Эндоназальный электрофорез в консервативной реабилитации больных с септальной перфорацией
Одним из сложных вопросов, с которым приходится сталкиваться оториноларингологу в своей практике, является лечение перфорации перегородки носа (ППН) [1]. На первый взгляд, в данной нозологической форме есть все необходимые «атрибуты». Разработанные классификации разделяют ППН по причине их возникновения, размеру и по локализации патологического процесса [2—4]. Предлагаемая лечебная тактика имеет стандартный выбор между хирургическими и консервативными методиками. Однако следует признать, что на сегодняшний день мы имеем колоссальный разрыв между теоретическим базисом и практикой в решении вопроса помощи больным, страдающими ППН. На наш взгляд, это связано с тем, что разработанные классификации имели лишь хирургическую направленность. Исключение составляет деление ППН по этиологическому признаку, призванное выявить ряд тяжелых заболеваний, ранним проявлением которых является спонтанный септальный дефект. Размытость формулировки термина «отделы перегородки носа», большая вариабельность места формирования и формы септального дефекта привели к тому, что попытка классифицирования септальных перфораций (СП) по размеру и локализации в практическом применении имеет лишь описательную ценность, не представляя, как путь выбора способа пластического закрытия септального дефекта. Узкая направленность в классифицировании ППН привела к разрыву преемственности в консервативном и хирургическом способах лечения данного заболевания. Следует признать, что искусственное выведение за рамки общего лечебного процесса консервативных способов воздействия на ткани, окружающие СП, привело к минимализму в выборе терапевтических методик, который сводится к увлажнению слизистой оболочки полости носа и мазевым аппликациям. Симптоматическая направленность, ограничения во времени действия лекарственных препаратов и продолжающееся воздействие турбулентных потоков воздуха на слизистую оболочку — это основные недостатки традиционных методов консервативного лечения ППН, которые определяют значительные трудности в достижении стойкой медикаментозной ремиссии заболевания. Одним из методов паллиативной помощи больным с СП призваны были служить септальные обтураторы, которые восполняли дефект перегородки носа. Но эта методика не нашла широкого применения, так как длительное ношение протеза приводило к увеличению размеров септального дефекта [4, 5].
Целью работы явилось повышение эффективности консервативного лечения ППН посредством разработки методики, включающей септальное шинирование с возможностью длительного направленного лекарственного воздействия на поврежденные ткани перегородки носа с учетом специфики полученных морфологических данных.
Для достижения поставленной цели нами определен круг следующих задач:
На основании наличия жалоб больных, связанных с наличием септального дефекта, характера течения заболевания, эндоскопической и морфологической картины, разработать клиническую классификацию ППН.
На основании исследования клинико-морфологического состояния ППН перфорации перегородки носа разработать оригинальную методику консервативного ведения больных с СП, включающую в себя длительное экранирование тканей перегородки носа в области дефекта с возможностью проведения лечебных манипуляций и динамического эндоскопического контроля.
Провести комплексный сравнительный анализ эффективности применения оригинальной методики консервативного лечения больных с ППН перфорацией перегородки носа и традиционной симптоматической терапии.
На основании выявленных клинических особенностей СП разработать клинический алгоритм при этом виде патологии.
Нашу работу мы условно разделили на 3 этапа. Изучение типовых особенностей септальных дефектов мы проводили с 2006 по 2012 г. у 67 пациентов с ППН перфорацией перегородки носа, обратившихся за консультативной помощью в ГБУЗ МНПЦ оториноларингологии им. Л.И. Свержевского ДЗ Москвы. Женщин было 41, мужчин — 26. Возраст от 16 до 57 лет. Критериями исключения служили наличие аутоиммунных и неопластических заболеваний. Во всех случаях выявляли жалобы, присущие ППН, собирали подробный анамнез жизни и заболевания, проводили осмотр ЛОР-органов, эндоскопию полости носа и гистологическое исследование биопсийного материала, взятого нами из трех локусов тканей перегородки носа, окружающих септальный дефект. При эндоскопическом осмотре полости носа измеряли размеры СП и описывали визуальную картину тканей перегородки носа. Все больные консультированы иммунологом и ревматологом. Базовое лечение включало орошение полости носа физиологическим раствором, дополняемое внутриносовой инстилляцией раствора антисептика (мирамистин) и мазевой аппликацией (синтомициновая эмульсия 1%, метилурациловая мазь 10%). В период ремиссии заболевания всем больным рекомендовали увлажнять слизистую оболочку полости носа физиологическим раствором. О достижении клинической ремиссии заболевания свидетельствовал регресс жалоб пациента, воспалительных проявлений тканей, окружающих СП, и размер дефекта перегородки носа. С целью проведения статистического анализа для каждого исследуемого показателя мы разработали визуально-аналоговую шкалу (ВАШ). Для объективной оценки эффективности применяемого метода лечения в заживлении раневых поверхностей мы проводили цитологическое исследование мазков-отпечатков. Длительный срок наблюдения за больными (от 1 года до 3 лет) позволил нам также оценить продолжительность ремиссии и срок проводимого лечения.
Нами было выявлено, что 53 (79,1%) пациента высказывали жалобы, которые были связаны с септальным дефектом: затрудненное носовое дыхание с образованием корок в полости носа, периодические носовые кровотечения, озвученное носовое дыхание. В 14 (20,9%) случаях жалоб не было или они не имели четкой связи с заболеванием. У этих больных ППН была как «случайная находка» при осмотре оториноларингологом. По данным анамнеза мы установили, что у 36 (53,7%) больных причиной перфорации было хирургическое вмешательство на перегородке носа, у 2 (3%) пациентов — работа на вредном производстве, у 29 (43,3%) больных явную причину заболевания нам установить не удалось.
На основании клинико-эндоскопической картины и результатов гистологического исследования состояния тканей, окружающих перфорацию, нами было определено 4 формы СП: интактная (невоспаленная), субатрофичная, эрозивно-язвенная и смешанная. Смешанная форма ППН нами была отмечена у 42 (62,7%) больных, субатрофичная — у 9 (13,4%), эрозивно-язвенная — у 12 (17,9%), интактная — у 4 (6%) пациентов. Невоспаленные окружающие ткани имели перфорации, которые локализовались в задних отделах перегородки носа. Особенностью эрозивно-язвенного повреждения тканей перегородки носа заключалось в том, что при гистологическом изучении 54 биоптатных препаратов в 100% случаев гистологическая картина соответствовала активному тканевому воспалению с явлениями поверхностного некроза (частично разрушенные эпителиальные клетки, кровенаполненность сосудов, выраженная макрофагальная инфильтрация с дегенеративным повреждением костной и хрящевой ткани). При гистологическом изучении тканей, взятых из субатрофичных локусов септального дефекта, в 37 (72,5%) случаях тканевое воспаление носило умеренный характер, фиброзная дегенерация отмечена в 51 (100%) исследовании.
В результате длительного динамического наблюдения нами было выявлено, что у 24 (35,8%) больных ППН увеличилась в размере. У 3 (21,4%) пациентов ранее бессимптомное течение заболевания начало проявляться патогномоничной симптоматикой.
На основании комплексного исследования нами определены следующие клинические формы ППН, характеризующие течение заболевания, его проявления и морфологические особенности (см. таблицу).
На втором этапе нами разработана методика консервативного лечения ППН, в основе которой лежит стентирование перегородки носа оригинальными семиугольными сплинтами, изготовленные ЗАО МедСил (Мытищи). Отличительные признаки примененной нами методики шинирования заключались в том, что септальные стенты были изготовлены из композиций медицинского силикона на основе жидких каучуков марок LR 3003/20-60 «Wacer» (Германия), при этом один из стентов мы оборудовали щелевым манипуляционным каналом. Это позволило нам «разорвать порочный круг» влияния турбулентных потоков воздуха на ткани перегородки носа, окружающие септальный дефект. Щелевой манипуляционный канал, расположенный на уровне передних отделов ППН, позволяет осуществлять динамический эндоскопический контроль за состоянием поврежденных тканей и проводить лечебные процедуры (в том числе и физиотерапевтические). Септальные стенты мы фиксировали в полости носа по методике А.И. Крюкова и соавт. [6], при которой достигается полная иммобилизация перегородки носа. Данная конструкция позволила нам создать в области СП отграниченное (условно-закрытое) пространство, позволяющее лекарственному препарату длительно находиться в области дефекта и прицельно воздействовать на поврежденные ткани перегородки носа. Нами также разработан специальный активный электрод для проведения эндоназального электрофореза в зоне перфорации. Размеры рабочего элемента электрода соответствуют размерам манипуляционного канала септальной шины.
В тех случаях, когда края дефекта имели эрозии и изъязвления слизистой оболочки мы вводили препараты, обладающие антисептическим действием (раствор мирамистина и 1% синтомициновая эмульсия), и лекарственные вещества, стимулирующие регенерацию эпителия (метилурациловая мазь 10%). После заживления слизистой оболочки в области краев ППН мы проводили процедуру эндоназального электрофореза. Ватную турунду, пропитанную 2% раствором хлорида кальция, вводили через щелевой манипуляционный канал в отграниченное сплинтами пространство перфорации и устанавливали активный электрод, подключенный к аппарату Поток-1. Физиотерапевтическое лечение включало 5 процедур. При этом сила постоянного тока и время экспозиции мы подбирали индивидуально.
Оригинальную методику консервативного лечения ППН применили у 26 больных (третий этап), находившихся под нашим динамическим наблюдением и получавших традиционное лечение заболевания. Женщин было 17, мужчин — 9. Возраст от 20 до 46 лет. Таким образом, под нашим наблюдением было 52 СП. Во всех случаях характер повреждения тканей перегородки носа носил смешанный характер. Критерием исключения были сопутствующие заболевания у пациента, служившие противопоказанием к проведению физиотерапевтического лечения. В зависимости от вида консервативного лечения больных нами было выделено 2 группы (по 26 единиц исследования в каждой). В 1-й группе мы применили традиционное симптоматическое лечение СП. Во 2-й группе нами использована оригинальная, патоморфологически обоснованная методика лечения ППН, включающая в себя превентивное септальное шинирование и дифференцированное лекарственное воздействие. Срок наблюдения составил от 1 года до 3 лет.
Проводя динамический эндоскопический контроль состояния тканей перегородки носа нами было зарегистрировано, что локальные изъязвления и эрозии слизистой оболочки в области септального дефекта в 1-й группе зажили в 14 (53,8%) случаях, тогда как во 2-й группе восстановление поврежденных тканей достигнуто у всех (100%) пациентов (р<0,05). При этом срок лечения (время достижения клинического эффекта) в 1-й группе составил 18,3±1,49 сут, во 2-й группе — 12,5±0,72 сут (р<0,05). Изучив мазки-отпечатки, взятые нами с края СП, мы констатировали, что цитологические препараты 2-й группы характеризовались наличием большого количества рыхлых клеточных структур цилиндрического эпителия с укрупненными гиперхромными ядрами и светлым хроматином. При цитологическом исследовании мазков-отпечатков 1-й группы больных во всех препаратах выявлено большое число лейкоцитов (из них до 45% разрушенные), при этом подавляющее число (84—97%) нейтрофилов. В 100% исследований клетки цилиндрического эпителия встречались разрозненно с признаками дегенеративных изменений. В 7 (27%) препаратах нами зафиксированы чешуйки плоского эпителия.
Оценив динамику жалоб у пациентов 1-й группы, нами было зафиксировано, что 2 (7,7%) пациента перестали отмечать проявления ППН (0 баллов по ВАШ). В остальных случаях проявления СП, беспокоящие больных, уменьшились на 39,3% и составили 1,82±0,07 балла по ВАШ (р<0,05). Во 2-й группе у 5 (19,2%) больных результатом консервативного лечения было отсутствие жалоб, связанных с ППН. В остальных случаях проявления СП, беспокоящие больных, уменьшились на 68,7% и составили 0,94±0,11 балла по ВАШ (р<0,05). Длительный срок наблюдения за больными позволил нам оценить продолжительность периода ремиссии заболевания, который в 1-й группе составил 36,1±9,13 сут. У 2 пациентов 2-й группы мы добились стойкой ремиссии, у остальных длительность ремиссии составила 142,5±12,81 дня.
Проведенный сравнительный анализ полученных нами результатов показал, что оригинальный способ ведения больных с ППН, базирующийся на превентивном шинировании перегородки носа семиугольными сплинтами, один из которых оборудован щелевым манипуляционным каналом, является эффективной методикой консервативного лечения СП. Целенаправленное воздействие лекарственных веществ в условиях исключения влияния турбулентных потоков воздуха приводит к полной регенерации поврежденных тканей в области септального дефекта, что в свою очередь удлиняет продолжительность ремиссии заболевания в 4 раза.
На основании полученных результатов мы разработали алгоритм ведения пациентов, страдающих ППН, который несет в себе следующие ключевые положения: пациенты с бессимптомными СП, характеризующиеся стабильным течением, не требуют лечения и должны находиться под динамическим наблюдением оториноларинголога; ППН, проявляющие себя клинически и имеющие тенденцию к увеличению размеров, требуют комплексного консервативного лечения с превентивным шинированием перегородки носа и проведением физиотерапии; показанием к пластическому закрытию объемных септальных дефектов является неэффективность консервативного лечения ППН; полное или частичное закрытие СП должно проводиться «спокойными» тканями.
Таким образом, предложенная нами оригинальная методика консервативного лечения септальных дефектов и разработанная нами классификация и алгоритм ведения больных, страдающий ППН, могут быть рекомендованы для практического применения в ЛОР-стационарах и амбулаторной оториноларингологической сети.
Электрофорез с «Кортексином»
Ноотропное действие кортексина заключается в стимулировании работы головного мозга, в результате чего улучшается память, стрессоустойчивость, развивается способность концентрироваться.
В последние годы получен новый импульс к разработке и расширению возможностей лекарственного электрофореза и введения препаратов, в частности кортексина, минуя гематоэнцефалический барьер, что позволяет в разы снизить фармакологическую нагрузку на пациента!
Принцип действия электрофореза с «Кортексином»
Под действием электрического тока при эндоназальном введении, «Кортексин» проникает через слизистую оболочку носа, передвигаясь периневрально и по лимфатическим путям, поступает в ликвор субархноидиального пространства. Таким образом обеспечивается выраженное и продолжительное нейрофизилогическое действие за счет создания в структурах головного мозга своеобразного депо препарата.
Ноотропное действие кортексина заключается в стимулировании работы головного мозга, в результате чего улучшается память, стрессоустойчивость, развивается способность концентрироваться. Препарат «Кортексин» обладает также нейропротекторным действием, что означает способность защищать нейроны (особо чувствительные клетки нервной ткани, передающие импульс друг другу) от разрушения. Есть в числе его лекарственных способностей антиоксидантное, тканеспецифическое (ускорять и восстанавливать метаболизм) свойство.
Доказанная эффективность действия электрофореза с «Кортексином»
Доказано, что высокий терапевтический эффект введения кортексина минуя ГЭБ, базируется на устранении вегетативной, когнитивной дисфункции, последствий инсультов, менингитов и энцефалитов, вегетососудистой дистонии, синдрома хронической усталости, и др.. Особенно эффективен метод при ослабление памяти, рассеянности внимания, невозможности сконцентрироваться, страхе, беспокойстве, дискоординации эмоционального поведения, при неспособности к обучению.
Данный метод введения протестирован, научно обоснован и утвержден к практическому применению ГОУ ВПО Московской медицинской академией имени И.М.Сеченова Росздрава.
Оценка лечебного эффекта эндоназального электрофореза с метилэтилпиридинолом при частичной атрофии зрительного нерва | Разумовская
1. Никифоров А.С. Нейроофтальмология. Москва: 2008:228. [Nikiforov A.S. Nejrooftal’mologija. Moscow: 2008:228. (In Russ.)]
2. Тахчиди Х.П., Иойлева Е.Э., Дугинов А.Г., Зеленцов С.Н. Клинико-функциональные результаты комбинировнного метода лечения атрофии зрительного нерва. Офтальмохирургия. 2009;3:25–30. [Tahchidi H.P., Ioyleva E.E., Duginov A.G., Zelentsov S.N. Clinical and functional results of the combined method of treating optic atrophy. Ophthalmosurgery=Oftal’mokhirurgiya. 2009;3:25–30. (In Russ.)]
3. Либман Е. С., Шахова Е. В. Слепота и инвалидность вследствие патологии органа зрения в России. Вестник офтальмологии. 2006;1:35–37. [Libman E. S., Shahova E. V. Blindness and disability due to pathology of the organ of vision in Russia. Annals of Ophthalmology =Vestnik oftal’mologiiю 2006;1:35–37. (In Russ.)]
4. Athappilly G., Pelak V.S., Mandava N., Bennett J.L. Ischemic optic neuropathy. Neurol. Res. 2008; 30(8):794–800. DOI: 10.1179/174313208X319107
5. Boor K., Kovács K., Rózsa A., Pánczél G., Szilvássy I., Gács G. Posterior ischemic optic neuropathy. Ideggyogy Sz. 2009;62(5–6):191–4.
6. Hayreh S.S. Pathogenesis of nonarteritic anterior ischemic optic neuropathy. Arch. Ophthalmol. 2009;127(8):1082–4.
7. Unsold R. Anterior ischemic optic neuropathy: Etiology, pathogenetic mechanisms and therapy. Ophthalmologe. 2008;105(9):867–82. DOI: 10.1007/s00347-008-1814-z
8. Мезенцева В.С. Современные подходы к лечению частичной атрофии зрительного нерва физическими факторами (обзор литературы). Точка зрения. Восток — Запад. Российская офтальмология онлайн. 2016;2(101–103). [Mezenceva V.S. Modern approaches to the treatment of partial atrophy of the optic nerve by physical factors (literature review). Point of view. East—West. Russian ophthalmology online=Tochka zrenija. Vostok — Zapad. 2016;2(101–103). (In Russ.)] DOI: 10.25276/2410-1257
9. Каменских Т.Г., Егоров Е.А., Серянов Ю. В. Исследование транспорта лекарственных препаратов, используемых в лечении частичной атрофии зрительного нерва, под влиянием физиовоздействий. Российский медицинский журнал. Клиническая офтальмология. 2007;8(2):45–47. [Kamenskikh T.G., Egorov E.A., Seryanov Yu. V. A study of the transport of drugs used in the treatment of partial optic nerve atrophy, under the influence of physical activity. Russian Medical Journal. Clinical ophthalmology=Rossiyskiy meditsinskiy zhurnal. Klinicheskaya oftal’mologiya. 2007;8(2):45–47. (In Russ.)]
10. Непомнящих В.А. Клеточные биорегуляторы в комплексной терапии глазных болезней. Монография руководство. Москва: РегБиоМед, 2010:67, 87–89. [Nepomnjashhih V.A. Cellular bioregulators in the complex therapy of eye diseases. Moscow: RegBioMed, 2010:67, 87–89. (in Russ.)]
11. Гаваа Лувсан. Традиционные и современные аспекты восточной рефлексотерапии. 3е изд. Москва: Наука, 1992. [Gavaa Luvsan. Traditional and modern aspects of oriental reflexology. 3rd ed. Moscow: Science. (In Russ.)]
12. Иглоукалывание; под общей редакцией Хоанг Бао Тяу, Ла Куанг Ниеп. Москва: Медицина, 1989. [Acupuncture; under the general editorship of Hoang Bao Tiau, La Quang Niep. Moscow: Medicine, 1989. (In Russ.)]
13. Seiff S.R. High dose corticosteroids for treatment of visial loss due to the indirect injury to the optic nerve. Ophthalmic surgery lasers. 1990; 21:389–95.
