Клебсиелла у грудничка лечение бактериофагом: Бактериофаг клебсиелл поливалентный очищенный

В мире появилась «кошмарная» супербактерия, борьбу с которой уже обсуждают в ООН

Микроорганизмы, которые представляют угрозу для всего человечества! Так медики в разных странах сейчас говорят о супербактерии, которую врачи еще называют «кошмарной» за свойство противостоять любым антибиотикам. Проблему всерьез обсуждают уже в Организации Объединенных Наций после того, как недавно в США выявили новый опасный штамм. Он стал причиной смерти пожилой американки. Как противостоять супербактерии ученые пока не придумали, но зато найдет ответ на вопрос откуда она взялась.

История начиналась как триллер. Об эпидемии, способной убить человечество. Загадочная пряная Индия. Туристка из США. Смерть по прилету домой. И бактерия. Нет, не таинственная. Давно известная «клебсиелла пневмония». Но, этот штамм оказался неуязвимым.

«Обычная инфекция, которая, в принципе, есть в кишечнике. У нее это стало патогенным. И ни один известный антибиотик, из всех двадцати шести, которые применяются в Соединенных Штатах, не могли помочь», — рассказал специальный представитель ВОЗ в Российской Федерации Гайк Никогосян.

Супербактерию ученые ждали давно. По сути, человек создал ее сам, принимая антибиотики. Не те и не так, как надо. Обычная поликлиника в Ульяновске. Первый попавшийся пациент. «У меня были сопли», — поясняет ребенок. Температура, кашель. Когда дочь заболела, Татьяна решила: к врачам обращаться не станет. Привычно сама выписала девочке антибиотики. Ударную дозу.

«Результат был больше негативный, никакой пользы не было, ребенку легче не стало. И я в первый день поняла, что этот антибиотик, значит, либо нам не подходит, либо я делаю что-то не так», — рассказала мама девочки Татьяна Агеева.

«Назначение антибиотика самопроизвольное, прием антибиотика, было неоправданно. Потому что у ребенка была вирусная инфекция, а при вирусной инфекции антибиотики не помогают», — поясняет участковый педиатр Альфия Мингалимова.

Тем временем бактерии, дремлющие в организме, закалились. Ведь курс до конца не доведен. Выжили! В следующий раз тот же антибиотик их уже не возьмет. Эта стойкость перейдет к следующему поколению. И так раз за разом, до супербактерии. Человечество, правда, в опасности. Только в Европе от стойких к антибиотикам бактерий в год умирают 25 тысяч человек. Проблему обсуждают на уровне Генеральной Ассамблеи ООН.

«Это случалось только при СПИДе, при эболе, при неинфекционных заболеваниях. И, вот, сейчас чувствительность к антибиотикам. Ну, представляете масштаб и глубину проблемы?» — подчеркивает Гайк Никогосян.

Скрытая угроза: мы получаем антибиотики не только когда лечимся. Их добавляют в зубную пасту, в то самое мыло, избавляющее от прыщей. Используют на фермах, птицефабриках. И вот они уже у нас на столе. Наши бактерии вырабатывают стойкость — резистентность. За считанные дни! Фармацевтические компании не успевают создавать новые антибиотики. К тому же это дорого. Выгоднее вложиться в препараты, которые продержатся десятки лет. Для сердца.

«Было очень бурное развитие фармакологии в плане разработки новых классов, видов, подтипов и так далее, лекарственных средств, которые так или иначе оказывают влияние на микроорганизмы. С 2008 года этот процесс несколько замедлился», — говорит профессор кафедры клинической фармакологии 1-го Московского медицинского государственного университета им. И.М. Сеченова Марина Журавлева.

А ведь антибиотики не панацея. Например, ученые из новосибирского Академгородка предлагают заменить их бактериофагами. Пожиратели бактерий, созданы еще в советское время.

Как действует антибиотик: пробивает брешь в клеточной стенке, и бактерия гибнет. Либо разрушают ее изнутри, воздействуют на функцию ДНК или на рибосомы, не давая им синтезировать белок. А бактериофаги уничтожают бактерию полностью. Но только одного вида.

«Нельзя взять любой бактериофаг и лечить любую бактерию. Обязательно надо подбирать. Выяснять: как бактериофаг действует для конкретно этого пациента», — поясняет заведующая лабораторией молекулярной микробиологии Института химической биологии и фундаментальной медицины СО РАН Нина Тикунова.

Во всем мире, Россия не исключение, разрабатывают антибактериальные препараты нового поколения. Они блокируют работу генетических конструкций внутри клетки.

«Обмануть клетку, не дать себя разрушить, с одной стороны. Но в то же время распознать и блокировать нужный участок генетической информации и остановить развитие микроорганизма. Это в определенной степени сейчас рассматривается как антибиотики нового поколения», — рассказывает заместитель директора по научной работе Института химической биологии и фундаментальной науки СО РАН Дмитрий Пышный.

Но это пока перспектива. Нужны доработки, клинические испытания. А смерть от супербактерии зафиксирована уже сейчас. Ученые успокаивают: Апокалипсис не сегодня.

«Пока стойких ко всем антибиотикам бактерий мало, но тенденция к росту все же есть, и она очень четкая. Самая серьезная ситуация в странах с неограниченным доступам к антибиотикам», — говорит профессор бактериальной геномики и эволюции Института Сангера и Лондонской школы гигиены и тропической медицины Ник Томсон.

То есть там, где их продают без рецепта. Россия тоже в этом списке. Поэтому врачи, от участковых до профессуры, умоляют: не нужно бежать за антибиотиками каждый раз, когда приболел. Лучше бежать от болезни. Регулярно работать на повышение своего иммунитета. Закалка, спорт, ЗОЖ!

Страница не найдена | Ліки-Інфо

ДОСТАВКА ТОВАРА ПО ВСЕЙ УКРАИНЕ

Авдеевка, Александрия, Александровск, Алмазная, Алупка, Алушта, Алчевск, Амвросиевка, Ананьев, Андрушёвка, Антрацит, Апостолово, Армянск, Артёмово, Артёмовск, Артёмовск, Арциз, Ахтырка, Балаклея, Балта, Бар, Барановка, Барвенково, Батурин, Бахмач, Бахчисарай, Баштанка, Белая Церковь, Белгород, Белз, Белицкое, Белогорск, Белозёрское, Белополье, Беляевка, Бердичев, Бердянск, Берегово, Бережаны, Березань, Березно, Березо́вка, Берестечко, Берислав, Бершадь, Бобринец, Бобрка, Бобровица, Богодухов, Богуслав, Болград, Болехов, Борзна, Борислав, Борисполь, Борщёв, Боярка, Бровары, Броды, Брянка, Бурштын, Бурынь, Буск, Буча, Бучач, Валки, Васильевка, Васильков, Ватутино, Вахрушево, Вашковцы, Великие Мосты, Верхнеднепровск, Верховцево, Вижница, Вилково, Винники, Винница, Виноградов, Вишнёвое, Владимир, Вознесенск, Волноваха, Волочиск, Волчанск, Вольногорск, Вольнянск, Ворожба, Вышгород, Гадяч, Гайворон, Гайсин, Галич, Геническ, Герца, Глобино, Глухов, Глиняны, Гнивань, Голая Пристань, Горловка, Горное, Горняк, Городенка, Городище, Городня, Городок, Городок, Горохов, Гребёнка, Гуляйполе, Дебальцево, Деражня, Дергачи, Джанкой, Дзержинск, Димитров, Днепродзержинск, Днепропетровск, Днепрорудное, Добромиль, Доброполье, Докучаевск, Долина, Долинская, Донецк, Дрогобыч, Дружба, Дружковка, Дубляны, Дубно, Дубровица, Дунаевцы, Евпатория, Енакиево, Жашков, Ждановка, Жёлтые Воды, Жидачов, Житомир, Жмеринка, Жолква, Залещики, Запорожье, Заставна, Збараж, Зборов, Звенигородка, Здолбунов, Зеленодольск, Зеньков, Зимогорье, Змиёв, Знаменка, Золотое, Золотоноша, Золочев, Зоринск, Зугрэс, Ивано, Измаил, Изюм, Изяслав, Иловайск, Ильинцы, Ильичёвск, Инкерман, Ирмино, Ирпень, Иршава, Ичня, Кагарлык, Казатин, Калиновка, Калуш, Каменец, Каменка, Каменка, Каменка, Камень, Канев, Карловка, Каховка, Керчь, Киверцы, Киев, Килия, Кировоград, Кировское, Кицмань, Кобеляки, Ковель, Кодыма, Коломыя, Комсомольск, Конотоп, Константиновка, Корец, Коростень, Коростышев, Корсунь, Корюковка, Косов, Костополь, Котовск, Краматорск, Красилов, Красноармейск, Красноград, Краснодон, Краснопартизанск, Красноперекопск, Красный Лиман, Красный Луч, Кременец, Кременчуг, Кривой Рог, Кролевец, Кузнецовск, Купянск, Ладыжин, Лановцы, Лебедин, Лисичанск, Лозовая, Лохвица, Лубны, Луганск, Лутугино, Луцк, Львов, Любомль, Люботин, Малин, Марганец, Мариуполь, Макеевка, Малая Виска, Мелитополь, Мена, Мерефа, Миргород, Мироновка, Миусинск, Могилёв, Молодогвардейск, Молочанск, Монастыриска, Монастырище, Мостиска, Мукачево, Надворная, Николаев, Николаев, Никополь, Нежин, Немиров, Нетешин, Новая Каховка, Новая Одесса, Новый Буг, Новоазовск, Нововолынск, Новгород, Новогродовка, Новомиргород, Новоград, Новодружеск, Новоднестровск, Новомосковск, Новопсков, Новоселица, Новоукраинка, Новый Роздол, Носовка, Обухов, Овруч, Одесса, Орджоникидзе, Орехов, Острог, Очаков, Павлоград, Первомайск, Первомайск, Первомайский, Перевальск, Перемышляны, Перечин, Перещепино, Переяслав, Першотравенск, Петровское, Пирятин, Погребище, Подволочиск, Подгайцы, Подгородное, Пологи, Полонное, Полтава, Попасная, Почаев, Приволье, Прилуки, Приморск, Припять, Пустомыты, Путивль, Пятихатки, Рава, Радехов, Радомышль, Радивилов, Рахов, Ржищев, Рогатин, Ровеньки, Ровно, Рожище, Ромны, Рубежное, Рудки, Саки, Самбор, Сарны, Свалява, Сватово, Свердловск, Светловодск, Севастополь, Северодонецк, Седнев, Селидово, Семёновка, Середина, Симферополь, Синельниково, Скадовск, Скалат, Сквира, Сколе, Славута, Славутич, Славянск, Смела, Снежное, Снигирёвка, Снятын, Сокаль, Сокиряны, Соледар, Старобельск, Староконстантинов, Старый Крым, Старый Самбор, Стаханов, Сторожинец, Стрый, Судак, Сумы, Суходольск, Счастье, Таврийск, Тальное, Тараща, Татарбунары, Теплодар, Тернополь, Терновка, Тетиев, Тысменица, Тлумач, Теребовля, Тростянец, Трускавец, Токмак, Торез, Тульчин, Тячев, Угледар, Угнев, Узин, Украинка, Ужгород, Умань, Устилуг, Фастов, Феодосия, Харцызск, Харьков, Херсон, Хмельник, Хмельницкий, Хорол, Хотин, Христиновка, Хуст, Хыров, Цюрупинск, Червоноград, Червонозаводское, Червонопартизанск, Черкассы, Чернигов, Чернобыль, Черновцы, Чигирин, Чоп, Чортков, Чугуев, Шаргород, Шахтёрск, Шепетовка, Шостка, Шпола, Шумск, Щёлкино, Щорс, Энергодар, Южное, Южноукраинск, Яворов, Яготин, Ялта, Ямполь, Яремче, Ясиноватая

Бактериофаг Клебсиелл Поливалентный р-р д/внутр примен фл 20мл №4 очищенный

Пользовательское соглашение

1. Общие положения

1.1. Использование сайта www.giper-apteka.ru (далее — Сайт) регулируется нормами действующего законодательства Российской Федерации.

1.2. Правообладателем и администратором сайта giper-apteka.ru является Индивитуальный предприниматель Дружинин Михаил Валерьевич (ОГРНИП 319237500453582, ИНН 741274120144, адрес:  353454, РФ, Краснодарский край, МО город-курорт Анапа, г. Анапа,  ул. Парковая, 57 (далее — Администрация Сайта).

