).
Измерение активности PDE
Клетки HEI-OC1 собирали в буфере PDE, содержащем 50 мМ TES, pH 7,4, 250 мМ сахарозу, 1 мМ EDTA, 1 мМ DTT и Complete (Roche, ингибиторы протеаз) (200 мкл / лунку). и подвергали ультразвуковой обработке (2 × 10 импульсов). Гомогенаты центрифугировали 5 мин при 5000 × g. Активности PDE1 и PDE4 измеряли в супернатантах. Активность PDE3 измеряли в мембранной фракции.Супернатант 5000 × g центрифугировали при 100000 × g в течение 60 мин при 4 ° C, и мембраны суспендировали в буфере PDE (500 мкл / планшет). Следующие ингибиторы PDE использовали в конечных концентрациях: 10 мкМ ингибитора PDE3 OPC3911 (Осака, Япония), 10 мкМ ингибитора PDE4 RO-20 (Roche) и 50 мкМ ингибитора PDE1 8MM-IBMX (Enzo Life Science, Фармингдейл, Нью-Йорк, США). Неселективный ингибитор PDE IBMX использовали в конечной концентрации 100 мкМ. Анализы проводили при 30 ° C в общем объеме 300 мкл буфера, содержащего 50 мМ TES pH 7.4, 250 мМ сахарозы, 1 мМ ЭДТА, 0,1 мМ EGTA и 8,3 мМ MgCl 2 , 0,5 мкМ цАМФ, 0,5 мкг овальбумина и 1 мкКи / мл 3 H цАМФ (55 000–65 000 имп / мин) 26
Измерение активности гормоночувствительной липазы
Клетки HEI-OC1 и жировая ткань мыши гомогенизировали в 0,25 М сахарозе, 1 мМ ЭДТА, 1 мМ DTE и ингибиторах протеаз (20 мкг / мл лейпептина, 2 мкг / мл антипаина, 1 мкг / мл). мл пепстатина), pH 7,0, используя стеклянный гомогенизатор. Для удаления жира из гомогената жировой ткани его центрифугировали при 110000 × g в течение 1 часа при 4 ° C, и обезжиренный инфранатант использовали для измерения активности гормоночувствительной липазы (HSL).В качестве положительного контроля при измерениях активности HSL использовали рекомбинантный крысиный HSL. Измерение активности HSL проводили с использованием 1 (3) -олеоил-2–0-олеилглицерина, аналога диацилглицерина, в качестве субстрата, как подробно описано Остерлундом и Холмом.27 Для оценки доли активности, приходящейся на HSL, образцы были предварительно инкубировали либо с нейтрализующей активность куриной сывороткой против HSL против крыс (приготовленной в домашних условиях), либо с предиммунной сывороткой в течение 15 мин при 37 ° C перед анализом. Общее содержание белка в образцах измеряли с использованием метода Брэдфорда, и активность выражали в мЕд / мг белка, где 1 ед. Соответствует высвобождению 1 мкмоль жирных кислот в минуту при 37 ° C.
Статистический анализ
Результаты выражены в виде среднего значения ± SEM. Различия между группами проверяли на статистическую значимость с использованием парного или непарного t-критерия Стьюдента. Значения P <0,05 считались статистически значимыми.
Результаты
Влияние инсулинорезистентности на внутреннее ухо мыши
Как показано на рисунке 1A – D, мыши, получавшие HFD, показали значительно более высокие EFC по сравнению с мышами, получавшими CD. HFD-индуцированная водянка развивалась как в правом, так и в левом ухе (рисунок 1C).Масса тела мышей, получавших HFD, была значительно выше через 14, 21 и 30 дней, соответственно, по сравнению с массой тела мышей, получавших CD (фигура 1E).
Мы также выполнили продольное исследование влияния HFD на размер EFC у мышей C57BL / 6J как до, так и после 30 дней кормления HFD. Как показано на фиг. 2A, D, HFD значительно вызвал расширение EFC. Гидропс, вызванный HFD, развился как в правом, так и в левом ухе (рис. 2А). На рисунке 2B значения до и после обработки показаны для каждого уха, а на рисунке 2C значение предварительной обработки было установлено на 1 для каждого уха.После начала кормления HFD значительное увеличение веса было получено через 7, 14, 21 и 30 дней (рисунок 2E).
Таким образом, в соответствии с известной ассоциацией между диабетом и дисфункцией внутреннего уха, у мышей с индуцированной HFD инсулинорезистентностью развивается EH.
Недавно было показано, что кортиев орган экспрессирует рецептор инсулина.17 Чтобы исследовать, может ли улитка быть прямой мишенью для передачи сигналов инсулина, мы использовали слуховые клетки HEI-OC1 в качестве модели органа из клеток Корти.
Инсулин индуцирует фосфорилирование PKB в клетках HEI-OC1
Инсулин индуцирует дозозависимое и зависимое от времени фосфорилирование PKB в контролирующем активность сайте Ser473 (рис. 3A, B) в плазматической мембране слуховых клеток HEI-OC1 (рисунок 3C). Клетки были совместно окрашены актином, чтобы подтвердить, что анализ изображений проводился вблизи плазматической мембраны (рис. 3C, верхняя панель).
Рисунок 3Инсулин (инсулин) индуцирует фосфорилирование протеинкиназы B (PKB) в плазматической мембране слуховых клеток Института домашнего уха Corti 1 (HEI-OC1).(A) Клетки HEI-OC1 стимулировали различными концентрациями ins в течение 10 минут (n = 4-6) и (B) с помощью 1 нМ ins в течение 0-40 минут (n = 3-6). Фосфорилирование PKB анализировали вестерн-блоттингом с использованием антитела PKB Ser473. (C) Визуализация флуоресценции полного внутреннего отражения (TIRF) выполнялась на клетках HEI-OC1, стимулированных без или с 10 нМ ins в течение 7 минут перед фиксацией, и клетках, совместно окрашенных антителом PKB Ser473 и антителом к актину (верхняя панель) или PKB. Антитело Ser473 (нижняя панель). Показано репрезентативное изображение из трех экспериментов.Масштабная линейка = 20 мкм. (D) Клетки HEI-OC1 стимулировали без или с помощью ins (1 и 10 нМ) в течение 30 минут без или со 100 мкМ вортманнина (сусло) (добавляли за 30 мин до ins) (n = 3), (E) 10 нМ ins с или без 30 нМ изопротеренола (изо) (n = 4) или (F) 1 нМ ins с или без 100 мкМ IBMX (n = 6). Фосфорилирование PKB анализировали вестерн-блоттингом с использованием антитела PKB Ser473 (образцы показаны в двух экземплярах для E и F). (G) Общие клеточные лизаты или мембранные фракции (для измерения активности фосфодиэстеразы (PDE) 3) были проанализированы на PDE1 (ингибируется 8 MM IBMX) (n = 5), PDE4 (ингибируется ролипрамом) (n = 5) и PDE3. (ингибируется цилостамидом) (n = 4), а также для активности PDE, ингибируемой IBMX (ингибируемый (i) PDE IBMX) (n = 5), как указано.Показаны результаты вестерн-блоттинга с использованием антител PDE4D, PDE1B и PDE3B (нижняя панель). Блоты представляют от трех до шести независимых экспериментов. Сигналы вестерн-блоттинга pPKB нормализовали к необработанным контрольным образцам, не стимулированным ins (A, B, D, E), или к образцам, стимулированным только ins (F). Данные представлены в виде средних значений ± стандартная ошибка среднего. * P <0,05, *** p <0,001 по сравнению с контролем (A, B, D, E), † p <0,05 только по сравнению с IN (D, E, F). Hsp90, белок теплового шока 90.