14. Atkins E.J., Bruce B.B., Newman N.J., Biousse V. Translation of clinical studies to clinical practice: survey on the treatment of nonarteritic anterior ischemic optic neuropathy. Am. J. Ophthalmol. 2009;148(5):809. DOI: 10.1016/j.ajo.2009.07.003
15. Jung C.S. Visual function in anterior ischemic optic neuropathy: effect of Vision Restoration Therapy a pilot study. Neurol. Sci. 2008;268(1–2):145–9. DOI: 10.1016/j.jns.2007.12.001
16. Дугинов А.Г., Иойлева Е.Э., Шацких А.В., Зеленцов С.Н., Диденко Т.В. Экспериментально клиническое обоснование комбинированного метода лечения частичной атрофии зрительного нерва. Офтальмохирургия. 2008;(5):24–28. [Duginov A.G., Iojleva E.Je., SHackih A.V., Zelncov S.N., Didenko T.V. Experimental clinical substantiation of the combined method of treatment of partial atrophy of the optic nerve. Ophthalmosurgery=Oftal’mokhirurgiya. 2008;(5):24–28. (In Russ.)]
17. Долгова И.Г., Малишевская Т.Н., Лазарева А.С., Антипина Н.А., Малишевская О.И., Комольцева Е.А. Опыт применения препарата Танакан методом эндоназального электрофореза в лечении больных первичной открытоугольной глаукомой. Эффективная фармакотерапия. Офтальмология. 2014;1(30). [Dolgova I.G., Malishevskaja T.N., Lazareva A.S., Antipina N.A., Malishevskaja O.I., Komol’ceva E.A. The experience of using Tanakan by the method of endonasal electrophoresis in the treatment of patients with primary open-angle glaucoma. Effective pharmacotherapy. Ophthalmology=Effektivnaya farmakoterapiya. Oftal’mologiya. 2014;1(30). (In Russ.)]
18. Морозова Н.В., Новиков Д.П., Соколов В.О., Флоренцева С.С. Эффективность лечения ВМД сухой формы методом эндоназального электрофореза препаратом Ретиналамин. Офтальмологические ведомости. 2009;2(3):40–45. [Morozova N.V., Novikov D.P., Sokolov V.O., Florenceva S.S. The effectiveness of treatment of AMD dry form by the method of endonasal electrophoresis with Retinalamin. Ophthalmology journal=Oftal’mologicheskie vedomosti. 2009;2(3):40– 45. (In Russ.)]
19. Рахимкулов А.С., Борисова Н.А., Качемаев В.П. Результаты лечения начальных форм сосудистых заболеваний головного мозга с использованием йодобромных ванн и церулоплазмина. Медицинский Вестник Башкортостана. 2014;9(3):88–91. [Rakhimkulov A.S., Borisova N.A., Kachemaev V.P. Results of treatment of initial forms of cerebrovascular diseases using iodide-bromine baths and ceruloplasmin. Bashkortostan Medical Journal=Meditsinskii Vestnik Bashkortostana. 2014;9(3):88–91. (In Russ.)]
20. Разумовский М.И., Колюка О.Е., Разумовская А.М. Оценка трудовых возможностей инвалидов по зрению комплексным электрофизиологическим и офтальмоэргономическим методом. Офтальмология. 2014;11(1):52–56. [Razumovskij M.I., Koljuka O.E., Razumovskaja A.M. Assessment of the work ability of the visually impaired by a complex electrophysiological and ophthalmoergonomic method. Оphthalmology in Russia=Oftal’mologiya. 2014;11(1):52–56. (In Russ.)] DOI: http://dx.doi.org/10.18008/1816-5095-2014-1-58-61
21. Разумовский М.И., Разумовская А.М. Оценка зрительных возможностей в трудовом процессе инвалидов по зрению. Офтальмология. 2014;11(1):58–61. [Razumovskij M.I., Razumovskaja A.M. Assessment of visual opportunities in the work process of the visually impaired. Оphthalmology in Russia=Oftal’mologiya 2014;11(1): 58–61. (In Russ.)] http://dx.doi.org/10.18008/1816-5095-2014-1-58-61
22. Пономаренко Г.Н. Инновационные технологии физиотерапии. Вопросы курортологии, физиотерапии и лечебной физической культуры. 2009;4:3- 8. [Ponomarenko G.N., Innovative technologies of physiotherapy. Problems of Balneology, Physiotherapy, and Exercise Therapy=Voprosy kurortologii, fizioterapii i lechebnoi fizicheskoi kul’tury. 2009;4:3–8. (In Russ.)]
МЦ Гайде на Херсонской
ул. Херсонская, д. 2/9 |
ул. Херсонская, д. 2/9 | ||||
|
|||||
ДМЦ Гайде на Лиговском проспекте
Лиговский пр-т, д. 108А |
Лиговский пр-т, д. 108А | ||||
|
|||||
Адмиралтейские Верфи на Садовой
ул. Садовая, д. 126 |
ул. Садовая, д. 126 | ||||
|
|||||
МедЭксперт на Большом Смоленском проспекте
Большой Смоленский пр-т, д. 6 лит. А |
Большой Смоленский пр-т, д. 6 лит. А | ||||
|
|||||
Панорама Мед в Красном Селе
Красное Село, Кингисеппское ш., д. 47 |
Красное Село, Кингисеппское ш., д. 47 | ||||
|
|||||
Клиника имени Петра Великого
Пискаревский пр-т, д. 47 |
Пискаревский пр-т, д. 47 | ||||
|
|||||
Rossimed на Российском проспекте
Российский пр-т, д. 8 |
Российский пр-т, д. 8 | ||||
|
|||||
Клиника Звездная на Московском шоссе
Московское шоссе, д. 5А |
Московское шоссе, д. 5А | ||||
|
|||||
Лека-Фарм в Сестрорецке
Сестрорецк, Приморское шоссе, д. 271 |
Сестрорецк, Приморское шоссе, д. 271 | ||||
|
|||||
Лека-Фарм на Тамбасова
ул. Тамбасова, д. 4 |
ул. Тамбасова, д. 4 | ||||
|
|||||
Лека-Фарм на Савушкина
ул. Савушкина, д. 128, корп. 1 |
ул. Савушкина, д. 128, корп. 1 | ||||
|
|||||
Лека-Фарм на Приморском шоссе
Приморское шоссе, д. 271 |
Приморское шоссе, д. 271 | ||||
|
|||||
Аркадия на проспекте Стачек
пр-т Стачек, д. 146 |
пр-т Стачек, д. 146 | ||||
|
|||||
МЦ Инфант в поселке Морозова
п. им. Морозова (Ленинградская область), ул. Мира, д. 3 |
п. им. Морозова (Ленинградская область), ул. Мира, д. 3 | ||||
|
|||||
МЦ Инфант во Всеволожске
г. Всеволожск (Ленинградская область), Октябрьский пр-т, д. 122 |
г. Всеволожск (Ленинградская область), Октябрьский пр-т, д. 122 | ||||
|
|||||
МЦ Ева в Гатчине на Изотова
г. Гатчина (Ленинградская область), ул. Изотова, д. 12 |
г. Гатчина (Ленинградская область), ул. Изотова, д. 12 | ||||
|
|||||
МЦ Ева в Гатчине на Рощинской
г. Гатчина, ул. Рощинская, д. 1А |
г. Гатчина, ул. Рощинская, д. 1А | ||||
|
|||||
СПГМУ им. И.П. Павлова на Льва Толстого
ул. Льва Толстого, д. 6-8 |
ул. Льва Толстого, д. 6-8 | ||||
|
|||||
КДЦ им. Г.И. Турнера на Лахтинской
ул. Лахтинская, д. 12, лит. А |
ул. Лахтинская, д. 12, лит. А | ||||
|
|||||
Александровская больница на проспекте Солидарности
пр-т Солидарности, д. 4 |
пр-т Солидарности, д. 4 | ||||
|
|||||
Клиническая больница Святителя Луки
ул. Чугунная, д. 46 |
ул. Чугунная, д. 46 | ||||
|
|||||
МСЧ МВД России на проспекте Культуры
пр-т Культуры, д. 2 |
пр-т Культуры, д. 2 | ||||
|
|||||
Клиника им. Э.Э.Эйхвальда
ул. Кирочная, д. 41 |
ул. Кирочная, д. 41 | ||||
|
|||||
СПб НИИ ЛОР на Бронницкой
ул. Бронницкая, д. 9 |
ул. Бронницкая, д. 9 | ||||
|
|||||
Роддом №16 Санкт-Петербурга на Малой Балканской
ул. Малая Балканская, д. 54 |
ул. Малая Балканская, д. 54 | ||||
|
|||||
МСЧ №38 в Сосновом Бору
г. Сосновый Бор (Ленинградская область), Больничный городок, д. 3/13 |
г. Сосновый Бор (Ленинградская область), Больничный городок, д. 3/13 | ||||
|
|||||
Эндоназальный электрофорез/гальванизация — Медицинский центр «Парацельс»
Выбрана услуга:
Выбор услуги специлиста Нажмите для выбора услугиВыбрать дату и адрес
Назад
Повторной считается консультация одного специалиста в течение 30 дней с даты предыдущего приёма. На 31-й день от предыдущего посещения специалиста данного профиля конультация будет первичной.
Физиотерапия | Bor Medical Center
Физиотерапия — область клинической медицины, изучающая действие на организм природных и искусственных физических факторов, применяемых для восстановительного лечения больных, профилактики заболеваний и оздоровления. Физиотерапия — один из основных методов лечения различных заболеваний главным образом потому, что он практически безопасен и очень эффективен.
Задача физиотерапии — это достижение наибольшего терапевтического эффекта при наименьшей нагрузке на организм путём усиления специфического и ослабления неспецифических компонентов действия физических факторов.
Физические факторы воздействовали на человека на протяжении всей его эволюции; поэтому физиотерапевтические процедуры оказывают на организм более физиологическое влияние, чем многие лекарственные средства.
В «BOR MEDICAL CENTER» представлен широкий спектр физиотерапевтических процедур и методик. Физиотерапия, рефлексотерапия, массаж, мануальная терапия, ЛФК.
Физиотерапевтические процедуры:
- Электролечение аппаратом Ультратон-АМП-2ИНТ
- Электрофорез
- Магнитотерапия
- Процедуры на аппарате «Амблиокор»
- Ингаляции
Специалисты направления
Врач-физиотерапевт
Цены на услуги физиотерапии
Наименование услуги | Цена, руб |
---|---|
Осмотр (консультация) врача-физиотерапевта первичный | 1300,00 |
Осмотр (консультация) врача-физиотерапевта повторный | 1000,00 |
Осмотр (консультация) врача-физиотерапевта (по назначению врачей БМЦ) |
500,00 |
Токи | Цена, руб |
---|---|
Воздействие токами надтональной частоты (ультратонотерапия) при заболеваниях периферической нервной системы\при костной патологии\при заболеваниях кожи и подкожно-жировой клетчатки | 400,00 |
Электростимуляция | Цена, руб |
---|---|
Электростимуляция\Электростимуляция мышц\Электростимуляция двигательных нервов\Чрескожная короткоимпульсная электростимуляция (ЧЭНС) |
400,00 |
Ингаляции | Цена, руб |
---|---|
Аэрозольтерапия при заболеваниях нижних дыхательных путей | 300,00 |
Аэрозольтерапия( ингаляции) | 300,00 |
Магнитотерапия | Цена, руб |
---|---|
Воздействие магнитными полями при заболеваниях периферической нервной системы/при гинекологических заболеваниях/при костной патологии |
400,00 |
Магнитофорез | 450,00 |
Ионофорез | Цена, руб |
---|---|
Ионофорез кожи/Ионофорез зубов и полости рта/Ультрафонофорез лекарственный |
400,00 |
Дорсанвализация | Цена, руб |
---|---|
Дарсонвализация органа слуха / Дарсонвализация кожи | 400,00 |
Электрофорез | Цена, руб |
---|---|
Электрофорез лекарственных препаратов при патологии полости рта и зубов (1 процедура) | 400,00 |
Электрофорез лекарственных препаратов эндоназальный |
450,00 |
Электрофорез лекарственных препаратов при заболеваниях органа зрения |
400,00 |
Внутриушной электрофорез лекарственных препаратов при заболеваниях органа слуха |
400,00 |
Электрофорез лекарственных препаратов при заболеваниях верхних дыхательных путей |
400,00 |
Электрофорез лекарственных препаратов при заболеваниях суставов (1 процедура) | 400,00 |
Ультрафонофорез лекарственный | 400,00 |
Электрофорез эндоназальный с никотиновой кислотой |
400,00 |
Электрофорез эндоназальный с эуфиллином |
400,00 |
Плеоптическое лечение | Цена, руб |
---|---|
Электростимуляция зрительного нерва (ЭСОМ) | 500,00 |
Электростимуляция цилиарного тела (Эсом) |
500,00 |
Лазеропуктура (Лазерная стимуляция цилиарной мышцы на аппарате ЛОТ-01) | 400,00 |
Мангнитофорез |
500,00 |
Низкочастотная магнитотерапия при заболеваниях органа зрения( при помощи аппарата Атос) |
500,00 |
Низкочастотная магнитотерапия при заболеваниях органа зрения (при помощи аппарата Атос+ Амблио) | 500,00 |
Упражнения для восстановления и укрепления бинокулярного зрения |
500,00 |
Упраженения для восстановления и укрепления бинокулярного зрения (Занятия на аппарате Синаптофор) |
500,00 |
Упражнения для восстановления и укрепления бинокулярного зрения (Занятия при помощи программы АЙ) |
500,00 |
Упражнения для востановления и укрепления бинокулярного зрения (при помощи макулостимулятора) | 400,00 |
Упражнения для тренировки цилиарной мышцы: Аппаратно- компьютерное. Плеоптическое лечение (1 курс) | 10000,00 |
Упражения для тренировки цилиарной мышцы: Аппаратно- компьютерное. Плеоптическое лечение (2 курс) | 9000,00 |
Упражнения для тренировки цилиарной мышцы: Аппаратно-компьютерное. Плеоптическое лечение (3 курс) | 8000,00 |
Запись онлайн
Вернуться к спискуФизиотерапия в Воронеже по низкой цене
Аэрозольтерапия при заболеваниях верхних дыхательных путей 1 сеанс
390 ₽
ЗаписатьсяВибрационное воздействие 1 поле, 1 сеанс
390 ₽
ЗаписатьсяВнутривлагалищное воздействие ультразвуком при заболеваниях женских половых органов
390 ₽
ЗаписатьсяВнутривлагалищное импульсное электровоздействие при заболеваниях женских половых органов, 1 сеанс
390 ₽
ЗаписатьсяВнутривлагалищное криовоздействие при заболеваниях женских половых органов 1 процедура
590 ₽
ЗаписатьсяВнутривлагалищный ультрафонофорез при заболеваниях женских половых органов
390 ₽
ЗаписатьсяВнутриушной электрофорез лекарственных препаратов при заболеваниях органа слуха 1 поле, 1 сеанс без лекарственного обеспечения
390 ₽
ЗаписатьсяВоздействие высокочастотными электромагнитными полями (индуктотермия) 1 поле, 1 сеанс
390 ₽
ЗаписатьсяВоздействие диадинамическими токами (ДДТ- терапия) при костной патологии 1 поле, 1 сеанс
350 ₽
ЗаписатьсяВоздействие диадинамическими токами (ДДТ- терапия) при костной патологии 2 поля, 1 сеанс
490 ₽
ЗаписатьсяВоздействие длинноволновым излучением (ДУФ) 1 поле, 1 сеанс
390 ₽
ЗаписатьсяВоздействие интерференционными токами 1 поле, 1 сеанс
390 ₽
ЗаписатьсяВоздействие инфракрасным излучением 1 поле, 1 сеанс
390 ₽
ЗаписатьсяВоздействие коротким ультрафиолетовым излучением (КУФ) 1 поле, 1 сеанс
390 ₽
ЗаписатьсяВоздействие лазерным низкоинтенсивным излучением на область зева 1 процедура
390 ₽
ЗаписатьсяВоздействие лазерным низкоинтенсивным излучением эндоназально
390 ₽
ЗаписатьсяВоздействие магнитными полями 1 поле, 1 сеанс
390 ₽
ЗаписатьсяВоздействие магнитными полями при заболеваниях мышц 1 поле, 1 сеанс
390 ₽
ЗаписатьсяВоздействие магнитными полями при заболеваниях периферической нервной системы 1 поле, 1 сеанс
390 ₽
ЗаписатьсяВоздействие магнитными полями при костной патологии 1 поле, 1 сеанс
390 ₽
ЗаписатьсяВоздействие магнитными полями при костной патологии 2 поля, 1 сеанс
490 ₽
ЗаписатьсяВоздействие магнитными полями при нарушениях микроциркуляции 1 поле, 1 сеанс
390 ₽
ЗаписатьсяВоздействие магнитными полями при нарушениях микроциркуляции 2 поля, 1 сеас
490 ₽
ЗаписатьсяВоздействие низкоинтенсивным лазерным излучением вагинально
390 ₽
ЗаписатьсяВоздействие низкоинтенсивным лазерным излучением при заболеваниях верхних дыхательных путей
390 ₽
ЗаписатьсяВоздействие низкоинтенсивным лазерным излучением при заболеваниях желез внутренней секреции 1 поле, 1 сеанс
390 ₽
ЗаписатьсяВоздействие низкоинтенсивным лазерным излучением при заболеваниях крупных кровеносных сосудов, 1 поле, 1 сеанс
390 ₽
ЗаписатьсяВоздействие низкоинтенсивным лазерным излучением при заболеваниях мышц 1 процедура, 1 группа мышц
390 ₽
ЗаписатьсяВоздействие низкоинтенсивным лазерным излучением при заболеваниях мышц 1 процедура, 2 группы мышц
390 ₽
ЗаписатьсяВоздействие низкоинтенсивным лазерным излучением при заболеваниях органов кроветворения и крови 1 сеанс
390 ₽
ЗаписатьсяВоздействие низкоинтенсивным лазерным излучением при заболеваниях периферической нервной системы 1 поле, 1 сеанс
390 ₽
ЗаписатьсяВоздействие низкоинтенсивным лазерным излучением при заболеваниях печени и желчевыводящих путей 1 поле, 1 сеанс
390 ₽
ЗаписатьсяВоздействие низкоинтенсивным лазерным излучением при заболеваниях почек и мочевыделительного тракта 1 поле, 1 сеанс
390 ₽
ЗаписатьсяВоздействие низкоинтенсивным лазерным излучением при заболеваниях сердца и перикарда
390 ₽
ЗаписатьсяВоздействие низкоинтенсивным лазерным излучением при заболеваниях суставов 1 сеанс, 2 сустава
390 ₽
ЗаписатьсяВоздействие переменным магнитным полем (ПеМП) 1 поле, 1 сеанс
390 ₽
ЗаписатьсяВоздействие синусоидальными модулированными токами (СМТ-терапия) при костной патологии 1 поле, 1 сеанс
390 ₽
ЗаписатьсяВоздействие синусоидальными модулированными токами (СМТ-терапия) при костной патологии 2 поля, 1 сеанс
490 ₽
ЗаписатьсяВоздействие синусоидальными модулированными токами (СМТ-терапия) при нарушениях микроциркуляции 1 поле, 1 сеанс
390 ₽
ЗаписатьсяВоздействие синусоидальными модулированными токами (СМТ) 1 поле, 1 сеанс
390 ₽
ЗаписатьсяВоздействие токами надтональной частоты (ультратонотерапия) вагинально или ректально при заболеваниях женских половых органов, 1 сеанс
390 ₽
ЗаписатьсяВоздействие токами надтональной частоты (ультратонотерапия) головы, шеи, воротниковой зоны, 1 поле, 1 сеанс
390 ₽
ЗаписатьсяВоздействие токами надтональной частоты (ультратонотерапия) при заболеваниях периферической нервной системы 1 поле, 1 сеанс
390 ₽
ЗаписатьсяВоздействие токами надтональной частоты (ультратонотерапия) при костной патологии 1 поле, 1 сеанс
390 ₽
ЗаписатьсяВоздействие токами надтональной частоты (ультратонотерапия) при нарушениях микроциркуляции 1 поле, 1 сеанс
390 ₽
ЗаписатьсяВоздействие токами надтональной частоты (ультратонотерапия) ультратонотерапия эндоназальная при заболеваниях верхних дыхательных путей 1 поле, 1 сеанс
390 ₽
ЗаписатьсяВоздействие токами надтональной частоты (ультратонотерапия) эндоурально при заболеваниях органа слуха 1 поле, 1 сеанс
390 ₽
ЗаписатьсяВоздействие токами ультравысокой частоты при заболеваниях верхних дыхательных путей 1 поле, 1 сеанс
390 ₽
ЗаписатьсяВоздействие токами ультравысокой частоты при костной патологии 1 поле, 1 сеанс