1.3. Соглашение может быть изменено Администрацией Сайта в одностороннем порядке без специального уведомления Пользователей. Новая редакция Соглашения вступает в силу, с момента ее размещения в сети Интернет по адресу https:/giper-apteka.ru

1.4. Предметом настоящего Соглашения является предоставление Администрацией Сайта Пользователю доступа к использованию Сайта и его сервисам в целях получения информации, а также в целях формирования заявки в адрес:

 1.4.1. Юридических лиц, обладающих необходимой правоспособностью и дееспособностью, а также соответствующей лицензией на фармацевтическую деятельность (далее — Аптеки),

 1.4.2 Юридических лиц, обладающих необходимой правоспособностью и дееспособностью, а также соответствующей лицензией на розничную торговлю (далее — Магазины), 

На бронирование или поставку выбранного товара в рамках заключенного между последними договора бронирования и поставки.

 1.5. Пользователь обязан ознакомиться с настоящим Соглашением до момента регистрации на Сайте. Регистрация Пользователя на Сайте означает полное и безоговорочное принятие Пользователем настоящего Соглашения.

2. Регистрация Пользователя, учетная запись Пользователя

 2.1. Регистрация Пользователя на Сайте является бесплатной, добровольной и производится по адресу в сети Интернет: www.giper-apteka.ru

2.2. Пользователем Сайта является физическое лицо, зарегистрированное на Сайте в соответствии с установленным настоящим Положением порядком, достигшее возраста, допустимого в соответствии с законодательством Российской Федерации для принятия настоящего Соглашения (ранее и далее — Пользователь).

2.3. Для пользования Сайтом, Пользователю необходимо пройти процедуру регистрации, в результате которой для Пользователя будет создана учетная запись.

2.4. При регистрации Пользователь в качестве логина указывает свой номер мобильного телефона и электронную почту (e-mail). Пароль для личного кабинета Пользователь придумывает (составляет) и вводит сам. Пользователь должен подтвердить номер телефона, путем введения в соответствующую форму на Сайте кода, полученного Пользователем в виде SMS-сообщения от Сайта на мобильный телефон Пользователя, номер которого указывается самим Пользователем, при регистрации или в личном кабинете.

2.5. Пользователь самостоятельно обеспечивает конфиденциальность своего логина и пароля. Пользователь не имеет права передавать свои логин и пароль третьим лицам, несет полную ответственность за их сохранность, самостоятельно выбирая способ их хранения.

2.6. Если Пользователем не доказано обратное, любые действия, совершенные с использованием логина и пароля Пользователя, считаются совершенными соответствующим Пользователем.

 2.7. В случае несанкционированного доступа к логину и паролю и/или к личному кабинету Пользователя, или распространения логина и пароля Пользователь обязан незамедлительно сообщить об этом Администрации Сайта в установленном порядке.

2.8. Прекращение регистрации. Администрация Сайта вправе заблокировать или удалить учетную запись Пользователя без объяснения причин, в том числе в случае нарушения Пользователем условий Соглашения.

2.9. Для удаления своей учетной записи Пользователь должен направить требование Администрации Сайта по адресу, указанному в п.1.2 настоящего Соглашения. Удаление учетной записи осуществляется Администрацией Сайта в течение 30 календарных дней с даты получения такого требования.

3. Обязанности сторон

3.1. Пользователь сайта вправе:

3.1.1. Заказывать* товары на сайте в личных, семейных, домашних и иных целях, не связанных с осуществлением предпринимательской деятельности.

3.2. При использовании Сайта Пользователь не вправе:

3.2.1. заказывать товары на сайте в предпринимательских целях;

3.2.2. заказывать товары в нарушение п. 3.1.1 Соглашения;

3.2.3. загружать, посылать, передавать или любым другим способом размещать и/или распространять информацию, которая является незаконной, вредоносной, клеветнической, оскорбляет нравственность, демонстрирует (или является пропагандой) насилие и жестокость, нарушает права интеллектуальной собственности, пропагандирует ненависть и/или дискриминацию людей по расовому, этническому, половому, религиозному, социальному признакам, содержит оскорбления в адрес каких-либо лиц или организаций, содержит элементы (или является пропагандой) порнографии, представляет собой рекламу (или является пропагандой) услуг сексуального характера (в том числе под видом иных услуг), разъясняет порядок изготовления, применения или иного использования наркотических веществ или их аналогов, взрывчатых веществ или иного оружия;

3.2.4. нарушать права третьих лиц, в том числе несовершеннолетних лиц и/или причинять им вред в любой форме;

3.2.5. выдавать себя за другого человека или представителя организации и/или сообщества без достаточных на то прав, в том числе за сотрудников Администрации Сайта, за модератора форумов, за владельца Сайта, а также применять любые другие формы и способы незаконного представительства других лиц в сети, а также вводить пользователей в заблуждение относительно свойств и характеристик каких-либо субъектов или объектов;

3.2.6. загружать, посылать, передавать или любым другим способом размещать и/или распространять информацию, при отсутствии прав на такие действия согласно законодательству или каким-либо договорным отношениям;

3.2.7. загружать, посылать, передавать или любым другим способом размещать и/или распространять не разрешенную специальным образом рекламную информацию, спам, списки чужих адресов электронной почты, контактные данные;

3.2.8. загружать, посылать, передавать или любым другим способом размещать и/или распространять какие-либо материалы, содержащие вирусы или другие компьютерные коды, файлы или программы, предназначенные для нарушения, уничтожения либо ограничения функциональности любого компьютерного или телекоммуникационного оборудования, или программ, для осуществления несанкционированного доступа, а также размещения ссылок на вышеуказанную информацию;

3.2.9. не санкционированно собирать, хранить или распространять персональные данные других лиц;

 3.2.10. нарушать нормальную работу Сайта;

3.2.11.содействовать действиям, направленным на нарушение ограничений и запретов, налагаемых Соглашением;

3.2.12. другим образом нарушать нормы законодательства, в том числе нормы международного права.

3.3. Пользователь несет личную ответственность за любую информацию, которую размещает на Сайте, сообщает другим Пользователям, а также за любые взаимодействия с другими Пользователями, осуществляемые на свой риск.

3.4. Сайт не несет ответственность за вред, причиненный технике пользователя, в случае если это произошло в результате перехода по ссылкам, размещенным на Сайте.

3.5. Администрация Сайта обеспечивает функционирование и работоспособность Сайта и обязуется оперативно восстанавливать его работоспособность в случае технических сбоев и перерывов. Администрация Сайта не несет ответственности за временные сбои и перерывы в работе Сайта и вызванные ими потерю информации. Администрация не несет ответственности за любой ущерб компьютеру Пользователя или иного лица, мобильным устройствам, любому другому оборудованию или программному обеспечению, вызванный или связанный со скачиванием материалов по ссылкам, размещенным на Сайте.

 3.6. Администрация Сайта вправе удалить учетную запись Пользователя, в том числе в случае систематического нарушения последним правил пользования Сайтом.

3.7. Администрация Сайта вправе в одностороннем порядке изменять условия настоящего Пользовательского соглашения, изменять Сайт, в том числе изменять или добавлять разделы, менять дизайн и пр.

 3.8. Администрация Сайта вправе отказать Пользователю сайта в формировании заявки в адрес Аптек и Магазинов на поставку выбранного товара в случае нарушения Пользователем условий Соглашения, а также в случае отсутствия разумной уверенности администрации сайта, что заказанный товар и его количество соответствуют условиям п. 3.1.1. настоящего Соглашения.

4. Персональные данные

4.1. Регистрируясь на Сайте, Пользователь свободно, по своей воле и в своих интересах даёт полное и безоговорочное согласие Администрации Сайта на обработку предоставленных Пользователем его персональных данных в соответствии с текстом согласия, размещенным по адресу  https://giper-apteka.ru. Также Пользователь подтверждает, что ознакомлен с Политикой www.giper-apteka.ru в отношении обработки персональных данных размещенной по адресу: https://giper-apteka.ru. При этом письменная форма или иные доказательства для дополнительного подтверждения свободного волеизъявления Пользователя Администрации Сайта не потребуются.

4.2. Регистрируясь на Сайте и подтверждая свой телефон, Пользователь соглашается с тем, что, так как в рамках сервиса Сайта номер телефона Пользователя является единственным идентификатором Пользователя, формирование Пользователем заказа на Сайте от имени Аптек или Магазинов в адрес поставщика влечет передачу номера телефона Пользователя Аптекам, Магазинам выбранным им для получения заказа. При заказе доставки курьером, номер телефона Пользователя передается Курьеру, осуществляющего доставку Пользователю. Отзыв пользователем своего согласия на передачу номера телефона влечет невозможность исполнения заказов, сформированных на Сайте.

5. Сайты и контент третьих лиц

5.1. Сайт может содержать ссылки на сайты третьих лиц в сети Интернет. Указанные третьи лица и их сайты не проверяются Администрацией Сайта на соответствие требованиям действующего законодательства (достоверности, полноты, законности и т. п.). Администрация Сайта не несет ответственность за любую информацию, материалы, размещенные на сайтах третьих лиц, к которым Пользователь получает доступ при переходе по ссылкам с Сайта, в том числе. 5.2. Ссылка (в любой форме) на любой сайт, продукт, услугу, любую информацию коммерческого или некоммерческого характера, размещенная на Сайте, не является одобрением или рекомендацией данных продуктов (услуг, деятельности) со стороны Администрацией Сайта, за исключением случаев, когда на это прямо указывается на ресурсах Сайта.

6. Отсутствие гарантий, ограничение ответственности

6.1. Пользователь использует Сайт на свой собственный риск. Сервисы предоставляются «как есть». Администрация Сайта не принимает на себя никакой ответственности, в том числе за соответствие Сайта целям Пользователя.

6.2. Администрация Сайта не гарантирует, что: сервисы соответствуют/будут соответствовать требованиям Пользователя; сервисы будут предоставляться непрерывно, быстро, надежно и без ошибок; качество какого-либо продукта, услуги, информации и пр., полученных с использованием сервисов, будет соответствовать ожиданиям Пользователя.

 6.3. Ни при каких обстоятельствах Администрация Сайта или ее представители не несут ответственность перед Пользователями или перед любыми третьими лицами за ущерб, включая упущенную выгоду, вред чести, достоинству или деловой репутации, вызванный в связи с использованием Сайта, содержимого Сайта или иных материалов, к которым Пользователи или иные лица получили доступ с помощью Сайта.

7. Иные положения

7.1. Если по тем или иным причинам одно или несколько положений настоящего Соглашения будут признаны недействительными или не имеющими юридической силы, это не оказывает влияния на действительность или применимость остальных положений Соглашения.

8. Юридические лица

Аптеки:

1. Аптечная сеть «Фитофарм» (Общество с ограниченной ответственностью)

Юридический адрес: 353454, РФ, Краснодарский край, МО город-курорт Анапа, г. Анапа, ул. Парковая, 57 помещение 37, 39

ИНН: 2301048666

ОГРН: 1032300010676

Лицензия: ЛО-23-02-006798 от 30.12.2020, выдана Министерством здравоохранения Краснодарского края

Медтехники

2. ОБЩЕСТВО С ОГРАНИЧЕННОЙ ОТВЕТСТВЕННОСТЬЮ «МЕДТЕХНИКА ФИТОФАРМ»

Юридический адрес: 353454, РФ, Краснодарский край, МО город-курорт Анапа, г. Анапа, ул. Ленина, д.154, помещение 1, офис 1

ИНН: 2301094750

ОГРН: 1172375055940

Беби Центр

3. ОБЩЕСТВО С ОГРАНИЧЕННОЙ ОТВЕТСТВЕННОСТЬЮ «ЭНЕМ»

Юридический адрес: 353440, РФ, Краснодарский край, город-курорт Анапа, ул. Парковая, 57

ИНН: 2301052944

ОГРН: 1052300007924

Политика конфиденциальности

Настоящая Политика конфиденциальности персональных данных (далее — Политика) действует в отношении всей информации, размещенной на сайте в сети «Интернет» по адресу: https://giper-apteka.ru (далее — Сайт), приложения Giper-apteka.ru, которую Администрация Сайта может получить о Пользователе во время использования Сайта, его сервисов, программ и продуктов.

Настоящая Политика конфиденциальности разработана в соответствии с:

·         Конституцией Российской Федерации;

·         Федеральным законом от 27 июля 2006 года № 152-ФЗ «О персональных данных»;

·         Федеральным законом от 27 июля 2006 года № 149-ФЗ «Об информации, информационных технологиях и о защите информации;

·         Постановлением Правительства РФ от 01 ноября 2012 года № 1119 «Об утверждении требований к защите персональных данных при их обработке в информационных системах персональных данных»;

·         Иными нормативно-правовыми актами Российской Федерации и локальными нормативными актами организации.