Инсулино-индуцированное фосфорилирование PKB блокировалось вортманнином, ингибитором PI3-киназы, изопротеренолом, агонистом β-адренергических рецепторов, и IBMX, общим ингибитором PDE (рисунок 3D – F).Ролипрам (ингибитор PDE4), 8 MM IBMX (ингибитор PDE1) или цилостамид (ингибитор PDE3) не оказывали значительного противодействия инсулино-индуцированному эффекту (данные не показаны), хотя соответствующий подтип PDE был выражен (рисунок 3G нижняя панель) и каталитически активен. (рис. 3G верхняя панель) в ячейках HEI-OC1.
Инсулин снижается, а AICAR увеличивает фосфорилирование ацетил-CoA-карбоксилазы в клетках HEI-OC1.
Инсулин снижает фосфорилирование ацетил-CoA-карбоксилазы (ACC) в Ser79, сайте ингибирования фосфорилирования (рис. 4A).AICAR, активатор AMPK, в свою очередь, увеличивал фосфорилирование ACC Ser79 (рисунок 4B). Активация AMPK была подтверждена повышенным фосфорилированием Thr172 (фигура 4C) и повышенной киназной активностью in vitro (фигура 4D). FAS, ферментный комплекс, катализирующий синтез жирных кислот (рисунок 4F), а также HSL, фермент, ограничивающий скорость липолиза (рисунок 4E), были экспрессированы в клетках HEI-OC1. Липазная активность, измеренная с использованием аналога диацилглицерина в качестве субстрата, ингибировалась примерно на 50% антисывороткой к HSL, тогда как активность диацилглицерин липазы в гомогенате жировой ткани, а также рекомбинантный HSL полностью подавлялась (рисунок 4E).
Рисунок 4Инсулин снижает, а AICAR увеличивает фосфорилирование ацетил-КоА-карбоксилазы (АСС) в клетках Corti 1 Института уха дома (HEI-OC1). (A) Клетки HEI-OC1 стимулировали без или с 1 нМ инсулина в течение 0–60 мин (n = 4) или (B – D) с 1 мМ AICAR (n = 3) в течение 60 мин. Состояние фосфорилирования АСС и AMP-активированной киназы (AMPK) анализировали с помощью вестерн-блоттинга с использованием антител ACC Ser79 (A, B) и AMPK Thr172 (C), а состояние активности AMPK измеряли в отношении пептидного субстрата AMARA в иммунопреципитатах AMPK. (n = 3) (D).Блоты представляют от трех до четырех независимых экспериментов (образцы показаны в двух экземплярах). Сигналы вестерн-блоттинга pACC и pAMPK нормализовали к контрольным образцам, не стимулированным инсулином или AICAR. Для влияния инсулина на фосфорилирование ACC (A) для количественной оценки использовали 20-минутную временную точку. (E) Активность гормоночувствительной липазы (HSL) определяли путем иммунного ингибирования и сравнивали с контрольным образцом, инкубированным с преиммунной сывороткой, как описано в разделе «Методы» (n = 3).(F) Клетки HEI-OC1 стимулировали без или с 10 нМ инсулина в течение 0-60 мин. Экспрессию FAS анализировали с помощью вестерн-блоттинга с использованием антитела FAS, показан типичный блоттинг. Данные представлены в виде средних значений ± стандартная ошибка среднего. * P <0,05, ** p <0,01 по сравнению с контролем (con) (A – D). ДАГ, диацилглицерин; FAS, синтаза жирных кислот; GAPDH, глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназа; Hsp90, белок теплового шока 90; инсулин, инсулин.
Обсуждение
В этом исследовании мы исследовали наличие и размер EH у мышей C57BL / 6J, получавших HFD, с использованием МРТ и гадолиния, 20 22 23 и передачи сигналов инсулина в слуховых клетках HEI-OC1.Важно отметить, что развитие EH использовалось как маркер дисфункции внутреннего уха, но механизмы, участвующие в развитии водянки, не рассматривались. Наши результаты показывают, что у мышей C57BL / 6J, получавших HFD, действительно развивается EH внутреннего уха и что передача сигналов инсулина происходит в клетках HEI-OC1.
Мыши C57BL / 6J, получавшие HFD, представляют собой надежную и широко используемую модель для изучения эффектов инсулинорезистентности, нарушения гомеостаза глюкозы и раннего диабета 2 типа.21 В недавнем исследовании нашей лаборатории с использованием той же партии HFD и той же мыши штамм, начало инсулинорезистентности и снижение индуцированного инсулином фосфорилирования PKB было отмечено уже через 2 дня на HFD.28
Наши настоящие результаты, указывающие на дисфункцию внутреннего уха при кормлении HFD с использованием EH в качестве считывания, согласуются с несколькими предыдущими исследованиями, показывающими повреждение внутреннего уха, вызванное HFD.10 29 30 Насколько нам известно, развитие in vivo о EH с использованием MR и гадолиния ранее не сообщалось в контексте инсулинорезистентности и диабета. Кроме того, следует отметить, что в настоящем исследовании EH развивалось уже после 4 недель кормления HFD.