390 ₽
ЗаписатьсяВоздействие ультразвуковое при заболеваниях периферической нервной системы 1 поле, 1 сеанс
390 ₽
ЗаписатьсяВоздействие ультразвуком при заболеваниях верхних дыхательных путей 1сеанс
390 ₽
ЗаписатьсяВоздействие ультразвуком при заболеваниях крупных кровеносных сосудов 1 поле, 1 сеанс
390 ₽
ЗаписатьсяВоздействие ультразвуком при заболеваниях суставов 1 сеанс, 1 сустав
390 ₽
ЗаписатьсяВоздействие ультразвуком при заболеваниях суставов 1 сеанс, 2 сустава
490 ₽
ЗаписатьсяВоздействие электрическими полями ультравысокой частоты при заболеваниях органа слуха 1 поле, 1 сеанс
390 ₽
ЗаписатьсяВоздействие электромагнитным излучением сантиметрового диапазона (СМВ-терапия) вагинально или ректально при заболеваниях женских половых органов, 1 сеанс
390 ₽
ЗаписатьсяДарсонвализация местная при заболеваниях женских половых органов 1 поле, 1 сеанс
390 ₽
ЗаписатьсяДарсонвализация местная при заболеваниях кожи 1 поле, 1 сеанс
350 ₽
ЗаписатьсяДарсонвализация местная при заболеваниях крупных кровеносных сосудов 1 поле, 1 сеанс
390 ₽
ЗаписатьсяДарсонвализация местная при заболеваниях периферической нервной системы 1 поле, 1 сеанс
390 ₽
ЗаписатьсяДарсонвализация местная при заболеваниях системы органов кроветворения и крови 1 поле, 1 сеанс
350 ₽
ЗаписатьсяДарсонвализация при заболеваниях верхних дыхательных путей 1 сеанс
390 ₽
ЗаписатьсяЛазеротерапия при заболеваниях женских половых органов
390 ₽
ЗаписатьсяЛекарственный ультрафонофорез при заболеваниях желез внутренней секреции 1 поле, 1 сеанс
390 ₽
ЗаписатьсяЛекарственный ультрафонофорез при заболеваниях периферической нервной системы 1 поле, 1 сеанс
390 ₽
ЗаписатьсяНаружное применение газовой озонокислородной смеси 1 процедура
390 ₽
ЗаписатьсяНизкоинтенсивное лазерное облучение кожи 1 процедура, 1-2 зоны
390 ₽
ЗаписатьсяНизкоинтенсивное лазерное облучение кожи 1 процедура, 3-5 зон
390 ₽
ЗаписатьсяОсмотр (консультация) врача-физиотерапевта
590 ₽
ЗаписатьсяПеременное магнитное поле при заболеваниях женских половых органов, 1 поле, 1 сеанс
390 ₽
ЗаписатьсяПодкожное введение газовой озонокислородной смеси 1 процедура
390 ₽
ЗаписатьсяРектальное воздействие импульсными токами при заболеваниях сигмовидной и прямой кишки, 1 сеанс
390 ₽
ЗаписатьсяРектальное воздействие магнитными полями при заболеваниях мужских половых органов 1 сеанс
390 ₽
ЗаписатьсяРектальное воздействие магнитными полями при заболеваниях сигмовидной и прямой кишки
390 ₽
ЗаписатьсяРектальное воздействие магнитными полями при заболеваниях сигмовидной и прямой кишки, 1 сеанс
390 ₽
ЗаписатьсяРектальное воздействие низкоинтенсивным лазерным излучением при заболеваниях мужских половых органов
650 ₽
ЗаписатьсяРектальное воздействие ультразвуком при заболеваниях мужских половых органов 1 сеанс
390 ₽
ЗаписатьсяРектальное воздействие ультразвуком при заболеваниях сигмовидной и прямой кишки
390 ₽
ЗаписатьсяРектальное импульсное электровоздействие при заболеваниях мужских половых органов 1 сеанс
390 ₽
ЗаписатьсяРектальное лазерное воздействие при заболеваниях сигмовидной и прямой кишки 1 сеанс
390 ₽
ЗаписатьсяРектальные инсуффляции газовой озонокислородной смеси 1 процедура
390 ₽
ЗаписатьсяРектальный ультрафонофорез при заболеваниях мужских половых органов
390 ₽
ЗаписатьсяРектальный ультрафонофорез при заболеваниях сигмовидной и прямой кишки
390 ₽
ЗаписатьсяТоки Бернара при заболеваниях периферической нервной системы 1 поле, 1 сеанс
390 ₽
ЗаписатьсяТранскраниальная магнитолазеротерапия «Транскранио» при заболеваниях органов зрения
390 ₽
ЗаписатьсяТранскраниальная магнитолазеротерапия «Транскранио» при заболеваниях центральной и переферической нервной системы
490 ₽
ЗаписатьсяТранскраниальная магнитолазеротерапия «Транскранио» при нейросенсорной тугоухости
390 ₽
ЗаписатьсяТранскраниальная магнитотерапия «Транскранио» при заболеваниях суставов
490 ₽
ЗаписатьсяУльтрафонооорез лекарственный при заболеваниях мышц 1 процедура, 1 группа мышц
390 ₽
ЗаписатьсяУльтрафонофорез лекарственный 1 поле, 1 сеанс
390 ₽
ЗаписатьсяУльтрафонофорез лекарственный при заболеваниях верхних дыхательных путей
350 ₽
ЗаписатьсяУльтрафонофорез лекарственный при заболеваниях суставов 1 сеанс, 1 сустав
390 ₽
ЗаписатьсяУльтрафонофорез лекарственный при заболеваниях суставов 1 сеанс, 2 сустава
390 ₽
ЗаписатьсяФизиопунктура токами надтональной частоты
350 ₽
ЗаписатьсяФизиопунктура токами надтональной частоты 1 поле, 1 сеанс
350 ₽
ЗаписатьсяЧрескожная короткоимпульсная электростимуляция (ЧЭНС)
390 ₽
ЗаписатьсяЭлекторофорез лекарственных препаратов при заболеваниях желудка и двенадцатиперстной кишки 1 поле, 1 сеанс
390 ₽
ЗаписатьсяЭлектрофорез импульсными токами 1 поле, 1 сеанс
390 ₽
ЗаписатьсяЭлектрофорез лекарственным препаратом аскорбиновая кислота при заболеваниях системы органов кроветворения и крови, 1 поле, 1 сеанс
390 ₽
ЗаписатьсяЭлектрофорез лекарственным препаратом гепарин при заболеваниях системы органов кроветворения и крови, 1 поле, 1 сеанс
390 ₽
ЗаписатьсяЭлектрофорез лекарственным препаратом лидаза при костной патологии 1 поле, 1 сеанс
390 ₽
ЗаписатьсяЭлектрофорез лекарственным препаратом никотиновая кислота при заболеваниях системы органов кроветворения и крови, 1 поле, 1 сеанс
390 ₽
ЗаписатьсяЭлектрофорез лекарственным препаратом новокаин/лидокаин при костной патологии 1 поле, 1 сеанс
390 ₽
ЗаписатьсяЭлектрофорез лекарственным препаратом при нарушениях микроциркуляции 1 поле, 1 сеанс
390 ₽
ЗаписатьсяЭлектрофорез лекарственным препаратом р-р кальция хлорида 2% при костной патологии 1 поле, 1 сеанс
390 ₽
ЗаписатьсяЭлектрофорез лекарственным препаратом сульфат магния при заболеваниях системы органов кроветворения и крови, 1 поле, 1 сеанс
390 ₽
ЗаписатьсяЭлектрофорез лекарственным препаратом Трипсин при патологии легких, 1 поле, 1 сеанс
390 ₽
ЗаписатьсяЭлектрофорез лекарственных препаратов при заболеваниях верхних дыхательных путей 1 поле, 1 сеанс
390 ₽
ЗаписатьсяЭлектрофорез лекарственных препаратов при заболеваниях желез внутренней секреции, 1 поле, 1 сеанс
390 ₽
ЗаписатьсяЭлектрофорез лекарственных препаратов при заболеваниях женских половых органов 1 поле, 1 сеанс
390 ₽
ЗаписатьсяЭлектрофорез лекарственных препаратов при заболеваниях кишечника 1 поле, 1 сеанс
390 ₽
ЗаписатьсяЭлектрофорез лекарственных препаратов при заболеваниях мужских половых органов, 1 поле, 1 сеанс
390 ₽
ЗаписатьсяЭлектрофорез лекарственных препаратов при заболеваниях периферической нервной системы 1 поле, 1 сеанс
390 ₽
ЗаписатьсяЭлектрофорез лекарственных препаратов при заболеваниях печени и желчевыводящих путей 1 поле, 1 сеанс
390 ₽
ЗаписатьсяЭлектрофорез лекарственных препаратов при заболеваниях поджелудочной железы 1 поле, 1 сеанс
390 ₽
ЗаписатьсяЭлектрофорез лекарственных препаратов при патологии легких, 1 поле, 1 сеанс
390 ₽
ЗаписатьсяЭлектрофорез лекарственных препаратов эндоназальный 1 сеанс
390 ₽
ЗаписатьсяЭлектрофорез при заболеваниях крупных кровеносных сосудов, 1 поле, 1 сеанс
390 ₽
ЗаписатьсяЭндоаурикулярное воздействие низкоинтенсивным лазерным излучением при заболеваниях органов слуха 1 поле, 1 сеанс
390 ₽
ЗаписатьсяЭндоскопический эндоназальный доступ (EEA) | Неврологическая хирургия
Эндоскопический эндоназальный доступ (EEA) — это инновационная хирургическая техника, используемая для удаления опухолей и поражений головного мозга, некоторые размером с мяч для софтбола, через нос. Многопрофильная команда нейрохирургов, отоларингологов, офтальмохирургов и хирургов позвоночника в UPMC разработала и усовершенствовала эту технику, и они являются одними из самых опытных в мире.
С помощью EEA хирурги достигают опухолей и поражений основания черепа и верхней части позвоночника непосредственно через нос и носовые пазухи.Специально разработанный эндоскоп обеспечивает свет и линзу для просмотра и передачи внутренних изображений. Наряду с эндоскопом для диссекции и удаления опухоли используются высокотехнологичные инструменты. В UPMC эти операции выполняются в специализированных современных кабинетах, в которых используются передовые технологии визуализации.
Этот минимально инвазивный подход использует нос и пазухи в качестве естественных коридоров для доступа к опухолям и поражениям в критических областях у основания черепа или верхней части позвоночника.Эндоскопический эндоназальный подход позволяет хирургам лечить многие труднодоступные опухоли, даже те, которые когда-то считались «неоперабельными», без повреждения лица или черепа.
[Дополнительные сведения об условиях, которые лечатся с помощью EEA, на веб-сайте UPMC.]
Эндоскопическая эндоназальная хирургия (EES) имеет долгую историю в Питтсбургском университете. Центр хирургии основания черепа UPMC более двух десятилетий назад стал пионером в разработке минимально инвазивных подходов к основанию черепа и головного мозга и в настоящее время является одним из самых загруженных центров в мире по эндоскопическому лечению опухолей гипофиза и опухолей основания черепа.
Пол Гарднер, доктор медицины, Карл Снайдерман, доктор медицины, магистр делового администрирования, Георгиос Зенонос, доктор медицины, и Эрик Ван, доктор медицины, составляют команду экспертов в этой области, продвигая ее через исследования клинических исходов, углубленное анатомическое исследование и международную программу обучения. .
[Узнайте больше об эндоскопической эндоназальной анатомии и хирургии на веб-страницах лаборатории хирургической нейроанатомии.]
Концепция групповой хирургии позволила нашему центру расширить роль эндоскопического эндоназального доступа (EEA), включив в него все опухоли гипофиза, независимо от размера или инвазивности, а также доступ к опухолям основания черепа от лобной пазухи до самого низа. к верхнему шейному отделу позвоночника и к кавернозному синусу, пещере Меккеля, яремному отверстию и далее.
Кроме того, наш центр имеет самый большой опыт применения этих методов для педиатрических пациентов, а также для лечения сложных поражений, таких как аневризмы и ангиофибромы.
границ | Система эндоназальной доставки в ЦНС терапевтических олигонуклеотидов, не проникающих через гематоэнцефалический барьер, с использованием гетеротопического приживления слизистой оболочки
Введение
Неврологические расстройства составляют до 6.3% глобального бремени болезней (ВОЗ, 2006). Хотя исследователи добились значительных успехов в нашем понимании патогенеза и естественного течения болезни Паркинсона, разработка эффективных терапевтических вариантов не успевала за темпами, отчасти из-за неспособности большинства методов лечения проникать через гематоэнцефалический барьер (ГЭБ).
Нейротрофический фактор головного мозга (BDNF) представляет собой одну из наиболее многообещающих и интенсивно изученных мишеней нейродегенеративных заболеваний, поскольку, как было показано, он замедляет или даже обращает вспять прогрессирование болезни при БП (Ochs et al., 2000; Нагахара и Тушинский, 2011; Ventriglia et al., 2013). Однако экзогенная доставка методов лечения на основе рекомбинантных нейротрофических факторов сталкивается с несколькими критическими проблемами, включая проблемы с дозированием, нецелевые эффекты, которые сильно препятствуют их клиническому применению (Krishna, 2016; Luz et al., 2016). Более того, производство рекомбинантных белков создает физиологические посттрансляционные модификации, которые затем доставляются в неподходящие ткани и субклеточные компартменты (Quiroz et al., 2012).Эти опасения актуальны для BDNF, где девять функциональных промоторов, более 15 альтернативных транскриптов, пре-белковый процессинг и N-гликозилирование, а также регуляторный природный антисмысловой транскрипт (NAT) — все они способствуют тонкой модуляции биологической активности (Mowla et al. , 2001; Liu et al., 2005; Pruunsild et al., 2007).
NAT представляют собой подкласс эндогенных некодирующих РНК, которые специфически ингибируют экспрессию многих белков, связанных с заболеванием, посредством эпигенетических механизмов. NAT активны только в клетках, которые конститутивно экспрессируют соответствующие белки-мишени (Katayama et al., 2005; Modarresi et al., 2012; Halley et al., 2014). Примечательно, что большинство проблем с посттрансляционной модификацией и неправильной компартментализацией, присущей терапевтическим препаратам на основе рекомбинантных белков, можно избежать путем разработки методов лечения, которые модулируют активность NAT с использованием AntagoNAT (AT). AntagoNAT представляют собой соединения на основе олигонуклеотидов, комплементарные определенной последовательности NAT, и обладают высокой специфичностью по отношению к одной белковой мишени (Magistri et al., 2012; Modarresi et al., 2012; Wahlestedt, 2013; Halley et al., 2014). Кроме того, AntagoNAT активируют эндогенный белок в его естественной субклеточной среде, где он подвергается соответствующим посттрансляционным модификациям и полностью доступен для механизмов эндогенной обратной связи, тем самым ограничивая токсичность. В отличие от белков, которые должны продуцироваться в системе биологического хозяина, AntagoNAT получают путем контролируемого химического синтеза при значительно меньшей стоимости и не содержат потенциально иммуногенного переноса из клеток-хозяев. AT решают проблемы лечения рекомбинантным BDNF, включая токсичность вне мишени, иммуногенность и неправильную посттрансляционную модификацию.В то же время они способны увеличивать целевую специфичность, улучшать захват нейронами и обеспечивать соответствующую субклеточную компартментализацию экспрессируемого белка. BDNF NAT, экспрессируемый из противоположной цепи геномного локуса BDNF, как известно, регулирует экспрессию BDNF и, следовательно, может быть направлен на увеличение экспрессии эндогенного BDNF для лечения нейродегенеративных заболеваний. Наша группа ранее обнаружила несколько последовательностей AntagoNAT, комплементарных BDNF-NAT, которые увеличивают экспрессию BDNF с высокой эффективностью и низкой токсичностью, используя установленный нейросферный анализ (Modarresi et al., 2012). Несмотря на очевидную перспективу терапевтических средств BDNF AntagoNAT при нейродегенеративных заболеваниях, они не могут пересекать ГЭБ, что требует доставки непосредственно в мозг.
Основные стратегии доставки в мозг, которые в настоящее время изучаются, можно разделить на инвазивные и неинвазивные (Dong, 2018). Инвазивные стратегии, такие как внутрижелудочковые, интратекальные и внутримозговые инъекции, включают физическое разрушение ГЭБ, позволяя лекарствам проникать в спинномозговую жидкость и паренхиму головного мозга (Lu et al., 2014). Интратекальная доставка AntagoNAT-подобных соединений использовалась в клинике для лечения нескольких заболеваний, включая детскую спинальную мышечную атрофию (Chiriboga et al., 2016; Finkel et al., 2017) и боковой амиотрофический склероз (Miller et al., 2013). Несмотря на свою эффективность, интратекальные инъекции могут быть связаны со значительной болезненностью, включая головную боль в спине, локальную боль в спине или иррадирующей боли в ногах, менингит, эпидуральный абсцесс, субдуральную гематому и даже смерть (Gaucher and Perez, 2002; Pandian et al., 2004). Точно так же другие инвазивные инъекции связаны с серьезным риском травм головного мозга и инфекций (Lu et al., 2014). Стратегии неинвазивной доставки лекарственных средств включают химическую или биологическую модификацию соединений-мишеней, которые используют различные рецепторы, присутствующие на эндотелиальных клетках ГЭБ. Эти многообещающие методы не масштабируются и сталкиваются со значительными нормативными препятствиями (Pathan et al., 2009). Интраназальная доставка лекарств — еще один неинвазивный метод доставки лекарств, который использует преимущества прямых путей обонятельного нерва для доставки лекарств непосредственно в паренхиму головного мозга (Crowe et al., 2018). Однако он сталкивается со значительными ограничениями, включая плохое распределение лекарств, мукоцилиарный клиренс и малую площадь обонятельной поверхности нейроэпителия. Кроме того, присутствие различных протеаз и пептидаз в слизистой оболочке носа может легко разрушать молекулы-мишени, тем самым влияя на количество лекарства, достигающего головного мозга (Bleier et al., 2011; Touitou and Illum, 2013). Таким образом, несмотря на многообещающий характер всех этих стратегий, они недолговечны и их трудно масштабировать для удовлетворения потребностей растущего населения, страдающего неврологическими расстройствами.Следовательно, остается потребность в новых методах доставки лекарств, которые могут преодолеть эти недостатки и эффективно доставлять лекарства в мозг.