 

ОБЩИЕ ПОЛОЖЕНИЯ:

Основные термины и определения, используемые в настоящей политике:

·         Сайт — совокупность программ для электронных вычислительных машин и иной информации, содержащейся в информационной системе, доступ к которой обеспечивается посредством информационно-телекоммуникационной сети «Интернет» по доменному имени www.giper-apteka.ru;

·         Администрация Сайта — лица, осуществляющие действия по управлению Сайтом;

·         Пользователь – физическое лицо, пользующееся Сайтом и предоставляющее персональную информацию;

·         Персональная информация — информация, которую Пользователь предоставляет о себе самостоятельно при регистрации (создании учетной записи) или в процессе использования Сервисов, включая персональные данные Пользователя, а также данные, которые автоматически передаются сервисам Сайта в процессе их использования с помощью установленного на устройстве Пользователя программного обеспечения, в том числе, но не ограничиваясь, IP-адрес, данные файлов cookie, информация о браузере Пользователя (или иной программе, с помощью которой осуществляется доступ к сервисам), технические характеристики оборудования и программного обеспечения, используемых Пользователем, дата и время доступа к сервисам, адреса запрашиваемых страниц и иная подобная информация;

·         Персональные данные — любая информация, относящаяся к прямо или косвенно определенному или определяемому физическому лицу;

·         Обработка персональных данных — любое действие (операция) или совокупность действий (операций), совершаемых с использованием средств автоматизации или без использования таких средств с персональными данными, включая сбор, запись, систематизацию, накопление, хранение, уточнение (обновление, изменение), извлечение, использование, передачу (распространение, предоставление, доступ), обезличивание, блокирование, удаление, уничтожение персональных данных;

·         Автоматизированная обработка персональных данных — обработка персональных данных с помощью средств вычислительной техники;

·         Распространение персональных данных — действия, направленные на раскрытие персональных данных неопределенному кругу лиц;

·         Предоставление персональных данных — действия, направленные на раскрытие персональных данных определенному лицу или определенному кругу лиц.

Активация Пользователем раздела «Политика конфиденциальности» Сайта или Мобильного приложения путём проставления отметки — «галочки» или «веб-метки» в специальном поле на странице регистрации и нажатия соответствующей кнопки расценивается однозначно, как согласие на обработку персональных данных Пользователя в соответствии с Политикой Администрации Сайта и Соглашением на обработку персональных данных на сайте www.giper-apteka.ru.

Использование сервисов Сайта/мобильного приложения означает безоговорочное согласие Пользователя с настоящей Политикой и указанными в ней условиями обработки его персональной информации; в случае несогласия с этими условиями Пользователь должен воздержаться от использования сервисов.

Настоящая Политика применяется только к Сайту www.giper-apteka.ru, его сервисам, программам и продуктам. Сайт www.giper-apteka.ru не контролирует и не несет ответственности за сайты третьих лиц, на которые Пользователь может перейти по ссылкам, доступным на Сайте www.giper-apteka.ru.

 

ЦЕЛИ ОБРАБОТКИ ПЕРСОНАЛЬНОЙ ИНФОРМАЦИИ ПОЛЬЗОВАТЕЛЕЙ

Сайт собирает и хранит только ту персональную информацию, которая необходима для предоставления сервисов или исполнения соглашений и договоров с Пользователем, за исключением случаев, когда законодательством предусмотрено обязательное хранение персональной информации в течение определенного законом срока.

Персональную информацию Пользователя Сайт обрабатывает в следующих целях:

·         Регистрации/авторизации Пользователя на Сайте/в мобильном приложении, идентификации Пользователя, зарегистрированного на Сайте/в мобильном приложении;

·         Предоставления Пользователю доступа к персонализированным ресурсам Сайта;

·         Установления обратной связи с Пользователем, включая направление уведомлений, запросов, касающихся использования Сайта/мобильного приложения, в том числе на указанный адрес электронной почты и/или на номер мобильного телефона, заключения, исполнения договоров, обработку запросов и заявок от Пользователя;

·         Определения места нахождения Пользователя для обеспечения безопасности, исполнения договоров;

·         Подтверждения достоверности и полноты персональной информации, предоставленной Пользователем;

·         Улучшение сервисов Сайта/мобильного приложения, удобства их использования, разработка новых сервисов и услуг;

·         Продвижения товаров;

·         Передачи и получения по каналам связи (в том числе в смс-сообщениях) информации о товарах, об услугах, а также об акциях, скидках, новостях;

·         Проведения статистических и иных исследований на основе обезличенных персональных данных;

·         Предоставления Пользователю эффективной клиентской и технической поддержки при возникновении проблем, связанных с использованием Сайта/мобильного приложения.

 

УСЛОВИЯ ОБРАБОТКИ ПЕРСОНАЛЬНОЙ ИНФОРМАЦИИ ПОЛЬЗОВАТЕЛЕЙ И ЕЕ ПЕРЕДАЧИ ТРЕТЬИМ ЛИЦАМ

В отношении персональной информации Пользователя сохраняется ее конфиденциальность, кроме случаев добровольного предоставления Пользователем информации о себе для общего доступа неограниченному кругу лиц. При использовании отдельных сервисов Пользователь соглашается с тем, что определенная часть его персональной информации становится общедоступной.

Сайт вправе передать персональную информацию Пользователя третьим лицам в следующих случаях:

1.     Пользователь явно выразил согласие на такие действия;

2.     Передача необходима для использования Пользователем определенного сервиса либо для исполнения определенного соглашения или договора с Пользователем;

3.     Передача предусмотрена действующим на территории Российской Федерации законодательством.

В случае продажи Сайта к приобретателю переходят все обязательства по соблюдению условий настоящей Политики применительно к полученной им персональной информации.

Обработка персональных данных Пользователя осуществляется без ограничения срока любым законным способом, в том числе в информационных системах персональных данных с использованием средств автоматизации или без использования таких средств. Обработка персональных данных Пользователей осуществляется в соответствии с Федеральным законом от 27.07.2006 N 152-ФЗ «О персональных данных».

Действие согласия прекращается на основании письменного заявления, которое подписывается Пользователем и направляется письменным уведомлением по адресу Администрации сайта: 353451, Краснодарский край, Анапский район, г. Анапа, ул. Парковая, д. 57 или путём отправления электронного сообщения по адресу электронной почты [email protected]. Согласие, считается отозванным по истечении 30 дней, с даты, получения Администрацией Сайта письменного заявления Пользователя об отзыве настоящего согласия. После получения такого сообщения обработка данных прекращается, а персональная информация удаляется, за исключением случаев, когда обработка может быть продолжена в соответствии с действующим законодательством.

Администрация Сайта принимает необходимые организационные и технические меры для защиты персональной информации Пользователя от неправомерного или случайного доступа, уничтожения, изменения, блокирования, копирования, распространения, а также от иных неправомерных действий третьих лиц.

При утрате или разглашении персональных данных Администрация Сайта информирует Пользователя об утрате или разглашении персональных данных.

Администрация Сайта совместно с Пользователем принимает все необходимые меры по предотвращению убытков или иных отрицательных последствий, вызванных утратой или разглашением персональных данных Пользователя.

 

ОТВЕТСТВЕННОСТЬ СТОРОН

Администрация Сайта, в случае неисполнения своих обязанностей, несет ответственность за убытки, понесенные Пользователем в связи с неправомерным использованием персональных данных, в соответствии с законодательством Российской Федерации.

В случае утраты или разглашения конфиденциальной информации Администрация Сайта не несет ответственности, если данная конфиденциальная информация:

·         Стала публичным достоянием до ее утраты или разглашения;

·         Была получена от третьей стороны до момента ее получения Администрацией Сайта;

·         Была разглашена с согласия Пользователя.

 

РАЗРЕШЕНИЕ СПОРОВ

До обращения в суд с иском по спорам, возникающим из отношений между Пользователем и Администрацией Сайта, обязательным является предъявление претензии (письменного предложения о добровольном урегулировании спора).

Получатель претензии в течение 30 календарных дней со дня получения претензии письменно уведомляет заявителя претензии о результатах рассмотрения претензии.

При не достижении соглашения спор будет передан на рассмотрение в суд в соответствии с действующим законодательством Российской Федерации.

 

ДОПОЛНИТЕЛЬНЫЕ УСЛОВИЯ

1.     Администрация Сайта вправе вносить изменения в настоящую Политику без согласия Пользователя;

2.     Новая Политика вступает в силу с момента ее размещения на Сайте;

3.     Действующая Политика размещена в неограниченном доступе на странице по адресу: https://giper-apteka.ru;

4.     Настоящая Политика является неотъемлемой частью Соглашения на обработку персональных данных, доступного для ознакомления при регистрации Пользователя на Сайте;

5.     Все предложения и вопросы по использованию Сайта следует направлять в службу поддержки по адресу электронной почты [email protected] или по телефону +7 (988) 320-09-09

Дата размещения: 20.05.2020г.

 

Бактериофаг и антибиотик избавили пациента от лекарственно-устойчивой инфекции

Прикрепление бактериофагов к поверхности бактериальной клетки. Фотография сделана с помощью трансмиссионной электронной микроскопии. Увеличение примерно в 200 тысяч раз.

Dr Graham Beards / Wikimedia Commons

Бактериофаг OMKO1 с антибиотиком цефтазидимом смог избавить пациента от инфекции, которую несколько лет безуспешно лечили традиционными антибиотиками, сообщается в Evolution, Medicine and Public Health. Пациенту с аневризмой аорты был установлен имплантат, но после операции у него развилась инфекция, вызванная синегнойной палочкой (Pseudomonas aeruginosa).

Синегнойная палочка (Pseudomonas aeruginosa) обладает повышенной устойчивостью к большинству антибиотиков и относится к так называемым ESKAPE-патогенам — бактериям, вызывающим госпитальные инфекции по всему миру. В том числе она обнаруживается при абсцессах и гнойных ранах. Лечение инфекций, вызванных P. aeruginosa осложняется тем, что бактерии образуют на поверхности пораженного органа биопленки. Антибиотики на это бактериальное сообщество не действуют, а уничтожают только отдельные (планктонные) бактерии, которые испускает биопленка.

Для уничтожения ESKAPE-патогенов исследователи пробуют альтернативные варианты, в том числе лечение бактериофагами. Бактериальные вирусы могут проникать в биопленку и уничтожать бактерии, из которых она состоит. Метод лечения бактериофагами начали разрабатывать почти 100 лет назад, вскоре после открытия этих микроорганизмов. Однако у этого метода обнаружились недостатки: процедура подбора нужных фагов, действующих на тот или иной вид бактерий, занимает как минимум несколько дней, обработать ими можно только наружные поверхности организма или кишечник, к тому же фаги начинают размножаться при большой концентрации бактерий, уничтожение которых может вызвать у пациента токсический шок. К тому же, бактерии вырабатывают к бактериофагам устойчивость, как и к антибиотикам, поэтому в настоящее время бактериофаги используют достаточно редко.

Ученые из Йельского университета под руководством хирурга Дипака Нараяна (Deepak Narayan) и эволюционного биолога Пола Тернера (Paul Turner) решили использовать бактериофаг OMKO1 для лечения пациента с тяжелой госпитальной инфекцией. В 2012 году 76-летнему пациенту прооперировали аневризму дуги аорты и установили дакроновый имплантат. Вскоре после операции у пациента развилась инфекция, вызванная синегнойной палочкой. Для борьбы с ней мужчине неоднократно проводили хирургические чистки грудной клетки (делали дренажное отверстие, через которое выходил гной) и прописывали многократные продолжительные курсы антибиотиков. Но лечение не помогало, состояние пациента ухудшалось. Медики считали, что проводить повторную операцию было слишком рискованно, и приняли решение провести экспериментальное лечение бактериофагом и антибиотиком цефтазидимом, который применяется для лечения синегнойной палочки.

В качестве кандидата они выбрали фаг OMKO1, который был получен из образцов прудовой воды. Исследователи взяли их в пруду Додж в 65 километрах от Йельского университета. Как выяснили авторы исследования в своей предыдущей работе, OMKO1 прикрепляется к мембране синегнойной палочки, точнее, к белку-насосу, который «откачивает» антибиотик из клетки, прежде чем тот успевает подействовать. Исследователи предположили, что P. aeruginosa выработала устойчивость к фагу с помощью мутаций в мембранном насосе, которые препятствовали связыванию OMKO1. Но эти же мутации уменьшают эффективность «насоса» и делают бактерию уязвимой к антибиотику. Поэтому, по мнению ученых из Йеля, комбинированная терапия должна была помочь пациенту.

Схема действия лекарства, предложенная учеными. Антибиотик в терапевтических концентрациях не может проникнуть в биопленки из-за ее плохой проницаемости и угнетенного метаболизма ее компонентов. Но фаг OMKO1 способен размножаться в бактериях, образующих пленку. В результате, стабильность бактериальной пленки нарушается, а потом она начинает разрушаться. И тогда даже терапевтические количества антибиотика действуют на патогены. А бактерии, устойчивые к фагу, становятся более чувствительными к антибиотику.