Следует отметить, что диабет типа 1 и диабет 2 типа могут влиять на слуховые системы с помощью общих механизмов, связанных с гипергликемией.Тем не менее, инсулинорезистентность или гиперинсулинемия, характерные для диабета 2 типа, могут вызывать повреждение через отдельные механизмы.10 11 Таким образом, развитие ГЭ в нашем исследовании может быть связано с системной гипергликемией и / или инсулинорезистентностью / гиперинсулинемией. Было показано, что введение инсулина морским свинкам приводит к снижению [K + ] и увеличению [Na + ] в эндолимфе, что, увеличивая осмотическое давление, может привести к EH.13 14 Кроме того, было показано, что введение инсулина морским свинкам снижает микрофонику улитки, а введение инсулина овцам показало снижение DPOAE, что указывает на потерю функции наружных волосковых клеток.15 16 Интересно, что в недавнем поперечном исследовании инсулинорезистентность, нарушение глюкозы натощак и дисфункция бета-клеток были описаны как независимые факторы риска нарушения слуха. 12
Развитие ГЭ также может быть связано с измененными уровнями жировой ткани. такие факторы, как повышенный приток свободных жирных кислот, повышенное высвобождение провоспалительных цитокинов и измененная секреция адипокинов.31 Интересно, что адипонектин, один из основных адипокинов, выделяемых из адипоцитов, считается медиатором связанного с ожирением и возрастного слуха. обесценение.32
Обнаружение того факта, что классическая передача сигналов инсулина с участием узла PI3-киназы / PKB имеет место в клетках HEI-OC1, согласуется с недавним исследованием, показывающим экспрессию рецептора инсулина в поддерживающих клетках кортиевого органа мыши17, а также с экспрессией сигнальных компонентов инсулина в сенсорном эпителии мешочка человека.19 20 Что касается сигнального узла PI3-киназы / PKB, несколько исследований продемонстрировали, что снижение передачи сигналов PI3-киназы / PKB в органе клеток Корти связано со слухом потеря.33 34 Кроме того, после лечения аминогликозидами было показано, что передача сигналов PI3-киназы / PKB защищает от ототоксичности гентамицина в эксплантатах кортиевого органа. 35 Эти результаты совместимы с негативным влиянием кортиевого инсулинорезистентного органа на слух.
Перекрестная связь между инсулином и цАМФ очень важна, цАМФ является ключевым компонентом в регуляции гомеостаза ионов и жидкости во внутреннем ухе36, 37 Например, как и в почках, во внутреннем ухе вазопрессин действует на аквапорин. 2 и перенос жидкости за счет увеличения цАМФ.36 Открытие того, что IBMX, общий ингибитор PDE, может имитировать способность изопротеренола снижать сигнальную способность инсулина, указывает на роль PDEs в перекрестном взаимодействии с инсулином. Экспрессия расщепляющих цАМФ и цГМФ ферментов PDE1B, PDE3B и PDE4D в слуховых клетках HEI-OC1 согласуется с предыдущими результатами, показывающими экспрессию этих и других членов семейства PDE в мешочке человека19 38, и с результатами, показывающими развитие EH в ответ на ингибиторы PDE3 и PDE4.20 Однако мы не смогли продемонстрировать связь между PDE1, PDE3 или PDE4 и передачей сигналов инсулина в клетках HEI-OC1, как показано в адипоцитах и гепатоцитах, где инсулин снижает цАМФ путем активации PDE3B. 39
Наши результаты показывают, что ферменты, участвующие в de novo липогенез и липолиз, ACC, FAS и HSL, экспрессируются в клетках HEI-OC1, и что инсулин снижает фосфорилирование ACC. Последнее предположительно связано с повышенным синтезом жирных кислот и образованием триглицеридов.Мы также показываем, что фосфорилирование ACC увеличивалось, когда клетки инкубировали с AICAR, активатором AMPK, основным регулятором клеточного энергетического гомеостаза. Ранее было показано, что измененная экспрессия / активность AMPK в кортиевом органе защищает от потери слуха, а также способствует потере слуха после акустической чрезмерной стимуляции.40 41 Роль ACC в AMPK-опосредованных эффектах на слух еще предстоит выяснить.
Интересно, что липидные капли были обнаружены в клетках Хенсена в слуховом органе, и было высказано предположение, что эти капли играют важную роль в воспалительных реакциях в улитке.42 В адипоцитах основная роль HSL состоит в том, чтобы катализировать гидролиз накопленных триацилглицеринов в периоды нехватки энергии.39 Помимо генерации энергетических субстратов, HSL может также обеспечивать слуховые клетки липидными сигнальными молекулами, например, длинными молекулами. цепной ацил-КоА и диацилглицерин (DAG), который был описан в других типах клеток, например, в бета-клетках поджелудочной железы. 43 В различных клетках, не продуцирующих адипоциты или не продуцирующих стероиды, включая линии бета-клеток и На островках крысы и мыши активность липазы DAG находится в диапазоне 2.2–9,2 мЕд / мг белка и иммуноингибирование HSL составляло от 22% до 77% 43, что согласуется с нашими результатами на клетках HEI-OC1.
В заключение, инсулин может воздействовать на кортиев орган с помощью механизмов, используемых в классических клетках-мишенях для действия инсулина. Таким образом, дефекты действия инсулина внутреннего уха могут способствовать ранее описанной связи между диабетом и дисфункцией внутреннего уха.1–5 Возможно, что прямые эффекты передачи сигналов инсулина на регуляторные системы для гомеостаза жидкости и ионов, а также на энергетический метаболизм действуют как новый механизм регуляции кортиева органа в нормальных условиях и при болезни.Хотя в настоящем исследовании механизмы развития EH не рассматривались, возможно, что дефекты действия инсулина в кортиевом органе способствуют развитию EH, поскольку система вазопрессин / аквапорин 2, а также ключевые переносчики ионов, Na , K-АТФаза и транспортер натрия Enac, как известно, экспрессируются в органе Corti.44–47. Интересно, что в клетках почек инсулин, как было показано, регулирует эти транспортеры.48 49 С другой стороны, EH может просто быть маркер риска развития дисфункции внутреннего уха / улитки независимо от причинной этиологии, что, возможно, делает орган кортиевых клеток более уязвимым для метаболических стрессоров, таких как нарушение регуляции гомеостаза глюкозы и инсулинорезистентность / гиперинсулинемия.Глюкоза считается основным источником энергии для улитки, и, что интересно, недавно было сообщено об инсулинозависимом поглощении глюкозы кортиевым органом.17 Хотя нет никаких указаний на то, что клетки из stria vascularis экспрессируют рецепторы инсулина, 17 мы планируем исследовать их в ближайшем будущем из-за их ключевой роли в производстве эндолимфы. Однако мы ожидаем проблем с разделением вклада клеток из улитки и сосудистой полоски, поскольку состав эндолимфы и эндокохлеарный потенциал зависят как от активной электрогенной экструзии K + в среду лестницы посредством сосудистой полоски, так и от пассивный отток K + из scala media, в основном через волосковые клетки в кортиевом органе.50
Ограничения исследования и будущие исследования
Мы использовали MR и контраст гадолиния, чтобы продемонстрировать расширение EFC в качестве маркера дисфункции внутреннего уха в контексте HFD / инсулинорезистентности. Ограничением этого исследования, однако, является то, что мы не исследовали непосредственно улитку мышей в отношении морфологии (IHC), экспрессии белка и, что наиболее важно, мы не предоставили прямых доказательств того, что улитка in vivo является мишенью действия инсулина или сопротивление. Будет важно связать такие механизмы с (дис) регуляцией жидкости внутреннего уха и энергетического гомеостаза, и мы планируем ответить на эти вопросы в следующих исследованиях.Также будет важно принять во внимание взаимосвязь между диабетом 2 типа и возрастной потерей слуха, поскольку на животных моделях было показано, что возрастная потеря слуха усиливается диабетом5 9
Abstract translation
This Веб-файл был создан издательской группой BMJ Publishing Group из электронного файла, предоставленного автором (авторами), и не редактировался для содержания.