Наша группа ранее сообщала о новом методе постоянного обхода ГЭБ с использованием эндоскопической гетеротопической трансплантации слизистой оболочки в носовой полости (Pawar et al., 2018). Этот метод основан на общепринятых эндоскопических хирургических техниках основания черепа для восстановления основания черепа после интрадуральных доступов с использованием трансплантатов слизистой оболочки, включая нососептальный лоскут (Ishii et al., 2014; Мияке и Блейер, 2015а). Было показано, что эти трансплантаты слизистой оболочки в 1000 раз более проницаемы, чем ГЭБ, при этом оставаясь водонепроницаемыми и иммунокомпетентными (Harvey et al., 2012; Miyake and Bleier, 2015a). Основываясь на этой значительной проницаемости, наша группа ранее сообщала, что их можно использовать для доставки высокомолекулярных и низкомолекулярных препаратов, включая рекомбинантные нейротрофические факторы, непосредственно в мозг (White et al., 2003; Hadad et al., 2006; Cassano and Felippu , 2009; Bleier et al., 2012, Bleier et al., 2013, Bleier et al., 2015; Харви и др., 2012; Kimple et al., 2012; Чаабан и Вудворт, 2013).
В текущем исследовании мы использовали установленную модель трансплантата слизистой оболочки грызунов, ранее разработанную нашей группой (Pawar et al., 2018), чтобы определить распределение и эффективность трансмукозальной доставки BDNF AT у наивных крыс и в модели 6-OHDA PD. . Для дальнейшего улучшения доставки лекарственного средства и защиты AT BDNF от нуклеаз мы также использовали катионную липосомную систему с длиной волны 200–250 нм.
В свете потенциальных преимуществ терапии BDNF AntagoNAT при БП и ограничений для его доставки мы выдвинули гипотезу, что наш подход к гетеротопической трансплантации слизистой оболочки может быть использован в качестве нового метода для прямой доставки AntagoNAT в ЦНС.
Материалы и методы
Дизайн исследования
Мы использовали дополнительные in vitro (клетки шванномы крысы RT4-D6P2T, n = 4–6 на состояние) и in vivo (метод трансплантации гетеротопной слизистой оболочки крысы для обхода BBB, n = 4–6 на группу лечения) для изучения поглощения, распределения и эффективности BDNF AntagoNAT (AT) при дерепрессии транскрипции BDNF и экспрессии белка.Для исследований in vitro использовали 3 группы лечения (отрицательный контроль, AT в физиологическом растворе (AT-SALINE) и AT в липосомах (AT-LIPO)) с n = 4-6 на группу. Для исследований на неопытных крысах использовали 4 группы лечения (отрицательный контроль, положительный контроль, AT в физиологическом растворе (AT-SALINE) и AT в липосомах (AT-LIPO) для качественных исследований и 3 группы лечения (отрицательный контроль, AT в физиологическом растворе ( AT-SALINE) и AT в липосомах (AT-LIPO) были использованы для количественных исследований с n = 4 на группу.Для исследований на крысах с 6-OHDA использовали 3 группы обработки (наполнитель + 6-OHDA, положительный контроль и AT-LIPO + 6-OHDA) с n = 6 на группу. Для исследований in vivo и каждой крысе были выполнены две операции (подробно описано в следующем разделе). Первая операция заключалась в имплантации трансплантата над краниотомией, а через три дня над трансплантатом был помещен стерильный пропиленовый резервуар для доставки необходимых препаратов. Всем крысам вводили 0,15 мг / кг AntagoNAT (cy5-BDNF-AT и BDNF-AT) в физиологическом растворе и липосомах три раза каждые 72 часа и умерщвляли через 3 дня после последней дозы (график экспериментов см. На дополнительном рисунке S1). In vitro эффективность трансфекции и in vivo Распределение определяли гистологически с использованием Cy5, ковалентно меченного BDNF-AT (Cy5-BDNF-AT), и гибридизационным анализом с использованием немеченого активного BDNF-AT. В обеих моделях липосомный инкапсулированный состав (AT-LIPO) сравнивали с физиологическим раствором (AT-SALINE) и соответствующими контрольными носителями. In vivo терапевтическая эффективность была протестирована как на здоровых моделях крыс, так и на моделях 6-OHDA PD крыс и сравнивалась с контролем. Крысам, получавшим 6-OHDA, вводили одностороннюю инъекцию в правое полосатое тело и вводили дозу 0.15 мг / кг требуемого состава AntagoNAT в тот же день после установки пропиленового резервуара (через три дня после приживления). Крысам вводили дозу 0,15 мг / кг состава трижды за 72 часа, и всех крыс умерщвляли через шестнадцать дней после инъекции 6-OHDA (график экспериментов см. На дополнительном рисунке S1).
Статистический анализ
Все статистические данные были выполнены с использованием GraphPad Prism (версия 7.00, Ла-Холла, Калифорния, США, www.graphpad.com). Экспериментальные данные анализировали с помощью однофакторного и двустороннего дисперсионного анализа с апостериорным критерием Тьюки для множественных сравнений (значение p меньше 0.05 считался статистически значимым).
Животные
40 самцов крыс Sparague Dawley (250–300 г) были приобретены в лабораториях Charles River и использованы для исследования. Все процедуры с животными были одобрены Комитетом по уходу и использованию животных Северо-Восточного университета (номер протокола 180101-R). Все операции проводились под изофлурановой анестезией, и были приложены все усилия, чтобы минимизировать страдания. Все крысы были размещены по одному в комнате с климат-контролем с 12/12-часовым циклом свет / темнота.Всем крысам давали пищу и воду по мере необходимости. Крысу-донора использовали для сбора свободного трансплантата слизистой оболочки носовой перегородки в соответствии с ранее описанными методами (Bleier et al., 2013; Miyake and Bleier, 2015a). Всех крыс случайным образом распределили на контрольную и экспериментальную группы.
Процедура трансплантации гетеротопной слизистой оболочки крысы
Мы использовали инновационную технику гетеротопической трансплантации слизистой оболочки для обхода ГЭБ и прямой доставки BDNF-AT в мозг самцов крыс Sprague-Dawley.Вкратце, крысу-донора умерщвляли двуокисью углерода и использовали хирургические ножницы для удаления кожи с тыльной стороны носа. Хирургическое сверло и ножницы использовались для удаления и изоляции одностороннего мукоперихондриального трансплантата перегородки, который хранился в физиологическом растворе не более 2 часов. Подопытную крысу (250–300 г) анестезировали изофлураном и помещали в стереотаксическую рамку под операционным микроскопом. Место операции стерилизовали повидон-йодом и спиртовыми тампонами. Сделан сагиттальный разрез от уровня средней глазницы до затылка с помощью скальпеля.Затем были приподняты двусторонние кожные лоскуты, обнажая перикраний. С помощью скальпеля очистили перикраний от предполагаемого места трепанации черепа (1,5 мм спереди-сзади и 2 мм медиально-латеральнее брегмы). Хирургическое сверло использовалось для создания трепанации черепа 3 мм, оставив неповрежденной твердую мозговую оболочку. Затем удалили подлежащую твердую мозговую оболочку и паутинную оболочку, оставив неповрежденной мягкую мозговую оболочку. Собранный трансплантат от крысы-донора затем имплантировали над краниотомией так, чтобы базолатеральная мембрана трансплантата была обращена к обнаженной мягкой мягкой мозговой оболочке.Поверх трансплантата помещали стерильный нитрил для предотвращения прилипания к окружающим тканям. Кожные лоскуты закрывали швом, и крысу оставляли для приживления на 3 дня. Через 3 дня кожные лоскуты снова были тщательно отражены, не повреждая подлежащий имплантированный трансплантат слизистой оболочки. Затем трансплантат исследовали с помощью микроскопа для рассечения, чтобы убедиться в его жизнеспособности и периферическом приживлении. Затем над трансплантатом слизистой оболочки помещали полипропиленовый резервуар объемом 250 мкл, прикрепляли к черепу с помощью цианоакрилата и проверяли на утечки с использованием стерильного физиологического раствора.После имплантации винта (винты и детали Morris Precision — плоские саморезы 000 × 3/32) на череп наложили стоматологический цемент для фиксации резервуара. Затем всем крысам вводили 0,15 мг / кг составов в день закапывания резервуара с последующим введением еще двух доз каждые 72 часа. Затем всех крыс умерщвляли через три дня после последней дозы. Отрицательным контролем считались крысы, перенесшие трепанацию черепа без отражения твердой мозговой оболочки и паутинной оболочки, которые функционируют как барьер между кровью и спинномозговой жидкостью.Положительным контролем считались крысы, которым BDNF-AT наносили непосредственно на открытую мягкую мозговую оболочку после трепанации черепа и отражения твердой мозговой оболочки / паутинной оболочки без вмешательства в установку трансплантата (рис. 1).
РИСУНОК 1 . Клинический пример и иллюстрация техники гетеротопической трансплантации слизистой оболочки грызунов. (A) Хирургический эндоскопический трансназальный вид человеческого мозга (*) через дефект основания черепа (пунктирный овал), демонстрирующий большую связь между носовой полостью и центральной нервной системой после удаления опухоли. (B) Реконструкция хирургического дефекта с использованием гетеротопического трансплантата слизистой оболочки (M, пунктирная линия). (C) Траектория эндоскопического доступа через ноздри к мозгу (* представляет ту же область мозга, что и на рисунке 1A). (D) Иллюстрация модели крысы, демонстрирующей расположение трансплантата слизистой оболочки (M) над теменной долей мозга (*). (E) Изображение поперечного сечения черепа человека и крысы после реконструкции, демонстрирующее вставку трансплантата слизистой оболочки (M) поверх костной трепанации черепа (черные стрелки) как единственного барьера между внешней средой и мозгом (*). (F) Иллюстрация положения трансплантата слизистой оболочки (M) в носу человека, демонстрирующая, как модель на грызунах точно воспроизводит слои клинической реконструкции основания черепа человека. (G) Фотография здоровой приживленной слизистой оболочки на модели крысы (M, пунктирная линия). (H) Трихромное окрашивание по Массону трансплантата слизистой оболочки крысы (M, столбик = 20 мкм) в той же ориентации, что и на рисунке 1E, демонстрируя, что здоровая слизистая оболочка плотно прилегает к срезанному краю кости (черные стрелки) с неповрежденным нижележащим мозгом (* *). (I, Дж) . Изображения при большом увеличении (окраска трихромом по Массону) эпителия трансплантата на 3-й и 7-й дни после операции (Рисунок 1J), демонстрирующие неповрежденную и здоровую слизистую оболочку в обеих временных точках (полоса = 5 мкм).
Протокол окрашивания трихомов по Массону
После операции всех крыс умерщвляли с использованием углекислого газа и выделяли целые головы крыс. Затем каждую голову крысы помещали в декальцинирующий раствор на 24–48 часов. После декальцификации черепа крыс выделяли и помещали в 4% раствор параформальдегида на 24–48 часов.Затем образцы повторно фиксировали раствором Буэна в течение 1 часа при 56 ° C для улучшения качества окрашивания. Затем каждый образец разделяли и окрашивали с использованием рабочего раствора гематоксилина железа Вейгерта в течение 10 мин. Затем срезы промывали в проточной теплой водопроводной воде в течение 10 мин и затем окрашивали в растворе фуксина алой кислоты Бибриха в течение 10–15 мин. После промывки в дистиллированной воде срезы дифференцировали в растворе фосфорно-фосфорновольфрамовой кислоты в течение 10–15 мин. Затем срезы переносили в раствор анилинового синего на 5–10 мин.Срезы промывали дистиллированной водой и дифференцировали в 1% растворе уксусной кислоты в течение 2–5 мин. После последней промывки срезы обезвоживали в спирте и очищали в ксилоле. Затем срезы закрепляли смолистой монтажной средой и отображали на микроскопе.
Модель болезни 6-гидроксидофамина Паркинсона у крыс
После осмотра трансплантата через 3 дня после приживления крысам вводили 10 мкл раствора 6-гидроксидофамина (6-OHDA) (10 мкг / 2 мкл соли 6-OHDA HBr (Sigma Олдрич 162957) в 0.1% аскорбиновой кислоты в физиологическом растворе) со скоростью 0,66 мкл / мин с использованием шприцевого насоса [Гарвардский аппарат удаленного / инфузионного отвода насос 11 элитный программируемый шприцевой насос с наномитом (каталожный № 70-4507)]. Раствор вводили в правое полосатое тело с помощью шприца Neuros Hamilton объемом 5 мкл (номер по каталогу 65460-03) в следующих координатах: передне-заднее (AP), 0,5 мм; медиально-латеральный (ML), 2,5 мм; и дорсовентрально (DV) 4,5 мм за 3 мин. Шприц оставался на месте еще 5 мин после инъекции перед изъятием.После извлечения шприца был имплантирован резервуар с пропиленом объемом 250 мкл, как описано в разделе процедуры гетеротопической прививки. Затем крысам вводили дозу либо физиологического раствора (например, контрольный носитель), либо 0,15 мг / кг липосом BDNF AT три раза каждые 72 часа (например, AT-LIPO). Затем всех крыс умерщвляли через 16 дней после инъекции 6-OHDA.
Мозговый нейротрофический фактор Дизайн и валидация AntagoNAT
Потенциальные регуляторные NAT в локусе BDNF на хромосоме 3 крысы были идентифицированы с использованием браузера генома UCSC по адресу https: // genome.ucsc.edu/cgi-bin/hgGateway. Номера доступа этих транскриптов были CN544668, AI030286 и BF391266. Одноцепочечные полностью фосфоротиорированные олигонуклеотиды (AntagoNAT) были сконструированы для этих трех транскриптов с использованием Oligo Design and Analysis Tools (IDT Inc., Сан-Диего, Калифорния, США, http://www.idtdna.com/calc/analyzer). Были отобраны последовательности AntagoNAT, не имеющие других значимых гомологий в геноме крысы. Затем IDT синтезировали AntagoNAT. Линия нейрональных шванновских клеток Rattus norvegicus RT4-D6P2T (ATCC # CRL-2768TM) была получена из Американской коллекции типовых культур (США).Клетки RT4-D6P2T культивировали в EMEM с 10% FBS и 1% пенициллина / стрептомицина при 37 ° C и 5% CO 2 . AntagoNAT в конечной концентрации 20 нМ трансфицировали в клетки RT4D6P2T с использованием Lipofectamine ™ 2000 (Life Technologies Corporation, Гранд-Айленд, Нью-Йорк, США), как описано в (Hsiao et al., 2016).
Суммарную РНК выделяли с использованием системы выделения общей РНК SV (Promega, Мэдисон, Висконсин, США) через 48 часов после трансфекции, и уровень мРНК крысиного BDNF определяли количественно с помощью ПЦР в реальном времени с использованием набора для обратной транскрипции кДНК высокой емкости (прикладной Biosystems, США) и экспрессию гена TaqMan смешивают с анализом экспрессии гена BDNF TaqMan Rn02531967_s1 крысы, меченным FAM.Результаты были нормализованы к уровням 18S, определенным с использованием контрольного анализа Taqman 18S, меченного VIC (номер в каталоге Applied Biosystems 4319413E), и сравнены с уровнями BDNF в клетках, трансфицированных неактивным контрольным олигонуклеотидом аналогичного химического состава и без гомологии в геноме крысы. Анализ данных проводился с использованием программного обеспечения Excel. AntagoNAT C * A * T * A * G * G * A * G * A * C * C * C * T * C * C * G * C * A * A * C (называемый BDNF-AT) против CN544668 транскрипт показал наибольшую повышающую регуляцию уровней мРНК BDNF и был выбран для оставшейся части экспериментов in vitro и in vivo .
Состав и характеристика нейротрофического фактора, производного от Cy5-мозга, — AntagoNAT, и активного нейротрофического фактора, полученного из мозга, — катионных липосом AntagoNAT. катионный липид), холестерин (стабилизатор) и DPPC (1,2-дипальмитоил-sn-глицеро-3-фосфохолин) (нейтральный липид) в молярном соотношении 5: 3: 5. Базовую концентрацию каждого липида делали в хлороформе, и 1 мл каждого липида добавляли в 10-миллилитровую круглодонную колбу, прикрепленную к Rotavap (IKA RV Control 10), и позволяли вращаться со скоростью 100 об / мин на водяной бане при комнатной температуре. .Когда хлороформ испарился, тонкую липидную пленку на дне колбы сушили в течение ночи в вакууме для удаления растворителя. На следующий день пленку гидратировали 200 мкг / мл Cy5-BDNF-AT или активного BDNF-AT в физиологическом растворе в качестве начальной концентрации с последующей 1 мин встряхивания. Липосомный препарат помещали на лед на 2 мин, встряхивали, помещали в водяную баню при 37 ° C на 2 мин и снова встряхивали. Было выполнено пять таких циклов замораживания-оттаивания. Затем препарат обрабатывали ультразвуком в течение 5 мин на льду.Смесь ультрацентрифугировали в ультрацентрифуге Beckman-Coulter при 100000 об / мин в течение 1 ч для отделения липосом, инкапсулированных в АТ, от неинкапсулированных АТ. Гранулированные липосомы суспендировали в 400 мкл физиологического раствора и экструдировали через мембраны 800, 400 и 200 нм с использованием экструдера (Avanti Lipids). Концентрированный супернатант использовали для дальнейшего анализа. Для определения эффективности инкапсуляции использовался косвенный метод. Количество AT в супернатанте измеряли с помощью нанокапли и вычитали из начального количества, получая общий AT, инкапсулированный в липосомы.Экструдированные липосомы характеризовали по размеру, PDI (индекс полидисперсности) и заряду с использованием Zetasizer (Nano-ZS90, Malvern Instruments, Inc. Вестборо, Массачусетс, США). Морфология липосом определялась с помощью просвечивающей электронной микроскопии (ПЭМ). Липосомные частицы отрицательно окрашивали 1,5% уранилацетатом. Медную сетку с углеродным покрытием размером 300 меш наносили на 10 мкл липосомального образца (разбавленного в 10 раз). Избыточный образец удаляли путем кратковременного прикосновения сетки к листу фильтровальной бумаги с последующими 3 краткими промывками деионизированной водой с последующим прикосновением сетки к 1.5% уранилацетат окрашивает 3-5 раз и отводит лишнюю жидкость после каждого шага. Сетки образцов просматривали с помощью ТЕМ JEOL, JEM 1010, работающего при 80 кВ.
Качественная оценка поглощения нейротрофного фактора Cy5 мозга и AntagoNAT в линии клеток шванномы крысы RT4-D6P2T
Клетки шванномы крысы RT4-D6P2T (американская коллекция типовых культур) инкубировали при 37 ° C с 5% CO 2 в DMEM с 10% FBS и 2% антибиотиками. Все экспозиции происходили при 80% конфлюэнтности.Клетки высевали в 6-луночные планшеты с плотностью 2 × 10 5 клеток на лунку и культивировали в 2 мл среды DMEM без FBS в течение 24 ч при 37 ° C с 5% CO 2 . Затем клетки инкубировали с 300 нМ Cy5-BDNF-AT в физиологическом растворе и катионных липосомах в течение 30 минут, 4 часов, 8 часов и 12 часов. После инкубации клеток с Cy5-BDNF-AT в течение определенных временных точек клетки дважды промывали 1X PBS и фиксировали 4% формалином в течение 10 минут. Затем на каждое слайд добавляли каплю красителя DAPI перед нанесением покровных стекол для окрашивания ядер.После окрашивания DAPI покровное стекло было приклеено к предметным стеклам, и предметные стекла были дополнительно исследованы под конфокальным микроскопом для определения поглощения клетками (лазерный сканирующий конфокальный микроскоп Zeiss LSM 700, Торнвуд, Нью-Йорк, США, использовалось увеличение — 10x, все изображения были снято с использованием настроек автоматической экспозиции из программного обеспечения ZEN 2009).