Benjamin Chan et al. / Evolution, Medicine and Public Health

Прежде чем проводить лечение, авторы работы провели лабораторные эксперименты и убедились в эффективности действия цефтазидима и фага на биопленки синегнойной палочки, которая была получена из выделений пациента. Исследователи предположили, что OMKO1 уничтожает отдельные бактерии, дестабилизируя бактериальную пленку. После этого уже антибиотик получает доступ к отдельным бактериям, устойчивым к фагу, и уничтожает их.

В 2016 году, после успеха лабораторных экспериментов, и получения разрешения на операцию от FDA и администрации университета, медики ввели в грудную клетку пациента суспензию фага OMKO1 и цефтазидима. После процедуры ему прописали короткий курс цефтазидима. В результате, в течение 18 месяцев (до подачи статьи в печать) рецидивов инфекции у мужчины не наблюдалось.

Недавно сингапурские исследователи синтезировали полимер, которые эффективно разрушает ESKAPE-патогены, в том числе и синегнойную палочку. В отличие от антибиотиков, новое вещество малотоксично и не вызывает возникновения устойчивости у бактерий.

Екатерина Русакова

В Москве был представлен новый высокоэффективный препарат уфимских микробиологов

В Москве, в Центральном доме ученых Российской академии наук, состоялся круглый стол на тему «Современные подходы в лечении бактериальных инфекций. Вопросы рациональной антибактериальной терапии».

В его работе приняли участие ведущие специалисты Министерства здравоохранения и социального развития страны, ФГУП «НПО «Микроген», ФГУН «Центральный НИИ эпидемиологии Роспотребнадзора», Московской медицинской академии имени И. Сеченова, Института биоорганической химии имени Шемякина — Овчинникова РАН и других научных учреждений.

С докладом «Разработка препарата бактериофага Энтеробактер» выступила профессор, начальник цеха по производству препаратов бактериофагов уфимского предприятия «Иммунопрепарат» Наталья Ворошилова.

По ее словам, гнойно-воспалительные заболевания, вызванные бактериями Энтеробактер, широко распространены. Это хирургические инфекции, заболевания уха, горла, носа, легких и плевры, урогенитальная патология, гастроэнтероколиты, дисбактериоз кишечника, инфекционные заболевания детей первого года жизни и онкологических больных. В России и странах СНГ количество таких людей, по эпидемиологическим данным, около 3 миллионов человек.

Впервые в мировой практике в филиале ФГУП «НПО «Микроген» «Иммунопрепарат» создан препарат – бактериофаг Enterobacter, разработаны научные основы технологических процессов его приготовления и лекарственная форма. Клинические испытания экспериментально-производственных серий новинки прошли в Москве в Российском государственном медицинском институте, Лечебно-диагностическом центре НИИЭМ имени Габричевского, НИИ педиатрии РАМН, Научном центре акушерства, гинекологии и перинатологии РАМН, НИИ урологии РАМН, НИИ скрой медицинской помощи имени Склифосовского РАМН, в Башкирском государственном медицинском университете.

Установлено, что препарат бактериофага, созданный творческой группой во главе с доктором медицинских наук Ворошиловой, превосходит по антибактериальной активности в отношении штаммов бактерий рода Enterobacter большинство применяемых антибиотиков. Технология его получения защищена тремя патентами РФ.

В результате проведенных башкирскими учеными исследований разработаны высокоэффективные промышленные технологии культивирования бактериофагов Enterobacter и их очистки. В будущем году, после получения разрешительных документов, «Иммунопрепарат» может приступить к массовому выпуску востребованного биолекарства.

В настоящее время на «Иммунопрепарате» производятся пиобактериофаг поливалентный очищенный, бактериофаг клебсиелл поливалентный очищенный, бактериофаг клебсиелл пневмонии очищенный. Общий их объем в год составляет 192 тысячи упаковок. По словам Натальи Николаевны, при введении новых производственных мощностей номенклатура жидких лекарственных форм препаратов бактериофагов может быть любой, в зависимости от спроса на фармацевтическом рынке страны.

Для справки. Профилактика и лечение бактериальных инфекций – одна из актуальных проблем в современной практической медицине. С течением времени бактерии выработали механизмы «защиты» от антибиотиков. По данным экспертов, в 2009 году в странах Евросоюза от инфекций, вызванных резистентными (устойчивыми к лекарствам) бактериями, прервалась жизнь более 25 тысяч пациентов.

Один из наиболее перспективных и эффективных методов лечения – применение препаратов бактериофагов. Эти высокоэффективные и безвредные биологические средства являются альтернативой антибиотикам и химиотерапевтическим препаратам.

В отличие от антибиотиков, они не оказывают иммунодепрессивного воздействия на организм больного, полностью отсутствуют аллергические и токсические реакции, противопоказаний – нет. Препараты бактериофагов успешно используются для лечения также новорожденных и детей раннего возраста. Фаготерапию можно назначать беременным женщинам, кормящим мамам без угрозы для здоровья и жизни ребенка.

В России и государствах ближнего зарубежья препараты бактериофагов применяются для лечения и профилактики острых кишечных инфекций – дизентерии, сальмонеллеза, брюшного тифа, гнойно-септических и иных заболеваний.

Правила применения фагопрепаратов

Правила применения препаратов бактериофага в форме раствора:

 

— Флакон с раствором бактериофага храните в холодильнике,

— перед употреблением встряхните флакон. Если наблюдается осадок, препарат не пригоден к употреблению,

— перед употреблением согрейте раствор бактериофага: оставьте невскрытый флакон на некоторое время при комнатной температуре или согрейте в руке.

Нельзя опускать флакон в горячую воду или разогревать в микроволновой печи – это может привести к инактивации бактериофагов.

 

Отбор дозы раствора из флакона

Если вы за один прием используете только часть раствора из флакона, важно защитить остатки препарата от попадания микроорганизмов, так как это приведет к инактивации бактериофагов. Чтобы раствор во флаконе сохранил активность, необходимо соблюдать следующие правила:

— перед открытием флакона тщательно вымойте руки,

— снимите с флакона колпачок, не вынимая пробку,

— раствор отбирайте из флакона стерильным шприцем путем прокола пробки,

— отбирайте только необходимый для одного приема объем: сливать остатки раствора в исходный флакон нельзя,

— отобранный шприцом раствор налейте в чистую емкость: флакон, стаканчик или др.,

— извлеките из пробки иглу, поставьте флакон с остатками препарата в холодильник, для следующего отбора дозы вновь используйте стерильный шприц.

Также для отбора малых доз препарата возможно использование стерильной крышки-капельницы, которая может входить в комплект, из расчета, что в 1 мл=20 капель раствора бактериофага. Крышка-капельница может использоваться в течение 7 суток после вскрытия флакона.

 

Разведение раствора бактериофага

Раствор бактериофага обычно применяют в неразведенном виде, так как разведение раствора бактериофага может снижать его эффективность.

В некоторых случаях (например, для того чтобы проверить переносимость препарата у детей первых месяцев жизни) препарат можно развести кипяченой водой или стерильным физиологическим раствором комнатной температуры не более, чем в два раза.

Решение о необходимости разведения препарата бактериофага, а также степени разведения  может принимать только лечащий врач!

 

Закапывание раствора бактериофага

Для закапывания раствора бактериофага в уши, нос, глаза используйте крышку-капельницу, если она входит в комплект, или чистую пипетку. Крышка-капельница может использоваться в течение 7 суток после вскрытия флакона.

Пипетку нельзя опускать в общий флакон, поэтому отберите стерильным шприцом необходимое количество раствора бактериофага в другую емкость и из нее набирайте в пипетку.

 

Полоскание полости рта и горла

При полоскании полости рта и горла раствор бактериофага сильно пенится, поэтому его набирают в рот маленькими порциями.

Заказать Бактериофаг клебсиел поливал 20мл 4 шт (Микроген) в интернет-аптеке

Видное, Строительная ул, д. 3, пом. 19-25
пн-вс 8:00-20:00
8 (495) 419-24-84

г. Домодедово аэропорт, 2 этаж
пн-вс круглосуточно
8-495-419-12-81

Голиково, Усковский пр-д, 2
пн-вс 9:00-22:00
+7 495 419-15-65

Жуковский, Клубная ул, 4/8
пн-вс 9:00-21:00
+7 495 221-53-88

Москва, Автозаводская ул., 13/1
пн-пт 8:00-22:00, сб-вс 9:00-22:00
+7 (495)419-24-50

Москва, Живописная ул, 12
пн-пт 8:00-22:00, сб 8:00-21:00, вс 9:00-21:00
+7 495 419-06-22

Москва, Нижняя Красносельская ул, д 35, с 49
пн-пт 9:00-22:00, сб-вс 10:00-22:00
+7 495 419 13 48

Москва, Самора Машела ул, 2А
пн-пт 9:00-22:00, сб-вс 9:00-21:00
+7 495 419-12-51

Ногинск, 1-ая Ильича ул, строение 6/29
пн-вс 9:00-22:00
+7 495 221-53-85

Ногинск, Дмитрия Михайлова ул, 1
пн-вс 9:00-22:00
+7 495 419-06-21

Одинцовский городской округ, Трехгорка, ул. Трехгорная, 4
пн-вс 09:00-21:00
+7(495)419-12-85

Химки, Ленинский пр, 1к1
пн-вс 8:00-21:00
+7 495 419 12 97

Фаговая терапия для лечения вирулентной инфекции Klebsiella pneumoniae на модели мышей

Основные моменты

•

Klebsiella pneumoniae — новый патоген для людей и животных.

•

Термотолерантный литический бактериофаг был выделен и охарактеризован in vitro в качестве кандидата для фаговой терапии.

•

Белковые составляющие литического фага анализировали с помощью SDS-PAGE и nLC-MS / MS.

•

Терапевтическая эффективность наблюдалась через 2 часа после заражения вирулентным K. pneumoniae на мышиной модели BALB / c.

Реферат

Цели

Klebsiella pneumoniae — важный эмерджентный патоген человека и животных, приводящий к серьезным клиническим последствиям. Увеличение использования антибиотиков способствовало появлению устойчивых к карбапенемам и β-лактамаз расширенного спектра (БЛРС), продуцирующих К.pneumoniae штаммов. В последнее время все большее распространение получила фаговая терапия как возможная альтернатива возникающей устойчивости к противомикробным препаратам. Это исследование было выполнено для оценки терапевтических эффектов нового литического фага (VTCCBPA43) на модели пневмонии мышей с целью изучения эффективности фаговой терапии против вирулентной инфекции K. pneumoniae .

Методы

Хвостатый фаг VTCCBPA43 оценивали по его кинетике роста, диапазону хозяев in vitro, а также чувствительности к температуре и pH.Составляющие белка анализировали с помощью SDS-PAGE и nLC-MS / MS. Терапевтическая эффективность наблюдалась через 2 часа после заражения вирулентным K. pneumoniae на модели мышей BALB / c.

Результаты

Фаг VTCCBPA43 оказался очень термостойким (до 80 ° C). Он был наиболее активен при pH 5, имел размер взрыва 172 БОЕ / мл и имел узкий диапазон хозяев. Он был идентифицирован как KP36-подобный фаг с помощью протеомики дробовика. После интраназального введения разовой дозы (2 × 10 ⁹ БОЕ / мышь) после заражения вирулентным К.pneumoniae , наблюдали присутствие биологически активного фага in vivo и значительное снижение бактериальной нагрузки легких во все моменты времени. Уменьшение тяжести поражения предполагало общие положительные эффекты фаговой терапии VTCCBPA43 на модели пневмонических мышей.

Заключение

Это исследование представляет собой первое доказательство in vivo эффективной фаговой терапии против инфекции K. pneumoniae интраназальным путем.

Ключевые слова

Фаготерапия

Пневмония

Модель мыши

Возникающая устойчивость к противомикробным препаратам

Рекомендуемые статьиСсылки статей (0)

© 2019 International Society for Antimicrobial Chemotherapy.Опубликовано Elsevier Ltd.

Рекомендуемые статьи

Ссылки на статьи

Характеристика четырех вирулентных бактериофагов Klebsiella pneumoniae и оценка их потенциального использования в комплексном приготовлении фагов | Журнал вирусологии

Изоляты бактерий

Клинические штаммы Klebsiella pneumoniae получены из коллекции «МикроМир». Все штаммы исследовали на масс-спектрометре MALDI-TOF Microflex (Bruker, США) и с помощью биохимических тестов (MIKROLATEST, Erba Mannheim) с последующим анализом на спектрофотометре Multiskan Ascent (Thermo Scientific, США) перед их добавлением в коллекцию.Штаммы были получены из:

• Клинические изоляты из Тулы; Серпухов; Москва; Пущино; город Уфа;

• Научный центр акушерства, гинекологии и перинатологии имени М.В. Кулакова;

• Московский городской научно-исследовательский институт скорой помощи им. Н. В. Склифосовского;

• Клиническая больница №83 ФМБА, Москва;

• Городская клиническая больница №67 в Москве.