|
| ||||||||||||||||||||
Beta-2 Transferrin — обзор
Утечка CSF
Утечка CSF может происходить несколькими путями.ЦСЖ может попадать в лобные пазухи, решетчатые пазухи, клиновидные пазухи или, реже, в верхнечелюстные пазухи, стекать в полость носа (или попадать непосредственно в полость носа) и выходить в виде ринореи ЦСЖ. Он может проникать в воздушные клетки сосцевидного отростка или в среднее ухо и выводиться через перфорированную барабанную перепонку как оторея спинномозговой жидкости. Оторея спинномозговой жидкости из-за разрыва наружного слухового прохода также возможна, но редко. ЦСЖ в воздушных клетках или среднем ухе может также перемещаться по евстахиевой трубе и выходить в виде ринореи ЦСЖ или, что более часто, стекать в глотку, где она проглатывается.Попадание спинномозговой жидкости в эти обычно уединенные пространства может происходить из-за травмы или эрозии опухоли, но в послеоперационном периоде причиной почти наверняка является хирургическое проникновение, которое не было распознано или не было должным образом восстановлено. Вытекание спинномозговой жидкости также может происходить через хирургический разрез в случаях неадекватного закрытия раны с гидроцефалией или без нее.
Утечка спинномозговой жидкости после операции по менингиоме, что неудивительно, является наиболее частым после резекции поражения основания черепа. Сообщаемая частота варьируется, но одно исследование показало, что 17% из 257 резекций опухоли основания черепа (в основном менингиомы) были осложнены утечкой спинномозговой жидкости. 62 Диагноз часто очевиден, но в случаях неуверенности можно провести анализ на бета-2-трансферрин в вытекающей жидкости, поскольку этот белок обнаружен только в спинномозговой жидкости. 65
Утечка спинномозговой жидкости является аварийной ситуацией из-за риска восходящего менингита 66, 67 и пневмоцефалии напряжения. 68 Если утечка из разреза, этот разрез следует зашить, но этого недостаточно. Все пациенты с послеоперационной утечкой спинномозговой жидкости должны пройти компьютерную томографию (КТ) для определения источника.Мелкие разрезы изображения и / или закапывание рентгеноконтрастного красителя в субарахноидальное пространство могут помочь в его локализации. Необходимо учитывать сообщения об источниках утечки, удаленных от места проведения работ. 69
Если компьютерная томография обнаруживает восстанавливаемый источник или если хирург не полностью уверен в тщательной облитерации воздушной пазухи и закрытии раны, пациент должен как можно скорее вернуться в операционную для исследования и устранения потенциальных источников утечки. Если это соответствует источнику утечки или первоначальной операции, можно рассмотреть возможность эндоназального эндоскопического восстановления. 70 Если компьютерная томография не обнаруживает источник утечки и , хирург полностью уверен в тщательной облитерации воздушной пазухи и закрытии раны, может быть предпринята попытка наружного люмбального дренажа, чтобы отвести поток спинномозговой жидкости от источника утечки и позволить это лечить. Во время исследования рекомендуется скорость дренирования 10 мл / час, поскольку при более высоких скоростях возникает риск чрезмерного дренирования (нормальная выработка спинномозговой жидкости составляет примерно 20 мл / час). Мы настоятельно рекомендуем слить 10 мл ежечасно, используя метод «открыть / закрыть», а не непрерывно капать.Последний склонен к случайному катастрофическому чрезмерному дренажу, который может привести к разрушительным осложнениям, таким как пневмоцефалия с натяжением или без него, 71, 72 внеаксиальное кровоизлияние из обвисшей паренхимы и растянутых кровеносных сосудов, грыжа, 72 и сообщения о временная слепота. 72 Мы также рекомендуем, чтобы продолжительность дренажа составляла приблизительно 5 дней, чтобы дать источнику утечки достаточный шанс на заживление. Следует избегать частых преждевременных «попыток пережатия» или «проблем с утечкой», поскольку они могут вызвать прорыв жидкости через участки слабого предварительного заживления.Следует отметить, что внешний люмбальный дренаж вряд ли поможет устранить утечку в тех случаях, когда утечка была неожиданной и не было предпринято никаких попыток первичного ремонта. В этих случаях утечка будет через костные отверстия без возможности вторичного рубцевания, и часто бывает целесообразно немедленно вернуться в операционную. В тех случаях, когда утечка считалась потенциальной проблемой и предпринималась попытка первичного ремонта основания черепа, вероятность успеха с помощью поясничного дренирования позвоночника является разумной.
Если утечка спинномозговой жидкости сопровождается стойкой гидроцефалией, следует рассмотреть возможность шунтирования.Следует иметь в виду возможность пневмоцефалии (с риском напряжения) из-за реверсирования потока через неизлечимый источник утечки после шунтирования. Среди пациентов с послеоперационной опухолью основания черепа (в основном менингиомой) с утечкой спинномозговой жидкости 23% в конечном итоге потребовалось шунтирование в одном ретроспективном исследовании. 62
Обсуждается использование профилактических антибиотиков для предотвращения менингита при наличии утечки спинномозговой жидкости; тем не менее, литература, касающаяся посттравматических утечек спинномозговой жидкости, кажется, предполагает, что их использование действительно снижает частоту менингита, особенно если утечка присутствует более 7 дней. 73, 74
В попытке снизить частоту утечки спинномозговой жидкости после резекции опухоли основания черепа некоторые нейрохирурги начинают отведение спинномозговой жидкости до операции. Один ретроспективный обзор резекций опухоли основания черепа выявил статистически значимое снижение послеоперационной скорости утечки спинномозговой жидкости при установке люмбального дренажа перед операцией. 75 Обзор опухолей мостомозжечкового угла выявил тенденцию к увеличению частоты отореи или ринореи в спинномозговой жидкости, если гидроцефалия присутствовала до операции.Авторы предположили, что предоперационная установка вентрикулостомии может помочь в предотвращении утечки у этих пациентов. 63
Тесты на белок плазмы: как интерпретировать аномальные результаты | Горячая тема
Прочтите эту статью, чтобы узнать больше о:
- Состав белков плазмы и их функции в организме
- , когда необходимы тесты на белок плазмы и какую информацию они предоставляют
- методов, используемых для идентификации специфических белков и антител.