Количественная оценка поглощения активного нейротрофического фактора головного мозга-AntagoNAT в линии клеток шванномы крысы RT4-D6P2T
Количественные исследования трансфекции проводили на клетках шванномы крысы RT4-D6P2T.Клетки засевали, как описано выше, и обрабатывали 50, 100 и 300 нМ активного BDNF-AT в физиологическом растворе и катионных липосомах в течение 12, 24 и 48 часов. Был разработан гибридизационный анализ для определения концентрации BDNF-AT в образцах. Клетки промывали 1X PBS, осаждали и лизировали с использованием буфера для лизиса RIPA (Thermo Fisher Scientific), содержащего коктейль ингибиторов протеазы без EDTA (Roche). Затем клеточный лизат центрифугировали при 20000 × g в течение 20 минут для удаления клеточного дебриса. Затем супернатант использовали в анализе гибридизации следующим образом.Зонды захвата и обнаружения были разработаны специально для обнаружения BDNF-AT. Зонд захвата был комплементарен 3′-концу, а зонд обнаружения был комплементарен 5′-концу BDNF-AT следующим образом:
Последовательность BDNF-AT — 5′-C * A * T * A * G * G * A * G * A * C * C * C * T * C * C * G * C * A * A * C-3 ′
Зонд захвата — (5AmMC12 // iSp18 / iSp18 // G * + T * + Т * + G * + C * + G * + G * + A * + G).
Датчик обнаружения — (+ G * + G * + T * + C * + T * + C * + C * + T * + A * + T * + G / iSp18 // iSp18 // iBiodT // 3BioTEG) .
, где * обозначает фосфоротиоатную связь, + обозначает модификации LNA, 5AMmc12 представляет собой 5′-амино-модификатор C12m, iSp18 представляет собой внутренний 18-мерный спейсер, iBiodT представляет собой внутренний биотин-dT и 3BioTEG представляет собой 3′-биотин-TEG).Зонды были синтезированы Qiagen Inc., Germantown, MD, США, 20 874–1415 (каталожный номер захватывающего зонда: 339412 YCO0070251 и каталожный номер детектирующего зонда: 339412 YCO0070253). Зонды захвата и обнаружения восстанавливали водой, свободной от нуклеаз, до 5000 пмоль / мл. Затем 40 мкл улавливающего зонда 5000 пмоль / мл добавляли к 19,96 мл 500 мМ Na 2 HPO 4 и 1 мМ Na 2 EDTA (pH 8,5). 150 мкл смеси улавливающих зондов добавляли в каждую лунку 96-луночного белого планшета Nunc ™ (Thermo Scientific, номер по каталогу 436007) и инкубировали в течение ночи при 4 ° C.На следующий день покрытый планшет промывали пять раз 300 мкл / лунку промывочного буфера (1X TBST). После последней промывки планшет инкубировали с блокирующим буфером (3% BSA в 1X DPBS) в течение 2 часов при комнатной температуре на шейкере для планшетов и промывали. Затем в каждую лунку добавляли 150 мкл смеси детектирующий зонд / образец. Смесь детектирующий зонд / образец готовили следующим образом. Сначала 200 мкл 5000 пмоль / мл детектирующего зонда добавляли к 19,8 мл 4X SSC / 0,5% саркозилового буфера. Затем разбавленный детекторный зонд (225 мкл) и образец клеточного экстракта (25 мкл) отжигали в тонкостенной пластине с V-образным дном с использованием термоциклера (RT 100 Bio-Rad) при 90 ° C в течение 12.5 мин с последующей инкубацией при 40 ° C. После добавления отожженного продукта покрытые пластины инкубировали при 45 ° C в течение 2 ч на шейкере для планшетов. Затем планшеты снова промывали и инкубировали с разбавленным конъюгатом стрептавидин-HRP (Jackson Immunoresearch) (1:50 000 раз разбавленным поли-HRP-буфером (Thermo Fisher Scientific) в течение 30 мин при 37 ° C на шейкере для планшетов. Планшет снова промывали , и люминесценцию регистрировали немедленно, добавляя 150 мкл смеси Elisa Femto Solution Mix (Thermo Scientific).
Количественная оценка
in vitro Дерепрессия мРНК нейротрофического фактора, производного мозгом, опосредованного AntagoNATПосле сбора клеток RT4-D6P2T, подвергшихся воздействию BDNF-AT, как описано ранее, клетки лизировали и обрабатывали для выделения РНК с использованием Quick-RNA ™ Набор MiniPrep (Zymo Research). Экстрагированную РНК использовали для синтеза кДНК с использованием SuperScript ™ IV VILO ™ Master Mix (Thermo Fisher Scientific). Затем проводили количественную ПЦР с использованием TaqMan ™ Fast Advanced Master Mix (Thermo Fisher Scientific) в соответствии с инструкциями производителя, используя LightCycler 480 Instrument II в качестве платформы для ПЦР.18S РНК использовали в качестве внутреннего контроля.
Количественная оценка
in vitro Нейротрофический фактор мозга, опосредованный AntagoNAT нейротрофический фактор мозга Дерепрессия белкаПосле сбора клеток RT4-D6P2T, подвергшихся воздействию BDNF-AT, как описано ранее, клетки промывали 1X PBS, осаждали и лизировали с использованием буфер для лизиса RIPA (Thermo Fisher Scientific), содержащий смесь ингибиторов протеазы без ЭДТА. Клетки инкубировали с буфером для лизиса в течение 15 минут, а затем клеточный лизат центрифугировали при 20000 g в течение 20 минут для экстракции белка.Затем собирали супернатант (белок) и образцы разбавляли в 6 раз для определения уровней BDNF с использованием коммерчески доступного набора BDNF ELISA (EMD Millipore).
Количественная оценка
in vitro Цитотоксичность, опосредованная нейротрофическим фактором мозга — AntagoNAT, в клетках шванномы крысы RT4-D6P2TКлетки шванномы RT4 высевали с плотностью 8000 клеток на лунку в 96-луночный планшет с плоским дном для культивирования клеток (Denville Scientific Inc.) и культивировали в 200 мкл ростовой среды в течение 24 ч при 37 ° C с 5% диоксидом углерода.После воздействия на клетки RT4-D6P2T BDNF-AT, как описано выше, старые среды были заменены свежими средами для выращивания, содержащими синий краситель (Hoechst 33,342 для живых клеток) и зеленый краситель (йодид пропидия для мертвых клеток) из ReadyProbes ™ Cell Viability Набор для визуализации (молекулярные зонды). Затем 96-луночный планшет инкубировали в течение 15 мин и каждую лунку визуализировали с помощью флуоресцентного микроскопа Keyence BZ-X710 All-in-One. % Жизнеспособных клеток в каждой лунке определяли количественно с помощью программного обеспечения ImageJ.
Качественная оценка распределения нейротрофического фактора, полученного через слизистую оболочку Cy5-мозг-AntagoNAT, в мозге крысы
Cy5-BDNF-AT в физиологическом растворе и катионных липосомах доставляли в мозг крысы через трансплантат слизистой оболочки после подтверждения успешного приживления, как описано выше.Имплантированный резервуар заполняли 100 мкл Cy5-BDNF-AT в физиологическом растворе и катионных липосомах для общей дозы 0,15 мг / кг. Затем крысам повторно вводили дозу каждые 72 часа, всего 3 раза. Положительный (прямое паренхиматозное дозирование) и отрицательный (трепанация черепа без отражения твердой мозговой оболочки / паутинной оболочки) контроли дополнительно получали Cy5-BDNF-AT в физиологическом растворе в той же концентрации и режиме дозирования. Всех крыс умерщвляли через 3 дня после последней дозы (например, через 12 дней после начальной дозы). Крыс умерщвляли введением углекислого газа и немедленно вырезали мозг из черепа каждой крысы.Все извлеченные мозги немедленно замораживали в ацетоне и растворе сухого льда и помещали в раствор ОКТ -80 ° C. Мозг был разрезан на 50-микронные срезы с использованием криотома, и срезы, содержащие полосатое тело, гиппокамп и черную субстанцию, были визуализированы под эпифлуоресцентным микроскопом (светодиодный флуоресцентный микроскоп Leica DM IL (Leica, Buffalo Grove, IL, США) (увеличение × 20, экспозиция 229,4 мс, настройки усиления фильтра Cy5 для полосатого тела, гиппокампа и черной субстанции были 2, 5.5 и 8 соответственно). Общую интенсивность cy5-флуоресценции для каждого изображения количественно оценивали с помощью программного обеспечения ImageJ, используя уравнение Интегрированная плотность = [площадь выбранной области (флуоресцентная область) × средняя флуоресценция выбранной области] — средняя фоновая флуоресценция.
Количественная оценка распределения нейротрофического фактора, полученного через слизистую оболочку мозга — AntagoNAT, в мозге крысы
Активный BDNF-AT в физиологическом растворе и катионных липосомах доставляли в мозг крысы через трансплантат слизистой оболочки, как описано выше.Имплантированный резервуар был заполнен 100 мкл BDNF-AT в физиологическом растворе и катионных липосомах для общей дозы 0,15 мг / кг. Затем крысам повторно вводили дозу каждые 72 часа, всего 3 раза. В отрицательные контроли, как описано выше, дополнительно вводили BDNF-AT в физиологическом растворе при той же концентрации и режиме дозирования. Крыс умерщвляли, вводя углекислый газ. После умерщвления мозг крысы и обонятельные луковицы немедленно выделяли, и использовали 3-миллиметровые биопсийные иглы (Integra miltex) для выделения полосатого тела, гиппокампа, черной субстанции и мозжечка как на ипсилатеральной, так и на противоположной стороне от места дозирования трансплантата слизистой оболочки.Тканевые штампы гомогенизировали в 300 мкл ледяного буфера для лизиса тканей и гомогенаты центрифугировали при 20000 g в течение 20 мин для экстракции общего белка. Затем экстрагированный белок использовали для анализа гибридизации BDNF-AT, как описано выше. Затем обнаруженные уровни AT были нормализованы к общему содержанию белка в образцах, измеренному с использованием набора для анализа BCA Pierce (Thermo Fisher Scientific).
Количественная оценка
in vivo Нейротрофический фактор мозга, опосредованный AntagoNAT Дерепрессия белка нейротрофического фактора мозга в мозге крысыЧасть образцов экстрагированного белка, выделенных во время процедуры гибридизации BDNF-AT, упомянутой выше, была использована для количественного определения белка BDNF уровни в каждом из изолированных штампов ткани.Концентрации белка BDNF определяли с помощью имеющегося в продаже ELISA (EMD Millipore CYT306) и нормализовали к общему содержанию белка в образце, измеренному с использованием набора для анализа Pierce BCA. Данные были представлены в виде% от контроля, нормированного на содержание белка.
Количественная оценка тирозингидроксилазы и нейротрофического фактора головного мозга в головном мозге крыс с 6-OHDA при болезни Паркинсона с помощью вестерн-блоттинга
После умерщвления PD крыс через шестнадцать дней после инъекции 6-OHDA мозг крысы был изолирован, и для выделения были использованы 3 мм биопсийные иглы. полосатое тело и черная субстанция.Затем ткани гомогенизировали с 220 мкл ледяного буфера для лизиса RIPA, и гомогенат ткани центрифугировали при 12000 g в течение 20 минут при 4 ° C для экстракции общего белка. Общий белок количественно определяли с использованием набора для анализа Pierce BCA (каталог № 23225) и 50 мкг белка каждого образца загружали в каждую лунку с 4–12% гелями бис трис, и белки разделяли с использованием системы электрофореза мини-клеток XCell SureLock. Затем разделенные белки переносили на PVDF-мембрану с помощью iBlot от Invitrogen.Мембрану PVDF с перенесенным белком блокировали в 5% молоке в 1X TBST в течение 1 ч, а затем блоты инкубировали в течение ночи с тирозингидроксилазой (TH-антитело (F-11): каталожный номер sc-25269, 1: 1000), BDNF. (антитело против BDNF (3C11) по каталогу ab203573, 5 мкг / мл) и первичные антитела к β-актину (антитело к β-актину (C4): по каталогу sc-47778, 1: 200) при 4 ° C на шейкере. На следующий день блоты промывали 1X TBST в течение 45 минут и инкубировали в m -IgGκ BP-HRP (каталог № 516102, 1: 1000 для первичных антител Санта-Круза) и козьих антимышиных IgG (H + L). Вторичное антитело HRP (номер по каталогу ab 97 023 для первичного антитела abcam) вторичные антитела в течение 2 часов при комнатной температуре на шейкере.Затем мембраны промывали с использованием 1X TBST в течение 45 мин, а затем блоты проявляли с использованием реагента с улучшенным хемилюминесцентным детектированием (научный каталог thermofisher № 34580 и каталог биотехнологии Санта-Крус № sc-2048). Затем блоты были визуализированы с использованием системы визуализации ChemiDOX ™ XRS + для молекулярной визуализации BioRad, и был проведен полуколичественный анализ блотов с использованием ImageJ. Результаты выражаются в виде интенсивности полосы белка TH и BDNF, нормированной на интенсивность полосы β-актина.
Иммуногистохимический анализ экспрессии тирозингидроксилазы в мозге крыс
Крыс умерщвляли через шестнадцать дней после инъекции 6-OHDA и транскардиально перфузировали 200 мл 1X PBS, а затем 200 мл 4% параформальдегида (каталог Sigma № 1004965000).Затем мозг подвергали последующей фиксации 4% параформальдегидом в течение 4 часов, а затем переносили в 30% раствор сахарозы в 1X PBS на 24 часа при 4 ° C. Затем мозг помещали в резервуары с использованием оптимального режущего раствора (ОКТ). На следующий день из мозга крыс делали срезы на коронковые срезы толщиной 50 мкм, и срезы мозга хранили в 0,1% азиде натрия в 1X PBS до окрашивания. Срезы промывали в течение 30 мин в 0,5% тритоне X-100 и 100 нмоль / л глицина в PBS, а затем в PBS, содержащем тритон X-100, в течение 1 ч (по 20 мин 3 раза).Затем срезы блокировали блокирующим реагентом UltraCruz (номер по каталогу sc-516214) в течение 2 часов при комнатной температуре. Срезы инкубировали в течение ночи в первичном антителе TH, разведенном в блокирующем реагенте (антитело TH (F-11): номер по каталогу sc-25269, 1:50) при 4 ° C на шейкере. На следующий день срезы промывали PBS, содержащим Тритон Х-100 (20 мин 3 раза), а затем инкубировали во вторичном антителе -IgGκ BP-CFL 488 (номер по каталогу sc-516175, 1:50) при комнатной температуре. . Затем срезы промывали в PBS, содержащем Triton X-100 (по 20 минут 3 раза) и в 1X PBS (по 20 минут 3 раза).Затем срезы помещали на предметные стекла с использованием монтажной среды Vectashield (Vector Laboratories H-1000). Покровные стекла в некоторых местах фиксировали на предметных стеклах прозрачным лаком для ногтей. Изображения были получены с помощью универсального флуоресцентного микроскопа Keyence B2-X710.
Результаты
Нейротрофический фактор головного мозга AntagoNAT и хирургическая проверка
Три транскрипта, которые представляли потенциальные регуляторные NAT, были идентифицированы в локусе BDNF на хромосоме 3 крысы с использованием браузера генома UCSC по адресу https: // геном.ucsc.edu/cgi-bin/hgGateway. Один из AT, созданный против транскрипта CN544668, который постоянно демонстрировал значительную повышающую регуляцию уровней мРНК BDNF (см. Дополнительный рисунок S2), был назван BDNF-AT и выбран для экспериментов in vivo, и in vitro, . Все крысы перенесли хирургическую процедуру без истирания. У всех крыс было полное приживление слизистой оболочки без признаков неправильного расположения трансплантата или некроза (рис. 1).
In vitro Поглощение и эффективность в клетках шванномы крысы RT4-D6P2TБланк и катионные липосомы BDNF-AT имели средний размер 206.5 ± 0,0 и 229,4 ± 17,6 нм соответственно (размер получен из зетазайзера). Достигнута 100% эффективность инкапсуляции (см. Дополнительный рисунок S3). С помощью конфокальной микроскопии инкапсулированные в липосомы 300 нМ Cy5-BDNF-AT продемонстрировали качественное поглощение уже через 30 минут после воздействия, в то время как поглощение 300 нМ Cy5-BDNF-AT было отложено до 4-8 часов (рис. 2). Количественная оценка эффективности трансфекции с помощью анализа гибридизации AT между 12 и 48 часами показала ответную дозу с цитотоксичностью менее 20% от 50 до 300 нМ (см. Дополнительный рисунок S4).Инкапсулированный в липосомы AT продемонстрировал значительно большее поглощение во всех дозах и временных точках по сравнению с AT солевым раствором (рис. 2). Аналогичным образом, количественная ПЦР показала, что липосомальная группа продемонстрировала значительно большую дозу и время-зависимую транскрипцию BDNF, чем группа, получавшая физиологический раствор. Уровни белка BDNF следовали аналогичной схеме для условий дозирования 50 и 100 нМ, в то время как повышенная экспрессия среди условий 300 нМ не была статистически значимой (фигура 3).
РИСУНОК 2 .Оценка in vitro поглощения катионных липосом Cy5-BDNF-AT и BDNF AT и солевого раствора в клетках шванномы крысы RT4-D6P2T с использованием конфокальной микроскопии и анализа гибридизации AT. Конфокальные микроскопические изображения зависящего от времени поглощения контрольного носителя и Cy5-BDNF-AT при 300 нМ в клетках шванномы крысы RT4-D6P2T, демонстрирующие более быструю и надежную трансфекцию в липосомной (AT-LIPO) группе по сравнению с физиологическим раствором (AT-SALINE) ( бар = 500 мкм). Гистограммы представляют количественную оценку активного поглощения BDNF-AT по дозе, времени и составу в клеточной линии RT4-D6P2T относительно нормализованного по белку контроля (NEG представляет собой контроль-носитель).Обратите внимание на значительное дозозависимое увеличение эффективности захвата липосом по сравнению с группами физиологического раствора и отрицательного контроля (* p <0,05, ** p <0,01, *** p <0,001, **** p <0,0001; двусторонний дисперсионный анализ). Данные представлены как среднее ± стандартное отклонение ( n = 4–6).
РИСУНОК 3 . Оценка эффективности трансфекции in vitro катионных липосом BDNF AT и солевого раствора в клетках шванномы крысы RT4-D6P2T с использованием qPCR и BDNF-специфического ELISA.Гистограммы КПЦР (верхний ряд) и ELISA (нижний ряд), демонстрирующие транскрипцию и экспрессию белка BDNF в клетках шванномы крысы RT4-D6P2T после воздействия контроля носителя (NEG), липосом (AT-LIPO) и физиологического раствора (AT-SALINE) BDNF-AT демонстрирует как дозовую, так и зависящую от времени повышающую регуляцию между концентрациями 50 и 100 нМ (* p <0,05, ** p <0,01, *** p <0,001, **** p <0,0001; двусторонний дисперсионный анализ). Данные представлены как среднее значение ± стандартное отклонение ( n = 4 для анализа кПЦР и n = 6 для ELISA).