Штаммы являются клиническими и были получены от многих пациентов в течение нескольких лет, что позволяет говорить об актуальности коллекции и ее соответствии текущему спектру циркулирующих штаммов. Более подробная информация о характеристиках бактериальных штаммов, включая результаты MALDI-TOF и MIKROLATEST, включена в Дополнительный файл 1.

Для выделения и получения бактериофагов и проведения экспериментов использовали четыре штамма: Kl 327, Kl 325, Kl 315 и Kl 263. Эти штаммы используются в лаборатории как наиболее удобные для производства и наиболее чувствительные к бактериофагам. Для каждого бактериофага использовали отдельный штамм: Kl 327 для vB_KpnS_FZ10, Kl 325 для vB_KpnS_FZ41, Kl 315 для vB_KpnP_FZ12 и Kl 263 для vB_KpnM_FZ14.

Выделение фагов

Klebsiella Фаги vB_KpnS_FZ10, vB_KpnP_FZ12, vB_KpnM_FZ14 и vB_KpnS_FZ41 были выделены в 4-х отдельных обогащениях из сточных вод, собранных из канализационных вод, собранных из канализационных вод, собранных в районе водоочистных сооружений Чекского района г.Процесс выделения начался с добавления натрий-фосфатного буфера (pH 7,0) к образцу до конечной концентрации 0,05 M, и NaCl был добавлен до конечной концентрации 1 M. Смесь инкубировали на экологическом шейкере-инкубаторе ES- 20/60 (Biosan, Латвия) в течение 60 мин при + 37 ° C и 100 об / мин. Затем отбирали супернатант и центрифугировали (6800 g, 20 мин) на центрифуге Avanti J-E с ротором JA 14,50 (Beckman Coulter, США). Затем супернатант центрифугировали в течение 2 ч при 96 200 g в ультрацентрифуге Optima L-90 K (Beckman Coulter, США) с ротором SW28.Супернатант удаляли и осадок растворяли в 1 мл 0,1 М трис-HCl буфера (pH 7,0). Полученную суспензию затем фильтровали через фильтры 1,2 мкм, 0,45 мкм и 0,22 мкм (MF-Millipore, США). Полученный фильтрат хранили при 4 ° C.

Амплификация и очистка бактериофага

Смешивали 800 мл бульона Brain Heart Infusion (BHI) и 10 мл ночной культуры клеток Klebsiella pneumoniae . В каждой встряхиваемой колбе были представлены клетки определенного штамма Klebsiella pneumoniae (Kl 327, Kl 325, Kl 315 и Kl 263).Смесь инкубировали на экологическом шейкере-инкубаторе ES-20/60 (Biosan, Латвия) в течение 2 ч при + 37 ° C и 100 об / мин. Затем в колбы добавляли 1 мл фильтрата бактериофага и инкубировали в течение ночи. Утром наблюдали лизис бактериальной культуры. Содержимое колб подвергали дифференциальному центрифугированию, а затем полученный результат фильтровали, как описано выше. Фильтраты хранили при 4 ° C в холодильнике.

Анализ бактериофаговых бляшек

Готовили суспензию клеток Klebsiella pneumoniae в физиологическом солевом растворе.Концентрация клеток в суспензии составляет приблизительно 10 ⁹ КОЕ / мл (колониеобразующих единиц на мл). Затем готовили серийные разведения (от 10 ^–1 до 10 ^–10 ) каждого из четырех полученных фильтратов бактериофагами в физиологическом солевом растворе. 0,2 мл культуры и 0,1 мл специфического разведения бактериофага добавляли в пробирки с мягким агаром (0,6%), перемешивали. Полученную смесь распределяли по чашкам Петри с твердым агаром. Инкубировали 24 ч при температуре + 37 ° С в термостате (Binder GmbH, Германия).После инкубационного периода оценивали полученные бляшки.

Приготовление «чистых линий» бактериофагов и оценка морфологии бляшек

Одиночные бляшки с фрагментами агара, полученными для каждого из четырех фильтратов, вырезали из мягкого агара и помещали в разные пробирки с 1 мл физиологического раствора соли. Их инкубировали 10 мин при комнатной температуре. Затем брали экстракты и повторяли этапы анализа амплификации / бляшек (было сделано 3 повтора).Полученные фильтраты хранили при 4 ° C в холодильнике. После анализа бляшек, описанного выше, оценивали морфологию бляшек.

Определение диапазона фага-хозяина

Для оценки литического спектра накопленного бактериофага использовали двухслойный метод. В качестве тест-культуры использовали 14 штаммов Klebsiella pneumoniae . Готовили суспензию клеток Klebsiella pneumoniae в физиологическом солевом растворе. Концентрация клеток в суспензии составляет примерно 10 ⁹ КОЕ / мл.0,2 мл культуры добавляли в пробирки с мягким агаром (0,6%), перемешивали, выливали в чашку Петри с агаром и давали затвердеть. Затем на мягкий агар наносили суспензию фага в нескольких разведениях. Чашки Петри инкубировали 24 ч при + 37 ° C в термостате (Binder GmbH, Германия). После инкубации оценивали наличие пятен лизиса. Чтобы убедиться, что образование пятен лизиса было вызвано литическим действием фага, были выполнены анализы бактериофаговых бляшек, как описано выше . Кроме того, был проведен анализ пятен лизиса на электронном микроскопе JEM-1011 (JEOL, Япония). Для этого из пятна лизиса брали фрагмент чашки с агаром и помещали в каплю 0,1 мл физиологического раствора. Инкубируют 25–30 мин. После этого пластину с агаром удаляли и проводили электронную микроскопию капли. Оценивали наличие бактериофагов в исследуемом материале.

Центрифугирование в градиенте CsCl

Готовили растворы с различным процентным содержанием CsCl (50, 30, 20, 10, 5).В качестве растворителя использовали 0,05 М трис-HCl буфер (pH 7,0). После этого растворы осторожно добавляли в центрифужную пробирку из ротора SW 28, наслаивая градиент от более высокой концентрации к более низкой с помощью пипетки Пастера. Последним добавляли фильтрат бактериофага. На каждом этапе контролировали фазовую однородность, предотвращая их перемешивание. Пробирки уравновешивали 5% -ным раствором CsCl и помещали в ультрацентрифугу Optima L-90 K (Beckman Coulter, США). Затем центрифугировали 2 ч при 96 200 g.После центрифугирования содержимое зоны с фагом осторожно отбирали в пробирки Эппендорфа с помощью пипетки. Затем содержимое пробирок центрифугировали в течение 2 ч при 96 200 g на центрифуге Optima L-90 K (Beckman Coulter, США) с ротором SW 28. Осадок ресуспендировали в 0,05 М трис-HCl буфере (pH 7,0). Полученную суспензию фага хранили при 4 ° C в холодильнике.

Электронная микроскопия

Электронную микроскопию проводили с использованием фильтрата бактериофага с высоким титром, очищенного в градиенте плотности CsCl.Образцы наносили на покрытые углеродом нитроцеллюлозные пленки, окрашивали 1% уранилацетатом и исследовали в просвечивающем электронном микроскопе (ПЭМ) JEM-1011 (JEOL, Япония). Электронные микрофотографии сделаны камерой Erlangshen ES500W (Gatan, США). Параметры бактериофагов измеряли с помощью программы ImageJ на основе изображений, полученных с помощью электронной микроскопии. В качестве маркеров использовали стандарты, основанные на измерениях длины хвоста (114 нм) бактериофага Т4. Для каждого фага измеряли 35 частиц и рассчитывали SD (стандартное отклонение).

Оценка частоты образования фаго-устойчивых форм

Клетки из ночной культуры суспендировали в физиологическом солевом растворе до 10 ⁸ КОЕ / мл, 0,1 мл культуры и 0,1 мл фильтрата фага, первоначально содержащего 10 ⁸ БОЕ / мл (бляшкообразующих единиц на мл) добавляли в пробирки с мягким агаром (0,6%), перемешивали. Полученную смесь распределяли по чашкам Петри с твердым агаром. Инкубировали 24 ч при температуре + 37 ° С в термостате (Binder GmbH, Германия).После этого оценивали количество устойчивых колоний и рассчитывали частоту образования фагорезистентных форм. Полученные устойчивые колонии помещали в пробирки с 10 мл бульона BHI и перемешивали. Полученные суспензии инкубировали 2 ч при 37 ° C в термостате (Binder GmbH, Германия). Затем в пробирки добавляли митомицин С до конечных концентраций 0,2 мкг / мл, 0,5 мкг / мл и 2 мкг / мл и инкубировали в течение 24 ч при + 37 ° C в термостате (Binder GmbH, Германия).Затем суспензии центрифугировали (6800 g, 20 мин) на центрифуге Avanti JE с ротором JA 14.50 (Beckman Coulter, США), супернатанты отбирали в чистые пробирки, центрифугировали 2 ч при 96 200 g на Optima L-90 K. ультрацентрифуга (Beckman Coulter, США) с ротором SW28, и образец анализировали на электронном микроскопе на наличие фага в суспензии. Кроме того, исходную суспензию устойчивых колоний обрабатывали хлороформом, затем центрифугировали (6800 g, 20 мин) на центрифуге Avanti J-E с JA 14.50 (Beckman Coulter, США) и супернатанты были нанесены на чувствительные к фагу газоны Klebsiella pneumoniae .

Чувствительность фаговых частиц к температуре и pH

Для определения чувствительности к температуре и pH методы, используемые Jamal et al. были применены [41]. Фильтрат бактериофага инкубировали в течение 1 ч в пробирках на водяной бане (GFL, Германия) при температурах 37, 50, 55, 60, 65 и 70 ° C. Затем были приготовлены серийные разведения фильтрата бактериофага от 10 ^–2 до 10 ^–10 с шагом 10 ² .Титр фага получали с помощью анализа бляшек, как описано выше. Для исследования чувствительности к pH были приготовлены пробирки с мясопептонным бульоном (MPB) (исходный pH 7,2) со значениями pH от 3 до 13. Для получения желаемых значений pH использовали 6 M растворы NaOH и HCl. MPB фильтровали через фильтры с диаметром пор 0,22 мкм (MF-Millipore, США). В пробирки добавляли по 1 мл фага с каждым значением pH и инкубировали 18 ч при + 37 ° C в инкубаторе (Binder GmbH, Германия). За pH следили после инкубационного периода.Такой же период инкубации для анализа чувствительности к pH использовали Сулеймани Сасани и Эфтехар [42]. Затем готовили серийные разведения раствора с фагами от 10 ^–1 до 10 ^–10 и проводили анализ бляшек, как описано выше, для получения титра фага.

Скорость адсорбции фага

Клетки из ночной культуры суспендировали в бульоне BHI до 10 ⁹ КОЕ / мл. 5 мл бактериальной суспензии и суспензии фага, разведенных до 10 ⁷ БОЕ / мл, инкубировали в 45 мл бульона BHI на экологическом шейкере-инкубаторе ES-20/60 (Biosan, Латвия) при + 37 ° C и 100 об / мин в течение 5 дней. мин.После этого супернатант фильтровали через фильтр с размером пор 0,22 мкм и подсчитывали количество свободных фагов, используя анализ бляшек, описанный выше. Снижение титра фага представляло собой количество фагов, адсорбированных на клетках. Фильтрат бактериофага использовали в качестве контроля. Снижения титра в контроле не наблюдалось. Константа адсорбции рассчитывалась по следующей формуле:

$$ k = \ left ({\ frac {- 1} {{Bt}}} \ right) \ times \ ln \ left ({\ frac {P} {{ P_ {0}}}} \ right) $$

P — концентрация свободного фага в 1 мл, P ₀ — исходная концентрация фага, B — исходная концентрация бактерий, k — константа скорости адсорбции (мл / мин) , t — время (мин).

Одностадийная кривая роста

Смешивали 1 мл бульона BHI, суспензию клеток с конечной концентрацией 10 ⁹ КОЕ / мл и фильтрат бактериофага с конечной концентрацией 10 ⁷ БОЕ / мл. Смесь инкубировали при 37 ° C в течение 8 мин в термостате (Binder GmbH, Германия), а затем центрифугировали 2 мин при 4800 g на Centrifuge 5424 (Eppendorf, Германия). Супернатант удаляли и осадок ресуспендировали в 100 мл бульона BHI. Аликвоты 0,5 мл полученной суспензии отбирали каждые 5 мин в течение 80 мин и титр бактериофага оценивали с помощью анализа бляшек, описанного выше.Латентный период определяли как интервал между адсорбцией фага на клетке-хозяине и высвобождением потомства фага. Размер вспышки фага выражали как отношение окончательного количества высвобожденных фаговых частиц к количеству инфицированных бактериальных клеток в течение латентного периода.