Ключевые точки
Действия по внедрению STP и ICS
Рекомендации по обучениюПрочитав эту статью, «проверьте и поразмышляйте» над своими обновленными знаниями с помощью наших вопросов с несколькими вариантами ответов. По нашим оценкам, это занятие займет у вас 30 минут и составит 0,5 кредита CPD.
Белок плазмы — это собирательный термин для белков, присутствующих в крови. Белки плазмы делятся на несколько групп и выполняют множество функций, включая поддержание осмотического давления и транспортировку липидов, гормонов, витаминов и минералов.Некоторые белки плазмы являются ферментами, а другие выполняют функции свертывания крови и иммунной системы. За исключением иммуноглобулинов, все основные белки крови синтезируются в печени.
Тест на общий белок дает приблизительное измерение всего белка плазмы (за исключением фибриногена, когда тестирование проводится на образцах со сгустками). При типичном референсном диапазоне 60–80 г / л белки плазмы 1 составляют около 7% от массы плазмы 2 и 0,5% от общей массы тела.
Сыворотка Альбумин составляет около 55% белка плазмы (типичный референсный диапазон: 35–55 г / л). 3,4 Он поддерживает осмотическое давление плазмы и участвует в транспортировке кальция, липидов и стероидных гормонов.
Глобулины составляют примерно 35% белков плазмы (типичный референсный диапазон: 20–35 г / л). 5,6 Глобулины участвуют в ряде процессов, включая транспорт ионов, гормонов и липидов; реакции острой фазы; и, как иммуноглобулины, иммунный ответ. Глобулины и делятся на четыре подгруппы: 2
- альфа 1 (в основном состоит из альфа 1 антитрипсин)
- альфа 2 (включая гаптоглобин и церулоплазмин)
- бета (включая трансферрин и некоторые компоненты комплемента)
- гамма (преимущественно иммуноглобулины и С-реактивный белок [CRP]).
Фибриноген — это растворимый белок, который составляет около 6,5% белка плазмы. 7 Превращение фибриногена в нерастворимый белок фибрин является центральным процессом свертывания крови.
Остальные белки плазмы состоят из сотен отдельных белковых молекул. По отдельности они присутствуют в небольших количествах, но вместе они составляют примерно 1% белка плазмы и играют решающую роль в качестве регуляторных белков, таких как ферменты, проферменты и гормоны. 8
Причины практического измерения белка
Белки плазмы неоднородны по своей природе и участвуют во многих сложных функциях организма. Нарушения белков плазмы могут быть первичными (причина конкретных патологий) или вторичными (результат широкого спектра патологических процессов). Аномальная протеинурия также может быть результатом различных заболеваний.
Причины, по которым терапевт может запросить измерение белка плазмы, включают исследования симптомов, аллергии и иммунитета (см. Вставку 1).
Врач общей практики может запросить измерение белка плазмы, когда:
- исследование конкретного симптома, например периферического отека
- для диагностики воспалительного процесса или аутоиммунного заболевания (например, тестирование на антинуклеарные антитела при оценке системной красной волчанки [СКВ])
- диагностика заболеваний костного мозга, включая множественную миелому
- оценка аллергии
- исследование на иммунодефицит у пациентов с рецидивирующими инфекциями
- оценка иммунитета к инфекциям, таким как гепатит B или краснуха, с помощью специфических тестов на антитела
- изучает возможную целиакию путем измерения общего иммуноглобулина А (IgA) и антител к тканевой трансглутаминазе IgA.
Панельные тесты печени , например, те, которые запрашиваются в рамках мониторинга лекарств, могут выявить белковые аномалии, требующие дальнейшего исследования. 10
Оценка связанного с беременностью протеина плазмы A (PAPP-A) вместе с измерением хорионического гонадотропина (ХГЧ) в плазме крови и ультразвуковым исследованием затылочной прозрачности (вместе известное как скрининг в первом триместре) предлагается на ранних сроках беременности (10– 14 недель), чтобы оценить риск хромосомного нарушения плода, такого как синдром Дауна (трисомия 21) или синдром Эдвардса (трисомия 18). 11
Анализ мочи на белок может помочь в диагностике мочевой инфекции, первичного заболевания почек, включая нефротический синдром, вторичного заболевания почек, например, при диабете, множественной миеломе и преэклампсии во время беременности. 12
Анализы крови печеночные (функциональные пробы печени)
«Обычное» панельное тестирование печени обычно включает измерение общего белка и альбумина. 10 Общий белок является мерой как сывороточного альбумина, так и глобулина, поэтому результаты тестов за пределами референсного диапазона могут отражать аномальные уровни одного или обоих этих компонентов.Условия, связанные с аномальными уровнями глобулина и альбумина, подробно описаны ниже и суммированы в таблице 1.
Пониженные уровни глобулинов в виде доли от общего белка наблюдаются у лиц с недоеданием и пациентов с нефротическим синдромом, когда наблюдается потеря белка почками. Высокий уровень общего белка, связанный с повышенным содержанием глобулина, может наблюдаться при обезвоживании, в ответ на острые инфекции, такие как пневмония и гепатит, и при хронических воспалительных состояниях, таких как ревматоидный артрит и системная красная волчанка (СКВ).Другие причины включают макроглобулинемию Вальденстрема, тип неходжкинской лимфомы, при которой аномальные клетки синтезируют большое количество макроглобулина, и множественную миелому, злокачественное новообразование плазматических клеток, характеризующееся чрезмерным синтезом моноклонального глобулина, которое обычно можно обнаружить в крови и моче. 9
Альбумин синтезируется только в печени, и уровень сывороточного альбумина может быть снижен, когда синтетическая функция печени значительно нарушена, например, при длительном заболевании печени или запущенном циррозе.Другие причины низкого уровня сывороточного альбумина включают тяжелое недоедание (которое может сопровождать связанное с алкоголем заболевание печени). Низкий уровень сывороточного альбумина также может быть очевиден при мальабсорбции белка, например, при болезни Крона, или при чрезмерной потере белка, например, из кишечника при энтеропатии с потерей белка, через кожу при отшелушивающем дерматите или после тяжелых ожогов, или со стороны почек при нефротическом синдроме. Тяжелые воспалительные состояния или шок также могут быть связаны с низким уровнем сывороточного альбумина, когда развивается катаболическое состояние и синтетическая функция печени переключается на производство других белков.Важным признаком низкого уровня сывороточного альбумина является развитие периферических отеков. Высокий уровень сывороточного альбумина обычно отражает обезвоживание. 4
| Сывороточный белок | Уровни | Сопутствующие состояния |
|---|---|---|
Глобулин | Уменьшено |
|
Увеличено |
| |
Альбумин | Уменьшено |
|
Увеличено | ||
СКВ = системная красная волчанка | ||
Анализ белка в моче
Некоторая потеря белка почками — это нормально, до 150 мг / день. Причины преходящей повышенной протеинурии включают: 1 3
- интенсивное упражнение
- фебрильная болезнь
- Инфекция мочевыводящих путей
- ортостатическая протеинурия (редко после 30 лет)
- беременность.