In vivo Трансмукозное распределение в гетеротопном трансплантате слизистой оболочки крысы МодельПосле умерщвления через 12 дней после начальной трансмукозной дозы Cy5-BDNF-AT в группе физиологического раствора продемонстрировал общую тенденцию к увеличению распределения в полушарии ипсилатерально по отношению к слизистой оболочке. трансплантат относительно контралатеральной стороны. Напротив, липосомная группа Cy5-BDNF-AT имела тенденцию к улучшенному распределению на контралатеральной стороне. Среди полосатого тела и области черного вещества липосомальная группа продемонстрировала значительно большее распределение, чем отрицательный и положительный контроль с обеих сторон.В пределах гиппокампа группа с физиологическим раствором имела значительно большее распределение, чем группа отрицательного контроля и липосомальная группа (рис. 4А).
РИСУНОК 4 . In vivo качественное и количественное поглощение через слизистые оболочки и эффективность BDNF AT (cy5-меченный и активный) в физиологическом растворе и катионных липосомальных препаратах. (A) Флуоресцентные микроскопические изображения липосомального (AT-LIPO) и физиологического (AT-SALINE) состава распределения Cy5-BDNF-AT на 12-й день после введения дозы (масштабная линейка = 500 мкм, демонстрирующая распределение Cy5 по бокам и концам мозга -целевой субрегион. (B) Столбчатые диаграммы количественного определения BDNF-AT с помощью анализа гибридизации в ипсилатеральных и контралатеральных концевых областях-мишенях в липосомальной (AT-LIPO) и физиологической (AT-SALINE) группах (****, p < 0,0001). (C) BDNF-AT дерепрессированная экспрессия белка побочной группой и группой носителя доставки в одних и тех же субрегионах-мишенях головного мозга крысы (* p <0,05, ** p <0,01, *** p <0,001; двусторонний дисперсионный анализ). Данные представлены как среднее ± стандартное отклонение ( n = 4).
Затем мы использовали гибридизационный анализ для количественной оценки распределения липосомных и физиологических композиций BDNF-AT в соответствующих конечных целевых областях мозга. BDNF-AT не обнаруживался в отрицательных контролях. В целом, было больше BDNF-AT в полушарии, ипсилатеральном по отношению к трансплантату слизистой оболочки, независимо от группы. Не было значительных различий в распределении между липосомальными и физиологическими препаратами BDNF-AT, за исключением ипсилатерального гиппокампа, где группа, получавшая физиологический раствор, превосходила липосомальную группу (рис. 4В).
In vivo Трансмукозальная эффективность в гетеротопном трансплантате слизистой оболочки крысы МодельЧтобы проверить функциональную эффективность BDNF-AT, мы затем количественно определили экспрессию белка BDNF в обеих группах относительно базовой экспрессии в контрольном мозге. Эти результаты продемонстрировали тенденцию к увеличению экспрессии во всех подобластях мозга, независимо от стороны или средства доставки, хотя не было сильной корреляции между уровнями BDNF AT и экспрессией. Черная субстанция продемонстрировала значительную активацию BDNF по сравнению с контролем с обеих сторон как липосомальных, так и солевых препаратов, в то время как кортикальные области продемонстрировали активацию только ипсилатерально.Хотя это и не является статистически значимым, полосатое тело релевантной области PD также продемонстрировало двустороннюю регуляцию уровня белка BDNF по сравнению с контрольной группой (рисунок 4C, см. Дополнительный рисунок S5).
In vivo Трансмукозальная эффективность на модели болезни Паркинсона с использованием 6-гидроксидофамина гетеротопного трансплантата слизистой оболочкиЧтобы определить терапевтическую эффективность липосомального BDNF -AT (AT-LIPO), мы затем исследовали тирозингидроксилазу (TH ) и экспрессия белка BDNF в полосатом теле и черной субстанции в установленной 6-OHDA модели БП у крыс (Rabie et al., 2018). Мы продемонстрировали, что инкапсулированные в липосомы BDNF AT (AT-LIPO) были связаны с сохранением экспрессии белков TH и BDNF, измеренных количественно с помощью вестерн-блоттинга и качественно с использованием методов иммуногистохимии (IHC) относительно контроля носителя. Эти результаты позволяют предположить, что АТ BDNF, доставленные с использованием липосом, обладают нейропротекторным эффектом при болезненном состоянии, вызванном 6-OHDA (фиг. 5).
РИСУНОК 5 . Терапевтическая эффективность AT-LIPO на модели повреждения 6-OHDA у крыс. (A) Репрезентативные изображения вестерн-блоттинга белков TH и BDNF в полосатом теле и черном веществе у крыс с моделью 6-OHDA PD по группам лечения. (B) Экспрессия TH и BDNF с помощью вестерн-блоттинга в полосатом теле крысы, демонстрирующая значительное сохранение экспрессии TH после обработки AT-LIPO (****, p <0,0001, односторонняя анова, значения нормированы на β-актин ) и незначительная тенденция к сохранению BDNF. (C) Экспрессия TH и BDNF с помощью вестерн-блоттинга внутри черной субстанции крысы, демонстрирующая значительное сохранение экспрессии TH и BDNF после обработки AT-LIPO (*, p <0.05, односторонняя анова, значения нормированы на β-актин) относительно контроля носителя. Данные представлены в виде среднего значения ± стандартное отклонение ( n = 6). D) Корональные флуоресцентные ИГХ-изображения окрашивания TH в модели повреждения 6-OHDA у крыс (ипсилатеральной до инъекции, столбик = 200 мкМ), демонстрирующие качественное сохранение иммунопозитивности TH как в полосатом теле, так и в черной субстанции после обработки AT-LIPO относительно контроля носителя и положительный контроль (POS-контроль представляет исходную экспрессию у неповрежденной крысы).
Обсуждение
BDNF был идентифицирован как ключевая мишень при БП, поскольку экспрессия белка BDNF и мРНК снижена у пациентов с БП (Mogi et al., 1999; Parain et al., 1999). Было показано, что лечение BDNF предотвращает потерю дофаминергических нейронов в черной субстанции после поражения, вызванного 6-гидроксидофамином или 1-метил-4-фенилпиридинием (MPP), у грызунов (Frim et al., 1994; Levivier et al. , 1995). Инфузия белка BDNF также продемонстрировала терапевтические анатомические и поведенческие эффекты на модели БП приматов с MPP за счет уменьшения потери дофаминергических клеток и усиления реиннервации полосатого тела (Tsukahara et al., 1995). Однако токсичность вне мишени, связанная с доставкой рекомбинантного нейротрофического фактора (Nutt et al., 2003) ограничили его клиническое применение.
Чтобы усилить экспрессию BDNF при одновременном преодолении ограничений доставки рекомбинантного белка BDNF, мы выбрали нацеливание на эндогенный регуляторный механизм, опосредованный локус-специфической некодирующей РНК BDNF из класса природных антисмысловых транскриптов (NAT). Мы показали, что ингибирование активности крысиного BDNF NAT с использованием соединений на основе олигонуклеотидов (AntagoNAT) приводит к усилению регуляции мРНК BDNF in vitro . Поскольку AntagoNAT активизируют эндогенный белок, устраняются проблемы контаминации белка хозяина, несоответствующих посттранскрипционных модификаций и субклеточной локализации, которые приводят к токсичности рекомбинантного белка.Химически AntagoNAT предназначены для исправления плохой стабильности биологических матриц и взаимодействия с иммунной системой, от которых страдали более ранние версии олигонуклеотидных препаратов. Кроме того, AntagoNAT предназначены для непосредственного поглощения клетками, тем самым устраняя потребность в вирусных или других носителях, которые часто являются токсичными и могут быть иммуногенными (Geary et al., 2015). Следовательно, использование BDNF-депрессирующих AntagoNAT имеет значительный терапевтический потенциал при БП (Mogi et al., 1999; Parain et al., 1999; Magistri et al., 2012; Modarresi et al., 2012; Wahlestedt, 2013; Halley et al., 2014).
Мы использовали катионную липосомную систему для улучшения доставки лекарств в мозг крысы и для защиты BDNF AT от нуклеаз. Липосомы — это небольшие искусственные сферы, состоящие из холестерина и фосфолипидов, которые могут инкапсулировать как гидрофильные, так и гидрофобные молекулы лекарства (Akbarzadeh et al., 2013). Несколько других систем доставки лекарств, включая опосредованную аптамерами доставку, экзосомы, проникающие в клетки пептиды, в настоящее время изучаются как потенциальные системы доставки лекарств в ЦНС (Bukari et al., 2020). Их преимущество заключается в использовании эндогенных транспортных механизмов на гематоэнцефалическом барьере для эффективной доставки лекарств в мозг (Bukari et al., 2020). Например, аптамеры представляют собой последовательности РНК или ДНК, которые обладают высокой целевой специфичностью и обладают улучшенными свойствами по сравнению с антителами. Благодаря своему небольшому размеру и высокой аффинности связывания они могут эффективно проникать в клетки, ткани и барьеры (например, BBB) (Ashrafuzzaman, 2014; Bukari et al., 2020). В настоящее время экзосомы также исследуются как потенциальные системы доставки лекарств из-за их небольшого размера (30–150 нм), низкой иммуногенности, стабильности, биосовместимости и эффективного поглощения клетками (Zheng et al., 2019). По сравнению с этими недавно исследованными системами доставки липосомы также обладают рядом преимуществ, таких как стабильность, повышенная эффективность, биоразлагаемость, биосовместимость, сниженная токсичность и длительное высвобождение лекарственного средства (Akbarzadeh et al., 2013). Мы использовали катионные липосомы для этого исследования, поскольку они могут эффективно инкапсулировать AT за счет отрицательного заряда.
В 2014 году Claes Wahlestedt et al. показали, что BDNF AntagoNAT были способны к значительному усилению мРНК BDNF зависимым от концентрации образом в линии клеток N2a мыши (Modarresi et al., 2012). Наше исследование подтвердило эту работу, определив эффективность трансфекции катионных липосом, инкапсулирующих BDNF AT в клетках шванномы крысы RT4-D6P2T, по сравнению с только BDNF AT в физиологическом растворе. Данные in vitro и подтвердили, что наши конструкции BDNF AntagoNAT, инкапсулированные в липосомы, способны индуцировать как транскрипцию, так и трансляцию BDNF в клетках шванномы крысы, экспрессирующих BDNF NAT, через 48 часов. Хотя BDNF AT в физиологическом растворе действительно продемонстрировал некоторую активацию мРНК BDNF и белка, наше исследование подтвердило, что липосомный состав был способен значительно повысить как трансфекцию, так и эффективность по сравнению с одним физиологическим носителем.
Продемонстрировав, что BDNF-AT могут успешно активировать BDNF in vitro , мы затем оценили их распределение in vivo и на неопытных крысах. До этого Wahlestedt et al. (Modarresi et al., 2012) использовали интрацеребровентрикулярную (ICV) доставку BDNF AT здоровым мышам C57BL6 и показали, что непрерывное введение BDNF AT в течение 28 дней приводит к значительному увеличению уровней мРНК BDNF и уровней белка у мышей. В нашем исследовании мы применили новую стратегию трансмукозальной доставки, ранее описанную нашей группой (Miyake and Bleier, 2015b), которая способна доставлять молекулы до 500 кДа непосредственно в мозг.В настоящее время этот метод используется хирургами для восстановления дефектов основания черепа после эндоскопического эндоназального удаления опухолей головного мозга. Методика включает интраназальную замену сегмента паутинной оболочки и твердой мозговой оболочки высокопроницаемой васкуляризованной слизистой оболочкой носа, которая затем может использоваться для доставки терапевтических агентов непосредственно в ЦНС (Bleier, 2012). Гетеротопическая трансплантация слизистой оболочки имеет ряд преимуществ перед инвазивными методами проникновения через ГЭБ, такими как интратекальная доставка. Во-первых, этот метод обеспечивает постоянный метод обхода ГЭБ с использованием только аутологичной ткани.Во-вторых, этот подход имеет долгую историю клинической безопасности, обеспечивая постоянный канал доставки лекарств без значительного риска инфекции, утечки спинномозговой жидкости или менингита (Bleier et al., 2012; Chaaban and Woodworth, 2013). В-третьих, эндоскопическая эндоназальная трансплантация слизистой оболочки широко выполняется с использованием существующих хирургических инструментов, которые почти повсеместно используются в современных операционных. Наконец, самые консервативные оценки предполагают, что метод трансплантации составляет менее половины стоимости методов доставки ЦНС на основе инвазивного катетера (Таблица гонораров врачей центров Medicare и Medicaid; Gill et al., 2003; Аль-Тамими и др., 2014).
Наша ранее проверенная модель грызунов (Bleier et al., 2013, Bleier et al., 2015) была разработана для имитации реконструкции трансплантата слизистой оболочки человека. Сначала мы подтвердили, что трансплантаты слизистой оболочки жизнеспособны и хорошо переносятся всеми крысами. Затем мы использовали комплементарное мечение Cy5 и анализы гибридизации для подтверждения успешной доставки AntagoNAT в критические области мозга крысы-мишени, имеющие отношение к PD. Наши данные ELISA BDNF затем подтвердили, что эта доставка была эффективной, приводя к активации белка BDNF во всех областях мозга.Однако после статистического анализа повышение уровня белка BDNF было статистически значимым только в области черного вещества и мозжечка головного мозга. Это было связано с вариабельностью измеренных уровней белка BDNF в других частях мозга (обонятельные луковицы, полосатое тело и гиппокамп). Кроме того, как черная субстанция, так и мозжечок продемонстрировали значительную двустороннюю регуляцию белка BDNF в группе AT-LIPO, тогда как это повышение уровней BDNF было односторонним для мозжечка в группе AT-SALINE.Это можно объяснить лучшим распределением AT, полученных с липосомальной группой, по сравнению с группой AT-SALINE. Хотя это и не является статистически значимым, липосомы BDNF AT действительно приводили к увеличению уровней белка BDNF во всех областях мозга по сравнению с группой отрицательного контроля и BDNF AT в группе контроля с физиологическим раствором. Поэтому мы решили использовать липосомы BDNF AT для исследований эффективности на модели болезни Паркинсона на крысах с 6-OHDA. Мы применили ту же технику доставки в 6-OHDA модели БП. Используя вестерн-блот-анализ, мы обнаружили, что BDNF AT, доставленные с использованием липосом (AT-LIPO), были способны сохранять экспрессию белка TH как в полосатом теле, так и в черной субстанции, что подтверждает его терапевтический нейрозащитный эффект.
Одно неожиданное открытие заключалось в том, что физиологический раствор превзошел липосомный препарат в области гиппокампа, ипсилатеральной по отношению к трансплантату слизистой оболочки. Это открытие может быть связано с различиями в ориентации и плотности трактов волокон в гиппокампе, которые способствовали диффузии физиологического раствора по сравнению с более плотным серым веществом в полосатом теле и черной субстанции. Вторым интересным результатом было отсутствие сильной корреляции между распределением BDNF-AT и последующей активацией белка BDNF.Это не совсем удивительно, поскольку AntagoNAT действуют только на снижение экспрессии и, таким образом, полагаются на внутренние регуляторные пути для обеспечения транскрипции и трансляции, которые, вероятно, различаются между субрегионами мозга (Modarresi et al., 2012; Rusk, 2012). Таким образом, это открытие служит подтверждением концепции, что AntagoNAT могут быть связаны с меньшей токсичностью, чем доставка рекомбинантного белка, поскольку они будут действовать только на клетки, запрограммированные на экспрессию интересующего белка.
Наши данные подтверждают, что AntagoNAT можно использовать для усиления экспрессии BDNF как in vitro, , так и in vivo в ключевых конечных областях-мишенях мозга, соответствующих PD.Мы также показали, что обычная эндоназальная эндоскопическая реконструкция основания черепа с пересадкой слизистой оболочки может быть использована для преодоления неспособности AntagoNAT пересекать BBB и что липосомная инкапсуляция увеличивает как распределение BDNF AntagoNAT, так и эффективность в головном мозге. Наконец, наши результаты демонстрируют, что инкапсулированные в липосомы АТ BDNF способны оказывать нейропротекторный эффект в модели 6-OHDA на крысах с БП. В более общем плане, учитывая легкость применения этих результатов в клинической практике, наша работа предполагает, что доставка олигонуклеотидов через слизистые оболочки может обеспечить новый и столь необходимый терапевтический вариант для пациентов, страдающих как БП, так и другими нейродегенеративными заболеваниями.
Заявление о доступности данных
Все данные, необходимые для оценки выводов в документе, представлены в документе и / или дополнительных материалах. Дополнительные данные доступны у авторов по запросу.
Заявление об этике
Исследование на животных было рассмотрено и одобрено Комитетом по уходу и использованию животных Северо-Восточного университета (номер протокола 180101-R).
Вклад авторов
Концепция и дизайн: GP, MA, WC и BB. Разработка и методология: GP, MA, OK, JH, CC, BB.Проведены эксперименты: GP, NP, AS, OK, JH, CC. Анализ и интерпретация данных: GP, MA, BB. Написание, рецензирование и / или редактирование рукописи: GP, MA, OK, JH, CC, WC, BB. Кураторство: MA, BB, OK, JH.
Финансирование
Исследование, представленное в этой публикации, было поддержано Национальным институтом неврологических расстройств и инсульта Национальных институтов здравоохранения под номером R01NS108968.
Заявление об ограничении ответственности
Авторы несут исключительную ответственность за содержание и не обязательно отражают официальную точку зрения Национальных институтов здравоохранения.
Конфликт интересов
CC, OK и JH были наняты OPKO Health Inc. BB владеет патентом Massachusetts Eye and Ear на методы трансмукозальной доставки в центральную нервную систему. BB имеет консультативные отношения с Inquis Medical, Olympus, Medtronic, Karl Storz, Sinopsys, Baxter и 3D Matrix и получает гонорары от Theime.
Остальные авторы заявляют, что исследование проводилось при отсутствии каких-либо коммерческих или финансовых отношений, которые могли бы быть истолкованы как потенциальный конфликт интересов.
Благодарности
Просвечивающая электронная микроскопия липосом была проведена г-ном Уильямом Фаул в Центре электронной микроскопии Северо-Восточного университета (Бостон, Массачусетс, США).
Дополнительные материалы
Дополнительные материалы к этой статье можно найти в Интернете по адресу: https://www.frontiersin.org/articles/10.3389/fphar.2021.660841/full#supplementary-material.