Размножение фага в жидкой питательной среде и оценка титра бактериофага

Клетки из ночной культуры суспендировали в бульоне BHI до 10 ⁹ КОЕ / мл. 5 мл бактериальной суспензии, содержащей 10 ⁹ КОЕ / мл и фаг, разведенный до 10 ⁶ БОЕ / мл, инкубировали в 45 мл бульона BHI на экологическом шейкере-инкубаторе ES-20/60 (Biosan, Латвия) при + 37 ° C и 100 об / мин в течение 18 часов.В качестве контроля одна колба не содержала фага, добавленного к культуре Klebsiella . Колбы инкубировали 18 ч при + 37 ° C и 100 об / мин. После этого титр фага в экспериментальной системе оценивали с использованием анализов бляшек, описанных выше. Инкубируют 24 ч при + 37 ° С в термостате (Binder GmbH, Германия). После инкубации оценивали титр фага.

Выделение и рестрикционное расщепление ДНК фага

Геномную ДНК фага экстрагировали из фильтрата бактериофага с высоким титром, очищенного в градиенте плотности CsCl.Раствор этилендиаминтетрауксусной кислоты (ЭДТА) добавляли к 0,45 мл фильтрата бактериофага до конечной концентрации 25 мМ. Затем добавляли протеиназу К до конечной концентрации 100 мкг / мл и инкубировали при + 50 ° C в течение 2 часов. После этого добавляли додецилсульфат натрия (SDS) до концентрации 0,5% и инкубировали при + 55 ° C в течение 2 часов. Затем смесь нагревали 20 мин при + 65 ° C для инактивации ферментов. Далее была проведена двойная экстракция хлороформом. К водной фазе добавляли 0,5 мл изопропилового спирта, после чего ДНК экстрагировали на стеклянную палочку.После трехкратной промывки в 70% растворе этанола ДНК сушили в течение 5 мин на воздухе, а затем растворяли в 0,4 мл буфера ТЕ (pH 8,0). Количество и качество экстрагированной ДНК контролировали анализом на спектрофотометре NanoDrop ND-1000 (ThermoFisher, США).

ДНК фага расщепляли рестрикционными ферментами в соответствии с протоколом производителя в течение 90 мин при + 37 ° C (при + 30 ° C для SmaI) в буфере и условиях, подходящих для рестрикционного фермента (в 50 мкл реакции: 5 единиц фермента, 1 мкг ДНК и объем дистиллированной воды).Использовали следующие эндонуклеазы рестрикции: HindIII, HinfI, HaeIII, SspI, BamHI, EcoRV, NotI, EcoRI, KpnI, MspI, VspI, NdeI, BgII, BgIII, PvuI, SmaI. Для анализа результатов проводили электрофорез в 1% агарозном геле при 180–200 В в течение 1 ч при комнатной температуре на ячейке Sub-cell Model 92 (Biorad). В лунки добавляли 15–20 мкл (1-2 мкл буфера для нанесения на 5 мкл реакции). В качестве маркеров использовали лямбда-ДНК / HindIII (Thermo Scientific, США).

Визуализацию результатов проводили после окрашивания гелей агарозы в течение 20 мин в растворе бромистого этидия (1 мкг / мл).Для документирования результатов использовалась система DOCPRINT (Vilber Lourmat, Франция). Полученные профили рестрикции сравнивали с предсказанными in silico с помощью программы RestrictionMapper (restrictionmapper.org).

Секвенирование, сборка и аннотация генома

ДНК фага экстрагировали хлороформом [43]. Библиотеку ДНК конструировали с использованием набора для подготовки библиотеки ДНК Nextera (Illumina, Сан-Диего, Калифорния) и секвенировали с помощью секвенатора Illumina HiSeq T1500, что дало примерно 1 миллион считываний парных концов 2 × 250.Контроль качества и первичная обработка выполнялись с использованием FASTQC и trimmomatic (HEADCROP: 20, SLIDINGWINDOW: 3: 24, MINLEN: 200, CROP: 200) [44]. Покрытие было нормализовано до × 50 с использованием BBNorm [45]. Сборка de novo производилась с использованием ассемблера MIRA [46] версии 4.9.6. Завершение контига было подтверждено сравнением с близкородственными геномами, о которых известно, что они полные (номера доступа представлены в таблице 5). Поиск в открытых рамках считывания производился с помощью MetaProdigal 2.6 [47]. Аннотации выполнены с использованием всех рецензируемых фаговых и бактериальных белков от UniProt (https: // www.uniprot.org) и все белки из баз данных детерминант антимикробной устойчивости и факторов вирулентности бактерий: VFDB [48], CARD [49], ARG-ANNOT [50] и Resfinder [51]. Остальные ORF были аннотированы приложением hmmscan (минимальное значение е 0,001) [52] с использованием всех бактериальных профилей HMM из базы данных Pfam (https://pfam.xfam.org). тРНК была предсказана с помощью tRNAscan-SE 2.0 [53]. Все анализы, кроме указанных, были выполнены с параметрами по умолчанию. BLASTn (https: //blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi) использовался для поиска сходства с другими бактериофагами, а также для расчета средней идентичности нуклеотидов и охвата запросов.

Полные геномные последовательности Klebsiella pneumoniae фагов vB_KpnS_FZ10, vB_KpnP_FZ12, vB_KpnM_FZ14 и vB_KpnS_FZ41 депонированы в GenBank под номерами доступа MK521904, 4242 и MK21242, 242 и MK2 соответственно. Необработанные чтения Illumina доступны на NCBI SRA под номерами доступа SRR10037530 , SRR10037529 , SRR10037528 и SRR10037527 соответственно.Соответствующий регистрационный номер BioProject — PRJNA562287. Инструмент GenomeVx [54] использовался для полной визуализации генома. Таксономическая идентификация была произведена GenBank (https://www.ncbi.nlm.nih.gov/genbank/) на основе схемы филогенетической классификации, используемой в базе данных таксономии NCBI (https://www.ncbi.nlm.nih.gov / Таксономия).

Бактериофаговая терапия для ингибирования уропатогенных бактерий с множественной лекарственной устойчивостью: обзорный обзор | Анналы клинической микробиологии и противомикробных препаратов

1.

de Miguel T, Rama JLR, Sieiro C, Sánchez S, Villa TG. Бактериофаги и лизины как возможные альтернативы лечению устойчивых к антибиотикам инфекций мочевыводящих путей. Антибиотики. 2020; 9: 466.

PubMed Central Статья CAS Google ученый

2.

Малик С., Сидху П.К., Рана Дж., Нехра К. Управление инфекциями мочевыводящих путей с помощью фаговой терапии: новый подход. Folia Microbiologica. 2020; 65: 217–31.

CAS PubMed Статья PubMed Central Google ученый

3.

Залевска-Пёнтек Б., Пёнтек Р. Фаговая терапия как новая стратегия лечения инфекций мочевыводящих путей, вызванных E. coli . Антибиотики. 2020; 9: 304.

PubMed Central Статья CAS Google ученый

4.

Cassini A, Plachouras D, Eckmanns T, Abu Sin M, Blank HP, Ducomble T, Haller S, Harder T., Klingeberg A, Sixtensson M. Бремя шести связанных со здоровьем инфекций на здоровье населения Европы: оценка Количество лет жизни с поправкой на инвалидность с учетом заболеваемости с помощью моделирования на основе популяционной распространенности.PLoS Med. 2016; 13: e1002150.

PubMed PubMed Central Статья Google ученый

5.

Флорес-Мирелес А.Л., Уокер Дж. Н., Капарон М., Халтгрен С.Дж. Инфекции мочевыводящих путей: эпидемиология, механизмы заражения и варианты лечения. Nat Rev Microbiol. 2015; 13: 269–84.

CAS PubMed PubMed Central Статья Google ученый

6.

Хотчандани Р., Аггарвал К.Инфекции мочевыводящих путей у женщин. 2012.

7.

Фоксман Б. Эпидемиология инфекции мочевыводящих путей. Нат Рев Урол. 2010; 7: 653–60.

PubMed Статья PubMed Central Google ученый

8.

Stamm WE. Научные и клинические проблемы в лечении инфекций мочевыводящих путей. Am J Med. 2002; 113: 1–4.

Артикул Google ученый

9.

Kline KA, Bowdish DM. Инфекция у стареющего населения. Curr Opin Microbiol. 2016; 29: 63–7.

PubMed Статья PubMed Central Google ученый

10.

Grygorcewicz B, Wojciuk B, Roszak M, ubowska N, Błażejczak P, Jursa-Kulesza J, Rakoczy R, Masiuk H, Dołęgowska B. Комбинированный коктейль на основе фагов и антибиотиков из окружающей среды Воздействие комбинации антибиотиков на Acinetobacter в модели мочи человека. Устойчивость к микробным препаратам.2020; 27: 25–35.

Артикул CAS Google ученый

11.

Пирес Д.П., Мело Л.Д., Боас Д.В., Силланкорва С., Азередо Дж. Фаговая терапия как альтернативная или дополнительная стратегия предотвращения и контроля инфекций, связанных с биопленками. Curr Opin Microbiol. 2017; 39: 48–56.

CAS PubMed Статья PubMed Central Google ученый

12.

Чегини З., Хошбаян А., Могхадам М.Т., Фарахани И., Джазирейн П., Шариати А.Бактериофаговая терапия против Pseudomonas aeruginosa биопленок: обзор. Анн Клин Микробиол Антимикроб. 2020; 19: 1–17.

Артикул Google ученый

13.

Moghadam MT, Amirmozafari N, Shariati A, Hallajzadeh M, Mirkalantari S, Khoshbayan A, Jazi FM. Как фаги преодолевают проблемы устойчивых к лекарствам бактерий при клинических инфекциях. Инфекционная лекарственная устойчивость. 2020; 13:45.

Артикул Google ученый

14.

Lin DM, Koskella B, Lin HC. Фаговая терапия: альтернатива антибиотикам в эпоху множественной лекарственной устойчивости. Мир J Gastrointest Pharmacol Ther. 2017; 8: 162–73.

PubMed PubMed Central Статья Google ученый

15.

Сабино Дж., Хиртен Р.П., полковник Дж. Ф. Обзорная статья: бактериофаги в гастроэнтерологии — от биологии до клинического применения. Алимент Pharmacol Ther. 2020; 51: 53–63.

PubMed Статья PubMed Central Google ученый

16.

Лу Т.К., Коллинз Дж. Дж. Диспергирование биопленок с помощью сконструированного ферментативного бактериофага. Proc Natl Acad Sci. 2007; 104: 11197–202.

CAS PubMed Статья PubMed Central Google ученый

17.

usiak-Szelachowska M, Weber-Dąbrowska B, Górski A. Бактериофаги и лизины в контроле биопленки. Virologica Sinica. 2020; 35: 1–9.

Артикул CAS Google ученый

18.

Jaiswal A, Koley H, Ghosh A, Palit A, Sarkar B. Эффективность коктейльной фаговой терапии при лечении инфекции Vibrio cholerae на модели кролика. Микробы заражают. 2013; 15: 152–6.

PubMed Статья PubMed Central Google ученый

19.

Могхадам М.Т., Хошбаян А., Чегини З., Фарахани И., Шариати А. Бактериофаги, новое терапевтическое решение для ингибирования бактерий с множественной лекарственной устойчивостью, вызывающих раневую инфекцию: уроки на животных моделях и клинических испытаниях.Терапия разработки дизайна лекарств. 2020; 14: 1867.

CAS Статья Google ученый

20.

Бао Дж, Ву Н, Цзэн И, Чен Л., Ли Л., Ян Л., Чжан И, Го М., Ли Л., Ли Дж. Синергизм неактивных антибиотиков и бактериофагов для успешного лечения рецидивирующей инфекции мочевыводящих путей вызвано Klebsiella pneumoniae с широкой лекарственной устойчивостью. Новые микробные инфекции. 2020; 9: 771–4.

CAS PubMed PubMed Central Статья Google ученый

21.

Ляо К.С., Леман С.М., Tweardy DJ, Донлан Р.М., Траутнер Б.В. Бактериофаги действуют синергично с бактериальным вмешательством для предотвращения образования биопленки Pseudomonas aeruginosa на мочевых катетерах. J Appl Microbiol. 2012; 113: 1530–9.

CAS PubMed PubMed Central Статья Google ученый

22.

Юн Ш., Чжон Х., Квон С. К., Ким Дж. Ф. Геномика, биологические особенности и биотехнологические применения Escherichia coli B: «К лучшему ли B ?!».В Системной биологии и биотехнологии Escherichia coli. Springer; 2009: 1–17.

23.