Моча может дать ложноположительный результат на белок, если образец загрязнен слизистой влагалища. Причины стойкой протеинурии включают: 1 3
- первичная болезнь почек, включая нефротический синдром и гломерулонефрит
- вторичное заболевание почек, например, связанное с диабетом и гипертонией.
Если уровень сывороточного альбумина низкий и есть подозрение на нефротический синдром, анализ мочи на белок поможет установить диагноз. 14 Если общий белок и глобулины высоки и возможны множественная миелома или макроглобулинемия Вальденстрема, может оказаться полезным тест на белок с помощью индикаторной полоски с последующим измерением белка Бенс-Джонса (моноклональный белок, обнаруживаемый в моче). 9
С-реактивный белок
C-реактивный белок — реагент острой фазы; белок, синтезируемый печенью и попадающий в кровь в ответ на повреждение ткани, инфекцию или другие воспалительные процессы.Считается, что его физиологическая роль заключается в связывании с поверхностью мертвых или умирающих клеток (и некоторых типов бактерий) для активации системы комплемента.
С-реактивный белок может быть резко повышен: 1 5
- после инфаркта миокарда
- при сепсисе
- при травме тканей
- после операции.
При инфекции или остром воспалении уровень CRP у пациента может повыситься до появления клинических симптомов.
Хронические воспалительные состояния, включая ревматоидный артрит, серонегативные артриты, такие как синдром Рейтера, васкулитные синдромы и воспалительные заболевания кишечника (хотя уровни обычно выше при болезни Крона, чем при язвенном колите), также связаны с повышенным уровнем CRP. Однако СКВ почти не вызывает увеличения СРБ, если нет сопутствующей инфекции. При хронических воспалительных состояниях уровень CRP может быть ценным для мониторинга активности заболевания, при этом высокие уровни указывают на обострение или неэффективное лечение, а падение или низкие уровни указывают на ремиссию. 16
Повышенный уровень СРБ — признак инфекции или воспаления, но это неспецифический маркер острой реакции. 16 Клинический анамнез, обследование и специальные диагностические тесты необходимы для установления причины повышенного СРБ. С-реактивный белок обычно приходит в норму после разрешения острого инфекционного или воспалительного процесса.
Электрофорез белков
Хотя стандартные панельные тесты печени и анализ белка в моче на месте дают общее представление об уровне белка, электрофорез белка может использоваться для разделения смеси белков, присутствующих в плазме или моче, на подразделения для получения дополнительной диагностической информации. 9 В этом процессе электрический ток используется для перемещения белковой смеси через тонкий слой геля. Расстояние, которое проходит каждый белок, зависит от ряда переменных, включая размер его молекулы и электрический заряд. Затем разделенные белки визуализируются с помощью красителя, который выявляет характерный узор из полос. Белки сыворотки разделяются на шесть основных групп с помощью белкового электрофореза: альбумин и альфа 1 , альфа 2 , бета 1 , бета 2 и гамма-глобулины.Размер каждой полосы дает качественное представление о количестве этой белковой фракции. Этот рисунок полос часто преобразуется в график с вертикальными пиками или пиками, где есть большое количество белка, и меньшими пиками или впадинами, где есть небольшие количества белка.
Аномальные образцы электрофореза связаны с множеством различных патологических состояний.
Повышенная гамма-фракция
Когда гамма-фракция увеличивается, пиковое моноклональное увеличение указывает на злокачественные или предзлокачественные клональные состояния, такие как множественная миелома и макроглобулинемия Вальденстрема, тогда как более широкое, поликлональное увеличение обычно отражает более общий воспалительный ответ. 17 Хотя моноклональное увеличение может вызывать беспокойство, наиболее частой причиной является моноклональная гаммопатия неопределенного значения (MGUS), которая обычно доброкачественная, но со временем может прогрессировать до злокачественного состояния. Наиболее частое повышение уровней гамма-глобулина является поликлональным и обычно связано с повышенной активностью иммунной системы, вызванной острой или хронической инфекцией, повреждением тканей или аутоиммунными заболеваниями соединительной ткани, такими как ревматоидный артрит, СКВ, склеродермия, хронический активный аутоиммунный гепатит и первичный билиарный холангит. . 9
Причины низкого уровня иммуноглобулинов включают: 9
- синдромы врожденного и приобретенного иммунодефицита
- другие состояния, связанные со снижением выработки иммуноглобулинов, такие как белковая недостаточность
- состояния, вызывающие чрезмерную потерю иммуноглобулинов, такие как сепсис, нефротический синдром, ожоги и энтеропатия с потерей белка.
Повышенная альфа-фракция
Изолированный альфа 1 аномалии обычно возникают из-за изменений в альфа-антитрипсине 1 , при этом снижение уровня происходит при врожденном дефиците альфа-антитрипсина 1 .Повышенные уровни могут быть обнаружены при острых воспалительных заболеваниях. 9
Alpha 2 Уровни макроглобулина могут повышаться при нефротическом синдроме, а уровни гаптоглобина повышаются при стрессе, инфекции, воспалении и некрозе тканей. Уровень гаптоглобина может снижаться при гемолитических состояниях. 9
Повышенная бета-фракция
Уровень бета-глобулина может повышаться при тяжелом дефиците железа, когда высок уровень трансферрина. Он может быть уменьшен при недоедании и циррозе печени. 9
Иммунофиксационный электрофорез и иммуноферментный анализ
При необходимости конкретные белки можно идентифицировать с помощью одного из семейства тестов, называемых иммунофиксационным электрофорезом. 9 В этих тестах белки сначала разделяются электрофорезом, а затем вступают в реакцию со специфическим антителом. Если антитело реагирует с исследуемым белком, комплекс антитело-белок остается в геле, в то время как другие белки вымываются, что позволяет идентифицировать и количественно оценить белок.Этот метод полезен при оценке множественной миеломы.