Источники
Акбарзаде А., Резаи-Садабады Р., Даваран С., Joo, S. W., Zarghami, N., Hanifehpour, Y., et al. (2013). Липосомы: классификация, приготовление и применение. Nanoscale Res. Lett. 8, 1–8. doi: 10.1186 / 1556-276X-8-102
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Al-Tamimi, Y. Z., Sinha, P., Chumas, P. D., Crimmins, D., Drake, J., Kestle, J., et al. (2014). Частота неудач вентрикулоперитонеального шунта в течение 30 дней: ретроспективное международное когортное исследование. Нейрохирургия . 74, 29–34. DOI: 10.1227 / NEU.0000000000000196
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Блейер, Б. С. (2012). Комплексные методы устранения утечек спинномозговой жидкости и реконструкции основания черепа. Адв. Оториноларингол . 74, 1–188. doi: 10.1159 / isbn.978-3-8055-9953-5
CrossRef Полный текст | Google Scholar
Блейер, Б. С., Дебнат, И., Харви, Р. Дж., И Шлоссер, Р. Дж. (2011). Временная пространственная количественная оценка меченного флуоресцеином синоназального ирригационного процесса. Внутр. Форум Ринология аллергии . 1, 361–365. doi: 10.1002 / alr.20041
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Блейер, Б.С., Кохман, Р.Э., Фельдман, Р.Э., Раманлал, С., и Хан, X. (2013). Проницаемость гематоэнцефалического барьера посредством приживления слизистой оболочки: последствия для доставки лекарств в мозг. PLoS Один . 8, e61694–7. doi: 10.1371 / journal.pone.0061694
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Bleier, B.С., Кохман, Р. Э., Герра, К., Ночера, А. Л., Раманлал, С., Кочарян, А. Х. и др. (2015). Гетеротопическая трансплантация слизистой оболочки обеспечивает доставку терапевтических нейропептидов через гематоэнцефалический барьер. Нейрохирургия . 78, 448. doi: 10.1227 / NEU.0000000000001016
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Bleier, B. S., Wang, E. W., Vandergrift, W. A., Schlosser, R.J., Vandergrift, W. A., and Schlosser, R.J. (2011). Частота мукоцеле после эндоскопической реконструкции основания черепа с использованием васкуляризированных лоскутов на ножке. Am J Rhinol Allergy. 25, 186–187. doi: 10.2500 / ajra.2011.25.3587
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Букари, Б., Самарасингхе, Р. М., Нойбанчонг, Дж., И Шигдар, С. Л. (2020). Неинвазивная доставка терапевтических средств в мозг: потенциал аптамеров для адресной доставки. Биомедицина . 8, 120. doi: 10.3390 / БИОМЕДИЦИНЫ8050120
PubMed Реферат | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Кассано, М., Фелипу, А.(2009). Эндоскопическое лечение утечек спинномозговой жидкости с использованием трансплантатов нижних турбинат: ретроспективный обзор 125 случаев. Ринология Дж. 47, 362–368. doi: 10.4193 / Rhin08.175
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
График оплаты врачей центров Medicare и Medicaid Services.
PubMed Abstract
Чирибога, К. А., Свобода, К. Дж., Даррас, Б. Т., Ианнакконе, С. Т., Монтес, Дж., Де Виво, Д. К. и др. (2016). Результаты исследования фазы 1 Нусинерсена (ISIS-SMNRx) у детей со спинальной мышечной атрофией. Неврология . 86, 890–897. doi: 10.1212 / WNL.0000000000002445
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Кроу, Т. П., Гринли, М. Х. У., Кантасами, А. Г., и Хсу, В. Х. (2018). Механизм интраназальной доставки лекарств непосредственно в мозг. Life Sci. 195, 44–52. doi: 10.1016 / j.lfs.2017.12.025
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Финкель, Р. С., Меркури, Э., Даррас, Б. Т., Коннолли, А. М., Кунц, Н.Л., Киршнер Дж. И др. (2017). Нусинерсен против фиктивного контроля при спинальной мышечной атрофии с младенческим началом. N. Engl. J. Med. 377, 1723–1732. doi: 10.1056 / NEJMoa1702752
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Фрим, Д. М., Улер, Т. А., Гальперн, В. Р., Бил, М. Ф., Брейкфилд, X. О., и Исаксон, О. (1994). Имплантированные фибробласты, генетически сконструированные для производства нейротрофического фактора мозга, предотвращают токсичность 1-метил-4-фенилпиридиния для дофаминергических нейронов у крыс. Proc. Natl. Акад. Sci. 91, 5104–5108. doi: 10.1073 / pnas.91.11.5104
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Гири, Р. С., Норрис, Д., Ю, Р. и Беннет, К. Ф. (2015). Фармакокинетика, биораспределение и клеточное поглощение антисмысловых олигонуклеотидов. Adv. Препарат Делив. Ред. 87, 46–51. doi: 10.1016 / j.addr.2015.01.008
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Гилл, С.С., Патель, Н.К., Хоттон, Г.Р., О’Салливан, К., Маккартер, Р., Баннадж, М., и др. (2003). Прямая инфузия в мозг нейротрофического фактора, полученного из глиальных клеток, при болезни Паркинсона. Nat. Med. 9, 589–595. DOI: 10,1038 / нм850
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Hadad, G., Bassagasteguy, L., Carrau, R.L., Mataza, J.C., Kassam, A., Snyderman, C.H., et al. (2006). Новая реконструктивная техника после эндоскопических расширенных эндоназальных доступов: нососептальный лоскут на сосудистой ножке. Ларингоскоп . 116, 1882–1886. doi: 10.1097 / 01.mlg.0000234933.37779.e4
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Галлей П., Кадаккужа Б. М., Фагихи М. А., Магистри М., Зейер З., Хоркова О. и др. (2014). Регуляция кластера генов аполипопротеинов длинной некодирующей РНК. Cel Rep. 6, 222–230. doi: 10.1016 / j.celrep.2013.12.015
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Харви, Р. Дж., Пармар П., Сакс Р. и Занатион А. М. (2012). Эндоскопическая реконструкция основания черепа при больших дефектах твердой мозговой оболочки: систематический обзор опубликованных данных. Ларингоскоп . 122, 452–459. doi: 10.1002 / lary.22475
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Hsiao, J., Yuan, T. Y., Tsai, M. S., Lu, C. Y., Lin, Y. C., Lee, M. L., et al. (2016). Повышающая регуляция гаплонедостаточной экспрессии генов в головном мозге путем нацеливания на длинную некодирующую РНК улучшает фенотип приступов в модели синдрома Драве. ЕБиоМедицина . 9, 257–277. doi: 10.1016 / j.ebiom.2016.05.011
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Исии, Ю., Тахара, С., Терамото, А., и Морита, А. (2014). Эндоскопическая эндоназальная хирургия основания черепа: преимущества, ограничения и наши методы преодоления утечки спинномозговой жидкости: Техническое примечание. Neurol. Med. Чир. (Токио) . 54, 983–990. doi: 10.2176 / nmc.st.2014-0081
PubMed Реферат | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Катаяма, С., Томару, Ю., Касукава, Т., Ваки, К., Наканиши, М., Накамура, М., и др. (2005). Антисмысловая транскрипция в транскриптоме млекопитающих. Наука . 309, 1564. doi: 10.1126 / science.1112009
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Кимпл, А. Дж., Лейт, В. Д., Велес, С. А., и Занэйшн, А. М. (2012). Снижение заболеваемости носом после реконструкции основания черепа с помощью нососептального лоскута: свободные трансплантаты слизистой оболочки со средними раковинами. Ларингоскоп .122, 1920–1924. doi: 10.1002 / lary.23325
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Левивье М., Прзедборски С., Бенчикс К. и Канг У. (1995). Интрастриатальная имплантация фибробластов, генетически сконструированных для производства нейротрофического фактора мозга, предотвращает дегенерацию дофаминергических нейронов в модели болезни Паркинсона у крыс. J. Neurosci. 15, 7810–7820. doi: 10.1523 / jneurosci.15-12-07810.1995
PubMed Реферат | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Liu, Q.-Р., Вальтер, Д., Дргон, Т., Полесская, О., Лесник, Т. Г., Штамм, К. Дж. И др. (2005). Гены нейротрофического фактора мозга человека (BDNF), паттерны сплайсинга и оценка ассоциаций со злоупотреблением психоактивными веществами и болезнью Паркинсона. Am. J. Med. Genet. 134B, 93–103. doi: 10.1002 / ajmg.b.30109
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Lu, C.-T., Zhao, Y.-Z., Wong, H. L., Cai, J., Peng, L., and Tian, X.-Q. (2014). Современные подходы к усилению доставки лекарств в ЦНС через мозговые барьеры. Int J Nanomedicine. 9, 2241–2257. doi: 10.2147 / IJN.S61288
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Magistri, M., Faghihi, M.A., St Laurent, G., and Wahlestedt, C. (2012). Регуляция структуры хроматина с помощью длинных некодирующих РНК: внимание к естественным антисмысловым транскриптам. Trends Genet. 28, 389–396. doi: 10.1016 / j.tig.2012.03.013
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Миллер, Т. М., Пестронк, А., Дэвид У., Ротштейн Дж., Симпсон Э., Аппель С. Х. и др. (2013). Антисмысловой олигонуклеотид против SOD1, вводимый интратекально пациентам с семейным боковым амиотрофическим склерозом SOD1: рандомизированное исследование фазы 1 с участием людей. Ланцет нейрол. 12, 435–442. doi: 10.1016 / S1474-4422 (13) 70061-9
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Мияке, М. М., и Блейер, Б. С. (2015a). Обход барьера Блад-Брайана с использованием общепринятых методов реконструкции основания черепа. World J Otorhinolaryngol Head Neck Surg. 1, 11–16. doi: 10.1016 / j.wjorl.2015.09.001
CrossRef Полный текст | Google Scholar
Мияке, М. М., и Блейер, Б. С. (2015b). Гематоэнцефалический барьер и назальная доставка лекарств в центральную нервную систему. Am J Rhinol Allergy. 29, 124–127. doi: 10.2500 / ajra.2015.29.4149
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Модаррези, Ф., Фагихи, М. А., Лопес-Толедано, М. А., Фатеми, Р.П., Фатеми, М., Братья, С. П. и др. (2012). Ингибирование естественных антисмысловых транскриптов in vivo приводит к ген-специфической активации транскрипции. Nat. Biotechnol. 30, 453–459. doi: 10.1038 / nbt.2158
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Mogi, M., Togari, A., Kondo, T., Mizuno, Y., Komure, O., Kuno, S., et al. (1999). Концентрация мозгового фактора роста и фактора роста нервов снижается в черной субстанции при болезни Паркинсона. Neurosci. Lett. 270, 45–48. DOI: 10.1016 / S0304-3940 (99) 00463-2
PubMed Реферат | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Mowla, S.J., Farhadi, H.F., Pareek, S., Atwal, J.K., Morris, S.J., Seidah, N.G., et al. (2001). Биосинтез и посттрансляционный процессинг предшественника нейротрофического фактора мозга. J. Biol. Chem. 276, 12660–12666. doi: 10.1074 / jbc.m008104200
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Nutt, J.G., Burchiel, K.J., Comella, C.L., Jankovic, J., Lang, A.E., Laws, E.R., et al. (2003). Рандомизированное двойное слепое испытание нейротрофического фактора, полученного из линии глиальных клеток (GDNF), при БП. Неврология . 60, 69–73. doi: 10.1212 / wnl.60.1.69
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Ochs, G., Penn, R.D., York, M., Giess, R., Beck, M., Tonn, J., et al. (2000). Фаза I / II испытание рекомбинантного метионилового нейротрофического фактора, производного от головного мозга человека, вводимого путем интратекальной инфузии пациентам с боковым амиотрофическим склерозом. Амиотроф. Боковой склер. Другие нарушения моторных нейронов. 1, 201. doi: 10.1080 / 14660820050515197
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Пандиан, Дж. Д., Сарада, К., Радхакришнан, В. В., и Кишор, А. (2004). Ятрогенный менингит после люмбальной пункции — предотвратимая опасность для здоровья. J. Hosp. Заразить. 56, 119–124. doi: 10.1016 / j.jhin.2003.09.023
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Parain, K., Murer, M.G., Yan, Q., Faucheux, B., Agid, Y., Hirsch, E., et al. (1999). Сниженная экспрессия белка нейротрофического фактора мозга при болезни Паркинсона Черная субстанция. Нейроотчет . 10, 557–561. DOI: 10.1097 / 00001756-1990-00021
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Pathan, S., Iqbal, Z., Zaidi, S., Talegaonkar, S., Vohra, D., Jain, G., et al. (2009). Системы доставки лекарств для ЦНС: новые подходы. Недавняя версия Pat Drug Deliv Formul. 3, 71–89.doi: 10.2174 / 187221109787158355
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Павар Г. Н., Параят Н. Н., Ночера А. Л., Блейер Б. С. и Амиджи М. М. (2018). Прямая доставка белков в ЦНС с использованием термочувствительного липосомного-гелевого носителя путем гетеротопного приживления слизистой оболочки. PLoS Один . 13, e0208122–15. doi: 10.1371 / journal.pone.0208122
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Пруунсильд, П., Казанцева, А., Эйд, Т., Палм, К., и Тиммуск, Т. (2007). Рассечение локуса BDNF человека: двунаправленная транскрипция, сложный сплайсинг и множественные промоторы. Геномика . 90, 397–406. doi: 10.1016 / j.ygeno.2007.05.004
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Раби, М. А., Абд Эль Фаттах, М. А., Нассар, Н. Н., Эль-Абхар, Х. С. и Абдаллах, Д. М. (2018). Ангиотензин 1-7 улучшает поражение 6-гидроксидофамина у крыс с гемипаркинсонической болезнью за счет активации MAS рецептора / пути PI3K / Akt / BDNF и ингибирования рецептора ангиотензина II типа 1 / оси NF-b. Biochem. Pharmacol. 151, 126–134. doi: 10.1016 / j.bcp.2018.01.047
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Тиммуск, Г. А., Чен, Г., Древец, В. К., и Хентер, И. Д. (2012). «Расстройства настроения», в Трансляционная неврология: применение в психиатрии, неврологии и нарушениях развития нервной системы . Кембридж, Великобритания: Cambridge University Press
Google Scholar
Tsukahara, T., Takeda, M., Shimohama, S., Ohara, O., и Хашимото, Н. (1995). Влияние нейротрофического фактора мозга на индуцированный 1-метил-4-фенил-1,2,3,6-тетрагидропиридином паркинсонизм у обезьян. Нейрохирургия . 37, 733–741. DOI: 10.1227 / 00006123-199510000-0001810.1097 / 00006123-199510000-00018
PubMed Реферат | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Ventriglia, M., Zanardini, R., Bonomini, C., Zanetti, O., Volpe, D., Pasqualetti, P., et al. (2013). Уровни нейротрофических факторов головного мозга в сыворотке крови при различных неврологических заболеваниях. Biomed. Res. Int. 2013, 1. doi: 10.1155 / 2013/2
CrossRef Полный текст | Google Scholar
Уайт, Д. Р., Дубин, М. Г., и Сеньор, Б. А. (2003). Эндоскопическое восстановление утечки спинномозговой жидкости после нейрохирургических процедур. Am. J. Otolaryngol. 24, 213–216. DOI: 10.1016 / s0196-0709 (03) 00031-0
PubMed Реферат | CrossRef Полный текст | Google Scholar
ВОЗ, (2006). Неврологические расстройства . Женева, Швейцария: ВОЗ, 26–39.DOI: 10.4135 / 9781412956208.n162
CrossRef Полный текст
Чжэн, М., Хуан, М., Чен, Х. и Гао, X. (2019). Использование экзосом для разработки систем доставки лекарств в мозг. Биоконъюг Химия . 30, 994-1005. doi: 10.1021 / acs.bioconjchem.9b00085
PubMed Реферат | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Результаты использования электростимуляции в нейропротекторной терапии глаукомной оптической нейропатии
Глаукома — хроническая прогрессирующая оптическая нейропатия с характерными морфологическими изменениями в головке зрительного нерва и прогрессирующей гибелью ганглиозных волокон сетчатки с сужением поля зрения.Эффективное снижение ВГД не может служить гарантией стабилизации глаукомного процесса, который у части больных продолжает прогрессировать. Таким образом, необходим поиск нового направления лекарственной терапии, поскольку гипотензивная терапия не является полностью эффективной. Наиболее перспективным из них является нейропротекция в сочетании с чрескожной электростимуляцией, которая защищает нейроны сетчатки и нервные волокна зрительного нерва от различных факторов повреждения.
Цель. Оценить эффективность чрескожной электростимуляции в комплексном нейропротекторном лечении глаукомной оптической нейропатии
Материалы исследования. Исследование основано на результатах 50 (90 глаз) пациентов, обследованных с ГОН в состоянии с компенсированным ВГД, в возрасте от 18 до 55 лет. Компенсация ВГД достигалась лекарственным, лазерным и хирургическим способами. Все пациенты были разделены на две однородные группы в зависимости от стадии первичной открытоугольной глаукомы и возраста пациентов.В контрольной группе 25 (44) глаза получали традиционную терапию в течение 10 дней, в схему которой был включен препарат «Ретиниламин». В основной группе 25 (46 глаз) пациентам наряду с традиционной терапией проводился эндоназальный электрофорез с препаратом «Танакан» 1 раз в сутки и чрескожная электростимуляция с помощью аппарата ЭСОМ, основанного на использовании прямоугольного отрицательного импульса длительностью 1- 10 мс, с частотой 5-30 Гц и амплитудой 10-1000 мкА в течение 10 дней.На каждое глазное яблоко проводили 4-6 серий по 15-45 с и интервалом 30-60 с.
Результаты. Клинико-функциональная оценка комплексного лечения глаукомной нейропатии зрительного нерва с введением препарата «Танакан» методом эндоназального электрофореза в сочетании с чрескожной электростимуляцией по данным ОКТ и компьютерного периметра демонстрирует достоверное улучшение среднего поля зрения и индекса компьютерного периметра, таких как МД и ПД, а также показатели улучшения оптической когерентной томографии, особенно СНВС по сравнению с исходными, подтверждают эффективность предлагаемой терапии.
Заключение По нашим результатам, включение эндоназального электрофореза с танаканом после чрескожной электростимуляции в комплексное лечение глаукомной оптической нейропатии защищает сетчатку от пагубного воздействия ВГД, способствует продлению основного лечения. и восстановление зрительной функции глаза. Данный метод в сочетании с чрескожной электростимуляцией обладает достаточным комфортом, экономичностью, быстрым и стабильным положительным эффектом и может применяться как в стационарных, так и в амбулаторных условиях
Клиническая и функциональная эффективность эндоназального электрофореза в сочетании с электростимуляцией в комплексной терапии глаукомной оптической невропатии
Опубликовано 2021-03-17
Ключевые слова
- Глаукома оптическая нейропатия,
- ретинопротекция,
- эндоназальный электрофорез,
- электростимуляция
Как цитировать
Темур Саидов, Нодира Янгиева, Фирдавс Хамидуллаев, Жанна Назарова и Охун Низомов.(2021 г.). Клиническая и функциональная эффективность эндоназального электрофореза в сочетании с электростимуляцией в комплексной терапии глаукомной оптической невропатии. Американский журнал медицинских наук и фармацевтических исследований , 3 (03), 12–19. https://doi.org/10.37547/TAJMSPR/Volume03Issue03-02
Абстрактные
Целью исследования являлась клинико-функциональная оценка комплексного лечения глаукомной оптической нейропатии с применением препарата танакан в виде эндоназального электрофореза в сочетании с электростимуляцией по данным IST и ультразвукового допплеровского картирования.Обследовано 43 (74 глаза) пациента с ГОН в возрасте от 58 до 76 лет. Результаты исследования показали, что данный метод эффективно задерживает развитие атрофии зрительного нерва и, наряду с улучшением зрительных функций, удлиняет положительный эффект от основного лечения, что подтверждено значительным улучшением показателей гемодинамики по данным УЗИ. Допплеровское исследование.
использованная литература
- Либман Э.С., Калеева Е.В. Состояние и динамика инвалидности вследствие нарушения зрения в России, Съезд офтальмологов России, 9-й: тезисы. Отчет Москва :, 2010.
- Фламмер Д. Глаукома // Глаукома. World Wide Printing, 2003, — P.345 .
- Курышева Н.И. Глаукомная оптическая нейропатия, — М .: МЕД пресс-информ, 2006. — С.136.
- Алексеев В.Н., Козлова Н.В. Применение ретиналамина у больных первичной открытоугольной глаукомой // Глаукома.2013. №1, С. 49-52.
- Нероев В.В., Еричев В.П., Ловпаче Д.Н.Пептиды в нейропротекторной терапии больных первичной открытоугольной глаукомой с нормальным офтальмотонусом // Ретиналамин. Нейропротекция в офтальмологии, 2012. №6. С.37.