Аллокати Н., Масулли М., Алексеев М.Ф., Ди Илио К. Escherichia coli в Европе: обзор. Int J Environ Res Public Health. 2013; 10: 6235–54.

PubMed PubMed Central Статья Google ученый

24.

Капер Дж. Б., Натаро Дж. П., Мобли Х.Л. Патогенная кишечная палочка. Природа рассматривает микробиологию. 2004; 2: 123–40.

CAS PubMed Статья PubMed Central Google ученый

25.

Очоа С.А., Крус-Кордова A, Луна-Пинеда В.М., Рейес-Граеда JP, Казарес-Домингес V, Эскалона G, Сепульведа-Гонсалес М., Лопес-Монтиель Ф, Арельяно-Галиндо Хос, Лопес B: Клинические штаммы уропатогенных Escherichia coli с множественной и широкой лекарственной устойчивостью: филогенетические группы, широко связанные с интегронами, поддерживают высокое генетическое разнообразие. Front Microbiol 2016,7: 2042.

PubMed PubMed Central Статья Google ученый

26.

Yazdi M, Bouzari M, Ghaemi EA, Shahin K. Выделение, характеристика и геномный анализ нового бактериофага VB_EcoS-Golestan, заражающего мультирезистентный Escherichia coli , выделенный из инфекции мочевыводящих путей. Sci Rep. 2020; 10: 1–13.

Артикул CAS Google ученый

27.

Gu Y, Xu Y, Xu J, Yu X, Huang X, Liu G, Liu X. Идентификация нового бактериофага vB_EcoP-EG1 с литической активностью против планктонных и биопленочных форм уропатогенных Escherichia coli . Appl Microbiol Biotechnol. 2019; 103: 315–26.

CAS PubMed Статья PubMed Central Google ученый

28.

Chibeu A, Lingohr EJ, Masson L, Manges A, Harel J, Ackermann H-W, Kropinski AM, Boerlin P. Бактериофаги со способностью разрушать уропатогенные биопленки Escherichia coli .Вирусы. 2012; 4: 471–87.

CAS PubMed PubMed Central Статья Google ученый

29.

Валерио Н., Оливейра С., Хесус В., Бранко Т., Перейра С., Морейринья С., Алмейда А. Эффекты однократного и комбинированного использования бактериофагов и антибиотиков для инактивации Escherichia coli . Virus Res. 2017; 240: 8–17.

PubMed Статья CAS PubMed Central Google ученый

30.

Moradpour Z, Yousefi N, Sadeghi D, Ghasemian A. Синергетическая бактерицидная активность естественно выделенного фага и ампициллина против инфицирования мочевыводящих путей Escherichia coli O157. Иран Дж. Базовая медицина. 2020; 23: 257.

PubMed PubMed Central Google ученый

31.

Comeau AM, Tétart F, Trojet SN, Prere M-F, Krisch H. Синергия фаг-антибиотик (PAS): β-лактамные и хинолоновые антибиотики стимулируют рост вирулентных фагов.Plos ONE. 2007; 2: e799.

PubMed PubMed Central Статья CAS Google ученый

32.

Чан Б.К., Систром М., Вертц Дж. Э., Кортрайт К. Э., Нараян Д., Тернер П. Е.. Отбор фагов восстанавливает чувствительность к антибиотикам у MDR Pseudomonas aeruginosa . Научный доклад 2016; 6: 26717.

CAS PubMed PubMed Central Статья Google ученый

33.

Wishart DS, Knox C, Guo AC, Shrivastava S, Hassanali M, Stothard P, Chang Z, Woolsey J. DrugBank: всеобъемлющий ресурс для открытия и исследования лекарств in silico. Nucleic Acids Res. 2006; 34: Д668-72.

CAS PubMed Статья PubMed Central Google ученый

34.

Розальский А., Сидорчик З., Котелко К. Потенциальные факторы вирулентности Proteus bacilli . Microbiol Mol Biol Rev.1997; 61: 65–89.

PubMed PubMed Central Статья Google ученый

35.

Рубин Р., Толков-Рубин Н., Котран Р. Инфекция мочевыводящих путей, пиелонефрит и рефлюкс-нефропатия. Почки. 1986; 2: 1085–141.

Google ученый

36.

Уоррен Дж. Клинические проявления и эпидемиология инфекций мочевыводящих путей. Инфекции мочевыводящих путей: молекулярный патогенез и клиническое ведение. Вашингтон: ASM Press; 1996. стр. 3–27.

Google ученый

37.

Армбрустер CE, Смит С.Н., Джонсон А.О., ДеОрнеллас В., Итон К.А., Ага А., Моди Л., Ву В., Мобли Х.Л. Патогенный потенциал Proteus mirabilis усиливается другими уропатогенами во время полимикробной инфекции мочевыводящих путей. Infect Immun. 2017; 85: e00808.

CAS PubMed PubMed Central Статья Google ученый

38.

Hooton TM, Bradley SF, Cardenas DD, Colgan R, Geerlings SE, Rice JC, Saint S, Schaeffer AJ, Tambayh PA, Tenke P.Диагностика, профилактика и лечение катетер-ассоциированной инфекции мочевыводящих путей у взрослых: Международное руководство по клинической практике 2009 г. Американского общества инфекционистов. Clin Infect Dis. 2010; 50: 625–63.

PubMed Статья PubMed Central Google ученый

39.

Якобсен С., Стиклер Д., Мобли Х., Шертлифф М. Осложненные катетер-ассоциированные инфекции мочевыводящих путей, вызванные Escherichia coli и Proteus mirabilis .Clin Microbiol Rev.2008; 21: 26–59.

CAS PubMed PubMed Central Статья Google ученый

40.

Ван Дж.Т., Чен П.К., Чанг С.С., Шиау Й.Р., Ван Х.Й., Лай Дж.Ф., Хуан И-В, Тан М.С., Лодердейл Т-Л. Чувствительность к противомикробным препаратам Proteus mirabilis : продолжительное общенациональное исследование тайваньской программы по надзору за устойчивостью к противомикробным препаратам (TSAR). BMC Infect Dis. 2014; 14: 486.

PubMed PubMed Central Статья Google ученый

41.

Фиртель TM, Риттер К., Хорц Н-П. Вирусы против бактерий — новые подходы к фаговой терапии как инструменту против патогенов с множественной лекарственной устойчивостью. J Antimicrob Chemother. 2014; 69: 2326–36.

CAS PubMed Статья PubMed Central Google ученый

42.

Melo LD, Veiga P, Cerca N, Kropinski AM, Almeida C, Azeredo J, Sillankorva S. Разработка фагового коктейля для борьбы с Proteus mirabilis , связанными с катетер-ассоциированными инфекциями мочевыводящих путей.Front Microbiol. 2016; 7: 1024.

PubMed PubMed Central Статья Google ученый

43.

Maszewska A, Zygmunt M, Grzejdziak I., Róalski A. Использование поливалентных бактериофагов для борьбы с биопленкой Proteus mirabilis , вызывающей катетер-ассоциированные инфекции мочевыводящих путей. J Appl Microbiol. 2018; 125: 1253–65.

CAS PubMed Статья PubMed Central Google ученый

44.

Таит К., Скиллман Л., Сазерленд И. В.. Эффективность бактериофага как метода уничтожения биопленок. Биообрастание. 2002; 18: 305–11.

Артикул Google ученый

45.

Сазерленд И.В., Хьюз К.А., Скиллман Л.С., Тейт К. Взаимодействие фага и биопленок. FEMS Microbiol Lett. 2004; 232: 1–6.

CAS PubMed Статья PubMed Central Google ученый

46.

Nzakizwanayo J, Hanin A, Alves DR, McCutcheon B, Dedi C, Salvage J, Knox K, Stewart B, Metcalfe A, Clark J. Бактериофаг может предотвратить образование инкрустации и закупорку мочевых катетеров Proteus mirabilis . Антимикробные агенты Chemother. 2016; 60: 1530–6.

CAS PubMed Central Статья Google ученый

47.

Fu W, Forster T., Mayer O, Curtin JJ, Lehman SM, Donlan RM. Бактериофаговый коктейль для предотвращения образования биопленок с помощью Pseudomonas aeruginosa на катетерах в модельной системе in vitro.Антимикробные агенты Chemother. 2010; 54: 397–404.

CAS PubMed Статья PubMed Central Google ученый

48.

Гомаа С., Серри Ф., Абделлатиф Х., Аббас Х. Удаление биопленок с множественной лекарственной устойчивостью Proteus mirabilis с использованием бактериофагов. Arch Virol. 2019; 164: 2265–75.

CAS PubMed Статья PubMed Central Google ученый

49.

Язди М, Бузари М, Гаеми Э.А. Выделение и характеристика литического бактериофага (vB_PmiS-TH) и его применение в комбинации с ампициллином против планктонных и биопленочных форм Proteus mirabilis , выделенных из инфекции мочевыводящих путей. J Mol Microbiol Biotechnol. 2018; 28: 37–46.

CAS PubMed Статья PubMed Central Google ученый

50.

Брумфилд Р.Дж., Морган С.Д., Хан А., Stickler DJ.Образование кристаллической бактериальной биопленки на мочевых катетерах патогенами мочевыводящих путей, продуцирующими уреазу: простой метод контроля. J Med Microbiol. 2009. 58: 1367–75.

CAS PubMed Статья PubMed Central Google ученый

51.

Wasfi R, Hamed SM, Amer MA, Fahmy LI. Биопленка Proteus mirabilis: разработка и терапевтические стратегии. Front Cell Infect Microbiol. 2020; 10: 414–4.

CAS PubMed PubMed Central Статья Google ученый

52.

Bahramian A, Shariati A, Azimi T, Sharahi JY, Bostanghadiri N, Gachkar L, Ghalavand Z, Chirani AS, Erfanimanesh S, Hashemi A. Первый отчет о металло-β-лактамазе-6 (NDM-6) в Нью-Дели среди Штаммы Klebsiella pneumoniae ST147, выделенные от диализных пациентов в Иране. Заразить Genet Evol. 2019; 69: 142–5.

CAS PubMed Статья PubMed Central Google ученый

53.

Tabassum R, Shafique M, Khawaja KA, Alvi IA, Rehman Y, Sheik CS, Abbas Z, ur Rehman S.Полный анализ генома фага Siphoviridae TSK1, показывающий потенциал удаления биопленки против Klebsiella pneumoniae . Научный доклад 2018; 8: 1–11.

Артикул CAS Google ученый

54.

Могхадам М., Шариати А., Миркалантари С., Кармостаджи А. Сложная генетическая область, придающая передаваемую устойчивость к антибиотикам в клинических изолятах с множественной лекарственной устойчивостью и чрезвычайно высокой лекарственной устойчивостью Klebsiella pneumoniae .New Microb New Infections 2020, 36: 100693

CAS Статья Google ученый

55.

Хорват М., Ковач Т., Кодериваппил С., Абрахам Х., Ракели Г., Шнайдер Г. Идентификация недавно выделенного литического бактериофага против капсульного типа К24, устойчивых к карбапенемам Изолятов Klebsiella pneumoniae . Sci Rep. 2020; 10: 1–11.

Артикул CAS Google ученый

56.

Sybesma W, Zbinden R, Chanishvili N, Kutateladze M, Chkhotua A, Ujmajuridze A, Mehnert U, Kessler TM. Бактериофаги как потенциальное лечение инфекций мочевыводящих путей. Front Microbiol. 2016; 7: 465.

PubMed PubMed Central Статья Google ученый

57.

Верма В., Харджай К., Чхиббер С. Характеристика Т7-подобного литического бактериофага Klebsiella pneumoniae B5055: потенциальный терапевтический агент.Современная микробиология. 2009; 59: 274–81.

CAS PubMed Статья PubMed Central Google ученый

58.

Zhang R, Zhao F, Wang J, Pei G, Fan H, Zhangxiang L, Mi Z, Shi T., Liu H, Tong Y. Биологические характеристики и анализ генома нового фага vB_KpnP_IME279, заражающего Klebsiella pneumoniae . Folia Microbiologica 2020; 65: 1–12.

Артикул CAS Google ученый

59.

Ко КС. Вклад генов полисахаридных капсул в вирулентность Klebsiella pneumoniae . Вирулентность. 2017; 8: 485.

PubMed Статья PubMed Central Google ученый

60.

Тан Д., Чжан И, Ченг М., Ле С, Гу Дж, Бао Дж, Цинь Дж, Гуо Х, Чжу Т. Характеристика изолятов Klebsiella pneumoniae ST11 и их взаимодействия с литическими фагами. Вирусы. 2019; 11: 1080.

CAS PubMed Central Статья Google ученый

61.