Антитела иммуноглобулина E (IgE) к специфическим антигенамможно измерить с помощью методов радиоаллергосорбентного тестирования (RAST) или иммуноферментного анализа (ELISA). Эти методы полезны при оценке аллергии, например, когда существует риск анафилаксии. 9
Ряд других методов, включая иммуноферментные анализы, можно использовать для количественного определения сывороточных уровней специфических антител, таких как антитела к краснухе и гепатиту B.Эти методы используются как для диагностики текущей инфекции, так и для подтверждения наличия иммунитета. Препарат специфического антигена (например, поверхностного антигена гепатита В) инкубируют с образцом сыворотки пациента. Если исследуемое антитело присутствует, оно будет связано с антигеном. Затем аналитические процессы используются для количественного определения количества антител, присутствующих в сыворотке. 18
Заключение
Белки плазмы выполняют множество функций и метаболических ролей.Нарушения их уровней могут быть связаны с рядом заболеваний, либо как первичная причина, либо как вторичный эффект. Понимание доступных тестов дает врачу полезные диагностические инструменты.
Д-р Джез Томпсон
RCGP / British Liver Trust Клинический чемпион по заболеваниям печени, клинический директор, Bevan Healthcare
Рекомендации по обучениюПрочитав эту статью, «проверьте и поразмышляйте» над своими обновленными знаниями с помощью наших вопросов с несколькими вариантами ответов.По нашим оценкам, это занятие займет у вас 30 минут и составит 0,5 кредита CPD.
Ключевые моменты
- Нарушения белков плазмы могут быть причиной конкретных патологий или быть результатом широкого спектра болезненных процессов
- Уровни альбумина могут быть:
- снизился при циррозе, тяжелом недоедании, энтеропатии с потерей белка и нефротическом синдроме
- повышенное обезвоживание
- Уровни глобулина могут быть:
- снижение недоедания и нефротического синдрома
- увеличивается при обезвоживании, острых инфекциях, хронических воспалительных состояниях, макроглобулинемии Вальденстрема и множественной миеломе
- Уровни альбумина могут быть:
- Причины транзиторной протеинурии включают физические нагрузки, лихорадку, инфекцию мочевыводящих путей, ортостатическую протеинурию и беременность, тогда как причины стойкой протеинурии включают первичное и вторичное заболевание почек, множественную миелому и макроглобулинемию Вальденстрема
- Скрининг в первом триместре на ранних сроках беременности, который используется для оценки риска конкретных хромосомных аномалий, включает измерение PAPP-A и ХГЧ в плазме, а также УЗИ шейного отдела шеи
- Уровень CRP может резко повыситься:
- после инфаркта миокарда или операции
- при сепсисе или травме тканей
- при хронических воспалительных состояниях, таких как ревматоидный артрит
- Повышенный CRP является неспецифическим маркером инфекции или воспаления; Для установления причины необходимы сбор анамнеза, осмотр и специальные диагностические тесты
- Электрофорез белков можно использовать для разделения белков, присутствующих в плазме или моче, на шесть групп компонентов:
- Поликлональный повышенный гамма-глобулин обнаруживается при инфекционных и воспалительных состояниях
- моноклональные подъемы являются признаком MGUS, множественной миеломы и макроглобулинемии Вальденстрема
- Электрофорез с иммунофиксацией можно использовать для идентификации определенных типов иммуноглобулинов, что полезно для подтверждения диагноза множественной миеломы
- IgE-антитела к специфическим аллергенам можно измерить с помощью RAST или ELISA, что может быть полезно при оценке аллергии
- Иммуноферментный анализ можно использовать для:
- идентифицировать и количественно определять иммуноглобулины, вырабатываемые в ответ на специфические антигены
- диагностирует острые и хронические инфекции, такие как инфекция гепатита B
- установить иммунитет, например, к краснухе.
PAPP-A = белок плазмы, связанный с беременностью; ХГЧ = хорионический гонадотропин человека в плазме крови; CRP = C-реактивный белок; MGUS = моноклональная гаммопатия неопределенного значения; IgE = иммуноглобулин E; РАСТ = тестирование радиоаллергосорбента; ELISA = иммуноферментный анализ
Действия по внедрению STP и ICS
написано доктором Дэвидом Дженнером, врачом-терапевтом, Калломптон, Девон
Следующие ниже действия по реализации предназначены для поддержки STP и ICS с проблемами, связанными с внедрением новых руководств на системном уровне.Наша цель — помочь вам подумать о том, как улучшить здравоохранение в рамках имеющихся ресурсов.
- Создайте онлайн-справочник по патологии и инструмент клинического алгоритма, к которому могут получить доступ все клиницисты, запрашивающие анализ крови:
- список доступных тестов с указаниями для их заказа и руководства по интерпретации результатов
- ссылка справочник на любую онлайн-систему заказа электронных патологий, которая используется в области STP
- определить любых необходимых тестов в системах управления направлениями и, если возможно, связать их в электронном виде со справочником
- Аудит и отслеживание запросов на образцы патологий, чтобы проверить их правильность и эффективное использование ресурсов.
STP = партнерство в области устойчивого развития и трансформации; ICS = комплексная система ухода
Список литературы
- Ассоциация клинической биохимии и лабораторной медицины. Монографии по аналиту вместе с Национальным каталогом лабораторной медицины (AMALC): общий белок. Доступно по адресу: www.acb.org.uk/docs/default-source/committees/scientific/amalc/total-protein.pdf (по состоянию на 10 июля 2018 г.).
- Rote N, McCance K. Структура и функция гематологической системы.В: McCance K, Huether S, редакторы. Патофизиология: биологические основы болезней у взрослых и детей, 7 издание . Амстердам: Elsevier Health Sciences, 2013: 946.
- Андерсон Н., Андерсон Н. Протеом плазмы человека: история, характер и диагностические перспективы. Молекулярная и клеточная протеомика 2002; 1 (11): 845–867.
- Ассоциация клинической биохимии и лабораторной медицины. Монографии по аналиту вместе с Национальным каталогом лабораторной медицины (AMALC): альбумин. Доступно по адресу: www.acb.org.uk/docs/default-source/committees/scientific/amalc/albumin.pdf
- Chambers D, Huang C, Matthews G. Кровь и иммунная система: составляющие плазмы. В: Chambers D, Huang C, Matthews G. Основы физиологии для анестезиологов. Кембридж: Издательство Кембриджского университета, 2015: 366.