- Басинский С.П., Басинский А.С. Эффективность комплексной терапии больных первичной нестабилизированной открытоугольной глаукомой с «нормализованным» офтальмотонусом // Клиническая офтальмология. — 2015. — Ташкент: 6, №2.- С.62-64
- Захаров В.В., Яхно Н.Н. Применение Танакана при нарушении мозгового и периферического кровообращения // Рус. Медик, журнал. — 2011. — Ташкент: .9 — С.6–8.
- Эффективность чрескожной электростимуляции в лечении пациентов с первичной открытоугольной глаукомой / Т.Г. Каменских, Е.В. Веселова, Ю.А. Дубина // Современные технологии XXI века: Сб. научный тр. — Саратов, 2009. — С. 53-54.
- Эффективность чрескожной электростимуляции в лечении пациентов с первичной открытоугольной глаукомой / Т.Каменских Г. Веселова, Ю.А. Дубина // Российский национальный форум. Суббота. научный тр. — Москва :, 2008. — С. 487-489 .
- Чоплин Н.Т., Ланди Д.С. Атлас глаукомы, второе издание. 2007.
- Доши В., Ин Л.М., Азен С.П., Варма Р. Социально-демографические, семейный анамнез и факторы риска развития открытоугольной глаукомы и глазной гипертензии. Офтальмология, 2008; 115 (1): 639–647
- Хара Ю., Торлу Н. Клинический потенциал ламерзина, блокатора Са 2+ -канала, в качестве лекарственного средства против глаукомы: влияние на кровообращение глаза и повреждение нейронов сетчатки // Обзоры сердечно-сосудистых препаратов.- 2014. — Т. 22. — С. 199-214.
- Lugasi A. Дополнительная информация об антиоксидантной активности гинкго билоба in vitro // L. hytother Res. — Т. 13. — С. 160-162.
- Quaranta L., Betelli S., Uva M. Влияние экстракта гинкго билоба на существовавшие ранее повреждения поля зрения при глаукоме нормального напряжения // Офтальмология. — 2013. — Т. 110. — P.359-362
- Брайан Чуа, Иван Гольдберг. Нейропротективные средства в терапии глаукомы: последние разработки и будущие направления // Rev.Офтальмол.- 2016.-т.5 (5) .- с.627-636.
- Назарова, Дж. (2021). Нарушения дыхания во время сна при хронической обструктивной болезни легких. Международный журнал медицинской науки и клинических исследований, 1 (1), 18-23.
- Назарова, Дж. (2021). Особенности когнитивного статуса у больных с венозной церебральной дисфункцией на фоне хронической ишемии головного мозга. Анналы румынского общества клеточной биологии, 4553-4557.
- Назарова, Ю.(2021 г.). Оценка клинического и нейрофизиологического состояния когнитивных функций при эпилепсии на фоне антипотребительской терапии. Международный журнал медицинской науки и клинических исследований, 1 (1), 01-04.
- Назарова, Дж. (2021). Особенности когнитивных расстройств при эпилепсии у взрослых. Международный журнал медицинской науки и клинических исследований, 1 (1), 09-13.
Офтальмологи всесторонне рассмотрели новые методы лечения заболеваний сетчатки на XVII Международном офтальмологическом конгрессе «Белые ночи»
6 июня 2011
В конце мая — начале июня Международный Конгресс
офтальмологии «Белые ночи», за долгую историю
статус важнейшего офтальмологического события Санкт-Петербурга.Петербург. Конгресс ежегодно привлекает к себе большое внимание
медицинское сообщество, и становится площадкой для обсуждения самых
актуальные вопросы офтальмологии.
Более 1600 российских и зарубежных врачей, специалистов и
представители фармацевтической отрасли приняли участие в Конгрессе
этот год. Подготовлена комплексная академическая и исследовательская программа.
для специалистов. Программа была посвящена последним достижениям.
офтальмологии, современные методы диагностики и лечения
офтальмологические заболевания.Традиционно выставка продукции
производства ведущих российских и зарубежных фармацевтических компаний
был предложен участникам.
Теоретико-практический симпозиум «Инновации в лечении.
заболеваний сетчатки », организованной ГЕРОФАРМ, под председательством профессора
Владимир Владимирович Нероев, главный невролог Минздрава России.
Здравоохранение и социальное развитие Российской Федерации, заслуженный врач.
РФ и директор Московского научно-исследовательского института им. Гельмгольца.
Ольга Ивановна Сарыгина, главный научный сотрудник, зав. Сетчаткой
Отделение патологии и зрительного нерва Московского научного центра им. Гельмгольца
Институт представил результаты исследований терапевтического
эффективность и безопасность Ретиналамина при лечении близорукости. Это было
продемонстрировали, что Ретиналамин обеспечивает лучшую остроту зрения, улучшает
функциональная активность нейронов внутреннего ядерного слоя
периферический и центральный отделы сетчатки, а также активность
фоторецепторы макулярной области.Помимо вышеперечисленного, препарат
помогает повысить светочувствительность сетчатки и уменьшить средний дефект
уровень центральной пороговой светочувствительности. Нет аллергических реакций
и нежелательных явлений у пациентов в больнице не зарегистрировано.
курс приема препарата.
Наталья Владимировна Морозова, к.м.н., зам.
Главный врач по клинической работе Санкт-Петербургского городского диагностического центра
№ 8, сообщил о клинической эффективности ретиналамина для
пролиферативная диабетическая ретинопатия после лазерного лечения
пациенты.В ходе исследования вводили Ретиналамин.
с помощью удобного, высокоэффективного и малоинвазивного метода
эндоназальный электрофорез. Работа продолжает серию исследований Св.
Петербургские авторы под руководством профессора Юрия Сергеевича
Астахов, доктор медицинских наук, главный офтальмолог СПбГУ.
Петербург.
Сайдашева Эльвира Ирековна, профессор, заведующая кафедрой младенчества
Офтальмология Св.Петербургская академия последипломного образования,
сообщили об актуальности офтальмо-нейропротекции у младенцев.
лечения и представили данные, подтверждающие эффективность ретиналамина в
ретинопатия среди младенцев с низкой массой тела при рождении и кортексин, используемый для
лечение атрофии зрительного нерва различного генеза.
Заключение доктора медицинских наук Венеры Узбековны Галимовой.
Наук, профессор кафедры офтальмопластической хирургии
Башкирский медицинский университет (г. Уфа), заместитель директора ФГУ
(Федеральное государственное учреждение) Всероссийский центр офтальмологии и пластики
Хирургия Росздрава завершила симпозиум.В ее отчете
Профессор проинформировал участников об эффективности
комплексный подход к терапии пигментной ретинопатии с
использование ретиналамина и кортексина между этапами хирургического лечения.
Теоретическая и практическая программа Конгресса вызвала большой резонанс. интерес для всех участников. Специалисты ознакомились с данные самых прогрессивных исследований в области офтальмологии на тематических лекциях и семинарах.
Какова роль тестирования бета2-трансферрина в исследовании ринореи спинномозговой жидкости (CSF)?
Автор
Кевин С. Уэлч, доктор медицины Доцент кафедры отоларингологии — хирургия головы и шеи, Северо-Западный университет, Медицинская школа им. Файнберга
Кевин С. Велч, доктор медицины, является членом следующих медицинских обществ: Американская академия отоларингологии — руководитель и хирургия шеи, Американское ринологическое общество
Раскрытие информации: нечего раскрывать.
Специальная редакционная коллегия
Франсиско Талавера, фармацевт, доктор философии Адъюнкт-профессор, Фармацевтический колледж Медицинского центра Университета Небраски; Главный редактор Medscape Drug Reference
Раскрытие информации: Получил зарплату от Medscape за работу. для: Medscape.
Стивен Дж. Батуэлло, доктор медицины Консультант, Колорадо ЛОР-специалисты
Стивен Дж. Батуэлло, доктор медицины, является членом следующих медицинских обществ: Американская академия отоларингологии — хирургия головы и шеи, Американская ассоциация руководителей врачей, Американская медицинская ассоциация, Медицинское общество Колорадо
Раскрытие информации: не подлежит разглашению.
Главный редактор
Арлен Д. Мейерс, доктор медицины, магистр делового администрирования Профессор отоларингологии, стоматологии и инженерии, Медицинский факультет Университета Колорадо
Арлен Д. Мейерс, доктор медицины, магистр делового администрирования является членом следующих медицинских обществ: Американской академии пластической и реконструктивной лицевой хирургии. Хирургия, Американская академия отоларингологии — Хирургия головы и шеи, Американское общество головы и шеи
Раскрытие информации: Служить (d) в качестве директора, должностного лица, партнера, сотрудника, советника, консультанта или попечителя для: Cerescan; RxRevu; Cliexa; врачей Edge; Sync-n-Scale; mCharts
Полученный доход в размере не менее 250 долларов США от: The Physician Edge, Cliexa; Proforma; Neosoma
Полученный доход от RxRevu; Получена доля владения от Cerescan за консультацию; .
Дополнительные участники
Лэнни Гарт Клоуз, доктор медицины Заведующий кафедрой отоларингологии — хирургия головы и шеи, Колледж врачей и хирургов Колумбийского университета
Лэнни Гарт Клоуз, доктор медицины, является членом следующих медицинских обществ: Alpha Omega Alpha, American Head и Общества шеи, Американская академия лицевой пластической и реконструктивной хирургии, Американская академия отоларингологии — хирургия головы и шеи, Американский колледж врачей, Американская ларингологическая ассоциация, Нью-Йоркская медицинская академия
Раскрытие: Ничего не разглашать.
Джеймс Станкевич, доктор медицины Профессор, председатель, программный директор, отделение отоларингологии — хирургия головы и шеи, Чикагская медицинская школа университета Лойола
Джеймс Станкевич, доктор медицины, является членом следующих медицинских обществ: Американский колледж хирургов
Раскрытие: нечего раскрывать.
Надиеска Кабальеро, доктор медицины Научный сотрудник по ринологии и хирургии основания черепа, Институт носовых пазух и носа Флориды
Надиеска Кабальеро, доктор медицины, является членом следующих медицинских обществ: Alpha Omega Alpha, Американская академия отоларингологии — хирургия головы и шеи, Американская медицинская ассоциация, Американское ринологическое общество
Раскрытие: Ничего не разглашать.
Благодарности
Джозеф М. Шианна, доктор медицины Соруководитель отдела заболеваний носовых пазух и сна, доцент кафедры отоларингологии — хирургии головы и шеи, Медицинский центр Университета Лойола Джозеф М. Шианна является членом следующих медицинских обществ: Американской академии лицевой пластики и Реконструктивная хирургия, Американская академия отоларингологии — хирургия головы и шеи и Американское ринологическое общество
Раскрытие: Ничего не нужно раскрывать.
Шринивас Муккамала, доктор медицины Старший врач отделения отоларингологии — хирургии головы и шеи, Медицинский центр Чикагского университета Лойола
Раскрытие: Ничего не нужно раскрывать.
научных публикаций — Магазин пептидов
Для публикаций в PubMed перейдите по ссылке .
Уникальный метод восстановления функций сетчатки глаза при различных заболеваниях
Впервые в мировой медицинской практике разработан уникальный метод восстановления поврежденной сетчатки при различных заболеваниях (таких как диабетическая ретинопатия, врожденные и приобретенные дегенерации, осложненная миопия, макулопатии, хориоретиниты, ожоги).Метод основан на применении комплекса биорегуляторов, выделенных из сетчатки, сосудов, шишковидной железы, вилочковой железы или их синтетических аналогов. Эффективность этого комплексного лечения составляет 95%, что является беспрецедентным достижением в области офтальмологии. Широкое применение биорегуляторов будет способствовать увеличению периода работоспособности, снижению инвалидности, повышению качества жизни пациентов. Все это может положительно повлиять на социально-экономические аспекты эффективности системы медицинской помощи в России.
Молекулярно-физиологические аспекты пептидной регуляции функции сетчатки при пигментном ретините
Пептидные биорегуляторы способствуют восстановлению физиологической активности сетчатки при пигментном ретините у пожилых людей и в моделях на животных. Молекулярный механизм физиологической активности пептидов связан с их способностью эпигенетически регулировать синтез белковых маркеров дифференцировки нейронов сетчатки и пигментного эпителия.
Результаты применения ретиналамина в лечении заболеваний сетчатки (гугл переводчик)
Результаты: После комплексного лечения с применением Ретиналамина во всех случаях отмечен положительный клинический результат (улучшение остроты зрения, состояния периферического поля). Эффект от лечения Ретиналамином стал очевиден через 1 месяц после лечения и еще более заметен после второго курса. Клинический эффект стабильный в течение полугода.
Биохимические параметры эффективной оценки нейропротекторного лечения диабетической ретинопатии (гугл переводчик)
Цель исследования — оценить эффективность пептидных биорегуляторов у пациентов с диабетической ретинопатией (ДР) после лазерной коагуляции.Обследовано 80 пациентов (139 глаз) с препролиферативной и пролиферативной стадиями ДР с ишемической диабетической макулопатией, с частичным отслоением задней гиалоидной мембраны. Возраст пациентов составлял от 40 до 70 лет (в среднем 59 ± 3 года). У всех больных диагностирован компенсированный сахарный диабет II типа средней степени тяжести с длительностью заболевания 10-15 лет. Клиническое наблюдение за пациентами до и после лечения включало анамнез, биохимию крови слезной жидкости, стандартное офтальмологическое обследование, осмотр глазного дна с помощью линзы Гольдмана.Всем пациентам (2-3 группы) в амбулаторных условиях выполнялась лазерная коагуляция. Операции выполняли на лазерном аргоновом офтальмокоагуляторе «NOVUS 2000 Coherent Radiation» (США) с длиной волны 154 нм. Пациенты третьей группы (n = 30) после лазерной коагуляции дополнительно к традиционной терапии получали пептидный биорегулятор (Ретиналамин — Компания Герофарм, Россия) по 2,5 мг парабульбарно в течение 10 дней. Остальные 20 пациентов (1 группа) получали только традиционное лечение.
Терапевтический эффект и безопасность препарата Ретиналамин при лечении близорукости.Результаты клинического исследования (гугл переводчик)
В статье представлены результаты клинического исследования терапевтического эффекта и безопасности препарата Ретиналамин® при лечении осложненной миопии. Препарат вводили перибульбарно в течение 10 дней. Показан значительный клинический эффект препарата для поддерживающей терапии миопии средней и высокой степени. Было показано, что ретиналамин положительно влияет на остроту зрения и качество зрения у пациентов с миопией.Препарат хорошо переносился пациентами и не вызывал общих или местных аллергических реакций. Отмечено статистически значимое положительное изменение основных параметров светочувствительности поля зрения. Данные электрофизиологических исследований выявили положительное влияние ретиналамина на функциональную активность сетчатки, особенно в ее центральных отделах. Достигнутый эффект был стабильным на протяжении всего периода наблюдения (до 3 месяцев после курса лечения).
Обладает ли ретиналамин катарактостатической активностью?
Исследование показало, что комбинированная терапия, включая ретиналамин, 57 пациентов с поствоспалительной хориоретинальной дегенерацией также замедляла прогрессирование осложненной катаракты.Это снизило потерю зрения в течение первого года после лечения в 97,8% случаев, в течение двух лет в 95,6% случаев, в течение трех лет в 66,7% случаев, в течение четырех лет в 53,3% случаев. случаи.
Эффективность лечения возрастной дегенерации желтого пятна в сухой форме эндоназальным электрофорезом «Ретиналамин»
При сухой форме возрастной дегенерации желтого пятна показана возможность лечения ретиналамином в виде эндоназального электрофореза. Подчеркнуты преимущества этого метода: неинвазивность, отсутствие болевых ощущений, аллергических реакций, комфорт пациента.Результаты лечения изучены объективными и субъективными методами. Сравнивали две группы пациентов: 1 группа с субконъюнктивальными инъекциями, 2 группа с эндоназальным электрофорезом. В обеих группах есть положительные результаты.
Офтальмонейропротекция при непролиферативной диабетической ретинопатии и гемодинамике глаза
Результаты и заключение: В первую (основную) группу вошли 30 пациентов (60 глаз), в этой группе назначено комплексное лечение ретиналамином.Вторую (контрольную) группу составили 30 пациентов (60 глаз), в этой группе пациенты получали эмоксипин. Прием ретиналамина способствовал улучшению основных зрительных функций, электрофизиологических и гемодинамических показателей (снижение показателей линейной скорости и индекса сопротивления).
Применение ретиналамина у пациентов с первичной открытоугольной глаукомой
Результаты: после введения Ретиналамина клинически значимые результаты отмечены через 3, 6, 12 месяцев (расширение границ поля зрения, повышение остроты зрения, стабилизация процесса по данным офтальмоскопии, увеличение средней толщины нервных волокон сетчатки).В конце периода наблюдения у большинства пациентов контрольной группы наблюдали прогрессирование ПОУГ.
Коррекция уровня цитокинов слезы при макулярной дегенерации у пациентов молодого возраста
Заключение: Ретиналамин можно рекомендовать как эффективный и безопасный препарат для комплексного лечения начальных изменений желтого пятна.
Нейропротекторная терапия первичной хронической ишемической нейрооптикопатии у пожилых пациентов
Заключение. Введение ретиналамина приводит к улучшению перфузии зрительного нерва, реактивности ВСА и электрофизиологических параметров в течение трех месяцев исследования.
Оптимизация лечения сухой формы возрастной дегенерации желтого пятна с помощью эндоназального электрофореза препарата «Ретиналамин»
Резюме. Показана возможность введения «Ретиналамина» методом эндоназального электрофореза в сухой форме ВМД. Обсуждаются несколько преимуществ этого метода введения: неинвазивность, отсутствие боли, аллергических реакций, комфортность. Результаты лечения изучались объективным и субъективным методами.Сравнивали 4 группы пациентов: 1-я группа — субконъюнктивальные инъекции, 2-я группа — эндоназальный электрофорез, 3-я группа (плацебо) — физиотерапия (без электрического тока), 4-я группа — гальванизация. В 1-й и 2-й группах отмечены положительные результаты. В 3-й группе — данные не изменились. В 4-й группе — небольшая положительная динамика, через 1 месяц результаты вернулись к исходным.
Опыт применения Ретиналамина при глаукомной оптической нейропетике и возрастной дегенерации желтого пятна (перевод Google)
Резюме.С 2005 года оценка возможного нейропротекторного действия цитомедина Ретиналамина проводилась с использованием объективных методов исследования у пациентов с первичной открытоугольной глаукомой 1 и 2 стадии, а также у пациентов с сухой AMD, которые являются изнурительными офтальмологическими состояниями.
Особенности офтальмонейропротекции у больных открытоугольной глаукомой в сочетании с диабетической ретинопатией
Результаты: Была протестирована комбинация различных лечебных тактик лазерного и консервативного лечения.Результат был разработан для оптимального баланса, улучшая производительность и уменьшая глазные побочные эффекты. Ретиналамин 5мг, парабульбаре №10, Танакан по 1 таблетке 3 раза в день — 3 мес. Оптимальные сроки повторного лечения (не реже 1 раза в 9 месяцев), в случае значительного прогрессирования глаукомной оптической нейропатии — сроки решаются индивидуально.
Индуктивная активность пептидов сетчатки
Мы изучали действие полипептида сетчатки Ретиналамин на мультипотентные эктодермальные клетки ранней гаструлы Xenopus laevis.Нейрональная дифференцировка эктодермы ранней гаструлы, включая мозг, сетчатку и пигментный эпителий, зависела от концентрации ретиналамина.
.