- Национальная медицинская библиотека США, Medline Plus. Медицинская энциклопедия: Электрофорез глобулинов сыворотки. Доступно по адресу: medlineplus.gov/ency/article/003544.htm (по состоянию на 10 июля 2018 г.).
- Biochem Den. Белки плазмы: типы и функции (основные примечания) . Доступно на: www.biochemden.com/plasma-proteins/ (по состоянию на 10 июля 2018 г.).
- Трипати Ю. Белки крови и плазмы. In: Tripathi Y. Краткий учебник физиологии для студентов-стоматологов. Ченнаи: Elsevier India, 2011: 93.
- Хардинг М. Глобулины. Веб-сайт для пациентов, 2014 г. Доступно по адресу: Patient.info/doctor/globulins (по состоянию на 10 июля 2018 г.).
- Лабораторные тесты онлайн, Великобритания. Функциональные пробы печени. Доступно по адресу: www.labtestsonline.org.uk/tests/liver-function-tests (по состоянию на 10 июля 2018 г.).
- Shiefa S, Amargandhi M, Bhupendra J et al. Скрининг материнской сыворотки в первом триместре с использованием биохимических маркеров PAPP-A и свободного бета-ХГЧ для синдрома Дауна, синдрома Патау и синдрома Эдварда. Indian J Clin Biochem 2013; 28 (1): 3–12.
- Лабораторные тесты онлайн, Великобритания. Отношение белка в моче и белка в моче к креатинину . Доступно по адресу: www.labtestsonline.org.uk/tests/urine-protein-and-urine-protein-creatinine-ratio (по состоянию на 10 июля 2018 г.).
- BMJ Best Practice. Оценка протеинурии . Доступно по адресу: bestpractice.bmj.com/topics/en-gb/875 (по состоянию на 10 июля 2018 г.).
- Халл Р., Голдсмит Д. Нефротический синдром у взрослых. BMJ 2008 г .; 336 (7654): 1185–1189.
- Лабораторные тесты онлайн, Великобритания. C-реактивный белок (CRP). Доступно по адресу: labtestsonline.org.uk/tests/c-reactive-protein (по состоянию на 10 июля 2018 г.).
- Tidy C. Белки острой фазы, СРБ, СОЭ и вязкость . Веб-сайт для пациентов, 2014 г. Доступно по адресу: Patient.info/doctor/acute-phase-proteins-crp-esr-and-visacity
- О’Коннелл Т., Хорита Т., Касрави Б. Понимание и интерпретация электрофореза белков сыворотки. Am Fam Physician 2005; 71 (1): 105–112.
- Лабораторные тесты онлайн, Великобритания. Лабораторные методы. О лабораторных методах: иммуноферментный анализ (ИФА). Доступно по адресу: labtestsonline.org.uk/articles/laboratory-test-methods (по состоянию на 1 августа 2018 г.).
Специальный выпуск: платформа V4 для анализа потока и капиллярного электрофореза
Уважаемые коллеги,
Симпозиум V4 «Анализ потока и капиллярный электрофорез» (FACE 2020) будет организован на химическом факультете Ягеллонского университета в Кракове, Польша, с 28 июня по 1 июля 2021 года и проведен онлайн.
Целью FACE 2020, софинансируемой Международным Вышеградским фондом, является создание и укрепление тематической платформы для сотрудничества и интеграции университетов из Вышеградской группы (V4) и других европейских и зарубежных стран, которые проводят исследования и преподают в области аналитики. химия, особенно в области анализа потока и капиллярного электрофореза.Нашими институциональными партнерами по проекту являются: Фармацевтический факультет в Градец Кралове Карлова университета, Институт аналитической химии Чешской академии наук в Брно, Факультет науки и технологий Дебреценского университета, Исследовательский институт биомолекулярной и химической инженерии университета. Паннонии в Веспреме, факультет естественных наук Университета Коменского в Братиславе, факультет естественных наук Университета Павола Йозефа Сафарика в Кошице и факультет химии Варшавского университета.
Ведущие аналитики из других центров также объявили о своем участии в нашем симпозиуме, в том числе исследователи из Испании, Португалии, Таиланда и Бразилии. В дополнение к устным и стендовым презентациям в рамках симпозиума мы планируем организовать очень интересные семинары, охватывающие аспекты анализа потока, капиллярного электрофореза и зеленой аналитической химии. Наше приглашение приняли многие выдающиеся ораторы, в том числе Богуслав Бушевский, Виктор Серда, Вольфганг Френцель, Богуслав Гаш, Петер К.Хаузер, Михкель Кальюранд, Клаудимир Лусиу ду Лаго, Дуангджай Накаприча, Эдита Налевайко-Сиеливонюк, Эва Побои, Антониу О. С. С. Рангель, Марсела Сегундо, Франтишек Свец и Элиас Загатто. Для получения дополнительной информации посетите веб-страницу симпозиума: https://v4face.project.uj.edu.pl/.
Сердечно приглашаем участников конференции предоставить оригинальные исследовательские работы или обзоры для этого специального выпуска Molecules .
Д-р Михал Вознякевич
Д-р Петр Хохолоус
Приглашенные редакторы
Этот проект софинансируется правительствами Чехии, Венгрии, Польши и Словакии через Вышеградские гранты Международного Вышеградского фонда (http: // www.visegradfund.org/). Миссия фонда — продвигать идеи устойчивого регионального сотрудничества в Центральной Европе.
Информация для подачи рукописей
Рукописи должны быть представлены онлайн по адресу www.mdpi.com, зарегистрировавшись и войдя на этот сайт. После регистрации щелкните здесь, чтобы перейти к форме отправки. Рукописи можно подавать до установленного срока. Все статьи будут рецензироваться. Принятые статьи будут постоянно публиковаться в журнале (как только они будут приняты) и будут перечислены вместе на веб-сайте специального выпуска.Приглашаются исследовательские статьи, обзорные статьи, а также короткие сообщения. Для запланированных статей название и краткое резюме (около 100 слов) можно отправить в редакцию для объявления на этом сайте.
Представленные рукописи не должны были публиковаться ранее или рассматриваться для публикации в другом месте (за исключением трудов конференции). Все рукописи тщательно рецензируются в рамках процесса одинарного слепого рецензирования. Руководство для авторов и другая важная информация для подачи рукописей доступна на странице Инструкции для авторов. Molecules — это международный рецензируемый журнал с открытым доступом, выходящий раз в полгода, издающийся MDPI.
Пожалуйста, посетите страницу Инструкции для авторов перед отправкой рукописи. Плата за обработку статьи (APC) для публикации в этом журнале с открытым доступом составляет 2000 швейцарских франков. Представленные статьи должны быть хорошо отформатированы и написаны на хорошем английском языке.