Hsu C-R, Lin T-L, Pan Y-J, Hsieh P-F, Wang J-T. Выделение бактериофага, специфичного для нового капсульного типа Klebsiella pneumoniae , и характеристика его полисахарид-деполимеразы. PloS ONE. 2013; 8: e70092.

CAS PubMed PubMed Central Статья Google ученый

62.

Бернаскони О.Дж., Дона В., Тингели Р., Эндимиани А. Активность трех коммерческих коктейлей бактериофагов in vitro против мультирезистентных бактерий Escherichia coli и Proteus spp.штаммы человеческого и нечеловеческого происхождения. J Glob Antimicrob Resist. 2017; 8: 179–85.

PubMed Статья PubMed Central Google ученый

63.

Pirnay J-P, Blasdel BG, Bretaudeau L, Buckling A, Chanishvili N, Clark JR, Corte-Real S, Debarbieux L, Dublanchet A, De Vos D. Требования к качеству и безопасности для продуктов устойчивой фаговой терапии. Pharm Res. 2015; 32: 2173–9.

CAS PubMed PubMed Central Статья Google ученый

64.

Vandenheuvel D, Lavigne R, Brüssow H. Терапия бактериофагом: достижения в стратегиях разработки и клинических испытаниях на людях. Анну Рев Вирол. 2015; 2: 599–618.

CAS PubMed Статья PubMed Central Google ученый

65.

Перейра С., Перейра С., Сантос Л., Клумпп Дж., Алмейда А. Потенциал фаговых коктейлей в инактивации клоак Enterobacter — исследование in vitro в буферном растворе и в образцах мочи. Virus Res.2016; 211: 199–208.

CAS PubMed Статья PubMed Central Google ученый

66.

Rigvava S, Tchgkonia I, Jgenti D, Dvalidze T, Carpino J, Goderdzishvili M. Сравнительный анализ биологических и физических свойств бактериофага Enterococcus faecalis vB_EfaS_GEC-EfScus_3 и бактериофага vB_EfaS_GEC-EfScus_3 и Streptocociomita_M Может J Microbiol. 2013; 59: 18–21.

CAS PubMed Статья PubMed Central Google ученый

67.

Хан Ш, Ли Д, Им Дж, На Х, Рю Ш, Юн Ч. Новый фаг Enterococcus vB_EfaS_HEf13 обладает широкой литической активностью в отношении клинических изолятов Enterococcus faecalis . Front Microbiol. 2019; 10: 2877.

PubMed PubMed Central Статья Google ученый

68.

Язди М., Бузари М., Гаеми Э.А. Выделение и характеристика потенциально нового фага Siphoviridae (vB_SsapS-104) с литической активностью в отношении Staphylococcus saprophyticus , выделенного из инфекции мочевыводящих путей.Folia microbiologica. 2019; 64: 283–94.

CAS PubMed Статья PubMed Central Google ученый

69.

Tan CAZ, Antypas H, Kline KA. Преодоление проблемы создания биопленок in vivo: дорожная карта для энтерококков. Curr Opin Microbiol. 2020; 53: 9–18.

CAS PubMed Статья PubMed Central Google ученый

70.

Saggu SK, Jha G, Mishra PC.Ферментативная деградация биопленки металлопротеазой из Microbacterium sp. SKS10. Фронт Bioeng Biotechnol. 2019; 7: 192.

PubMed PubMed Central Статья Google ученый

71.

Ян Д., Чен Й, Сунь Э, Хуа Л., Пэн З., Ву Б. Характеристика литического бактериофага vB_EfaS_PHB08, несущего эндолизин Lys08, против биопленок Enterococcus faecalis . Микроорганизмы. 2020; 8: 1332.

CAS PubMed Central Статья Google ученый

72.

Леман С.М., Донлан РМ. Бактериофаг-опосредованный контроль двухвидовой биопленки, образованной микроорганизмами, вызывающими катетер-ассоциированные инфекции мочевыводящих путей в модели мочевого катетера in vitro. Антимикробные агенты Chemother. 2015; 59: 1127–37.

PubMed PubMed Central Статья CAS Google ученый

73.

Кей М.К., Эрвин Т.К., Маклин Р.Дж., Арон Г.М. Экология бактериофагов в сообществах смешанных биопленок Escherichia coli и Pseudomonas aeruginosa .Appl Environ Microbiol. 2011; 77: 821–9.

CAS PubMed Статья PubMed Central Google ученый

74.

Macleod SM, Stickler DJ. Взаимодействие видов в кристаллических биопленках смешанного сообщества на мочевых катетерах. J Med Microbiol. 2007; 56: 1549–57.

PubMed Статья PubMed Central Google ученый

75.

Rostkowska OM, Międzybrodzki R, Miszewska-Szyszkowska D, Górski A, Durlik M.Лечение рецидивирующих инфекций мочевыводящих путей у 60-летнего реципиента трансплантата почки. Использование фаговой терапии. Transplant Infectious Disease 2020; 23: e13391.

Google ученый

76.

Schooley RT, Biswas B, Gill JJ, Hernandez-Morales A, Lancaster J, Lessor L, Barr JJ, Reed SL, Rohwer F, Benler S. Разработка и использование индивидуальных лечебных коктейлей на основе бактериофагов для лечения пациент с диссеминированной устойчивой инфекцией Acinetobacter baumannii.Противомикробные препараты и химиотерапия 2017, 61.

77.

Roach DR, Leung CY, Henry M, Morello E, Singh D, Di Santo JP, Weitz JS, Debarbieux L. успешная фаготерапия против возбудителя ОРВИ. Клеточный микроб-хозяин. 2017; 22: 38–47. e34.

CAS PubMed Статья PubMed Central Google ученый

78.

Уджмаджуридзе А., Чанишвили Н., Годердзишвили М., Лейтнер Л., Мехнерт Ю., Чхотуа А., Кесслер Т.М., Сибесма В.Адаптированные бактериофаги для лечения инфекций мочевыводящих путей. Front Microbiol. 2018; 9: 1832.

PubMed PubMed Central Статья Google ученый

79.

Nishikawa H, Yasuda M, Uchiyama J, Rashel M, Maeda Y, Takemura I, Sugihara S, Ujihara T, Shimizu Y, Shuin T. Бактериофаги, связанные с T, в качестве кандидатов для лечения Escherichia coli Инфекции мочевыводящих путей. Arch Virol. 2008; 153: 507–15.

CAS PubMed Статья PubMed Central Google ученый

80.

Tóthová Ľ, Celec P, Bábíčková J, Gajdošová J, Al-Alami H, Kamodyova N, Drahovska H, ​​Liptakova A, Turňa J, Hodosy J. Фаговая терапия вызванной Cronobacter инфекции мочевыводящих путей у мышей. Med Sci Monit. 2011; 17: BR173.

PubMed PubMed Central Статья Google ученый

Исследование на мышах показывает, что терапия бактериофагом может бороться с лекарственно-устойчивой Klebsiella pneumoniae — ScienceDaily

Использование вирусов вместо антибиотиков для приручения проблемных устойчивых к лекарствам бактерий является многообещающей стратегией, известной как бактериофаговая или «фаговая терапия».«Ученые из Национального института здравоохранения использовали два разных вируса бактериофага по отдельности, а затем вместе, чтобы успешно вылечить исследуемых мышей, инфицированных множественной лекарственной устойчивостью Klebsiella pneumoniae с последовательностью типа 258 (ST258). Бактерия K. pneumoniae ST258 включена в список CDC с наибольшей угрозой устойчивости к антибиотикам в Соединенных Штатах Высокие показатели заболеваемости и смертности связаны с невылеченными инфекциями, вызываемыми K. pneumoniae .

Фаговая терапия проводится уже около столетия, хотя убедительные исследования редки, а клинические результаты — из нескольких отчетов — дали смешанные результаты. В новой статье, опубликованной в журнале mBio , ученые NIH отмечают, что фаги сегодня вызывают большой интерес из-за нехватки альтернативных вариантов лечения лекарственно-устойчивых инфекций. Возникла бактериальная резистентность даже к новейшим комбинациям лекарств, в результате чего у некоторых пациентов остается мало эффективных вариантов лечения или вообще их нет.

В ходе исследования, проведенного в Гамильтоне, штат Монтана, в лабораториях Роки-Маунтин, входящей в Национальный институт аллергии и инфекционных заболеваний Национального института здоровья, и в сотрудничестве с Национальным институтом рака в Бетесде, штат Мэриленд, ученые завершили серию исследований на исследуемых мышах. инфицированы ST258. Они лечили мышей либо фагом P1, либо фагом P2, либо их комбинацией, причем все инъецировали в разное время после инфицирования ST258. В 2017 году ученые выделили фаги P1 и P2 из неочищенных сточных вод, которые они проверили на наличие вирусов, которые могут заразить ST258 — это показатель того, что фаги можно найти практически в любом месте.Фаги P1 и P2 представляют собой вирусы отряда Caudovirales, которые естественным образом инфицируют бактерии.

Каждый из трех экспериментальных режимов лечения помог мышам вылечиться от инфекции ST258. Ученые отметили, что предоставленная доза фага была менее важна для выздоровления, чем время, когда доза была получена. Мыши, получавшие лечение через 1 час после заражения, показали самое сильное выздоровление, за ними следовали мыши, которых лечили через восемь часов после заражения, а затем те, которые лечились через 24 часа. Все контрольные мыши, получавшие физиологический раствор, быстро заболели и умерли.

Ученые также проверили кровь и ткани обработанных фагом мышей на наличие бактерий ST258 и обнаружили, что бактерий было значительно меньше во все временные точки, независимо от используемого метода лечения, по сравнению с контрольными мышами.

К сожалению, ученые также обнаружили, что бактерии ST258, обнаруженные в крови и образцах тканей обработанных фагом мышей, уже начали развивать фагоустойчивость, и они продолжают исследовать это открытие. Группа также изучает, как результаты фаговой терапии сравниваются между образцами крови мышей, инфицированных ST258, и человеческой крови, и изучает, могут ли компоненты крови человека влиять на эффективность фага.

Это исследование представляет собой первый шаг в оценке использования фаговой терапии для лечения тяжелой инфекции K. pneumoniae ST258 у людей.

История Источник:

Материалы предоставлены NIH / Национальным институтом аллергии и инфекционных заболеваний . Примечание. Содержимое можно редактировать по стилю и длине.

Характеристика и составление твердых лекарственных форм нового бактериофага, литического против Klebsiella oxytoca

Аннотация

Цель

Для выделения и характеристики бактериофага, литического в отношении условно-патогенного микроорганизма Klebsiella oxytoca , и их составления в виде ряда твердых лекарственных форм для тестирования in vitro .

Методы и результаты

Мы сообщаем об выделении, геномной и функциональной характеристике нового бактериофага, литического для Klebsiella oxytoca , который не инфицирует близкородственный Klebsiella pneumoniae . Этот бактериофаг был приготовлен в виде суппозиториев и пастилок, и было показано, что он высвобождает и лизирует основные бактерии Klebsiella oxytoca в модели in vitro . Эти составы бактериофагов были стабильными в течение по меньшей мере 49 дней при 4 ° C.

Выводы

Успешный анализ этих составов in vitro предполагает, что они потенциально могут быть протестированы in vivo , чтобы определить, может ли такой терапевтический подход модулировать микробиом кишечника и контролировать избыточный рост Klebsiella oxytoca во время режимов антибактериальной терапии .

Значение и влияние исследования

В этом исследовании сообщается о новом бактериофаге, специфичном для Klebsiella oxytoca , который может быть приготовлен в виде твердых лекарственных форм, подходящих для потенциальной доставки при тестировании в качестве терапии для модуляции микробиома кишечника во время лечения антибиотиками.

Образец цитирования: Brown TL, Petrovski S, Hoyle D, Chan HT, Lock P, Tucci J (2017) Характеристика и составление твердых лекарственных форм нового литического бактериофага против Klebsiella oxytoca . PLoS ONE 12 (8): e0183510. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0183510

Редактор: Раймонд Шух, Университет Рокфеллера, США

Поступила: 5 апреля 2017 г .; Одобрена: 4 августа 2017 г .; Опубликован: 17 августа 2017 г.

Авторские права: © 2017 Brown et al.Это статья в открытом доступе, распространяемая в соответствии с условиями лицензии Creative Commons Attribution License, которая разрешает неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе при условии указания автора и источника.

Доступность данных: Все соответствующие данные находятся в документе и его файлах с вспомогательной информацией. Все файлы последовательностей доступны в базе данных NCBI (инвентарный номер KY780482).

Финансирование: Один из авторов (HTC) имеет коммерческую связь: работодатель HTC (Австралийские клинические лаборатории) предоставил поддержку в виде заработной платы этому автору, но не сыграл никакой дополнительной роли в дизайне исследования и сборе данных. и анализ, решение о публикации или подготовка рукописи.Конкретные роли всех авторов сформулированы в разделе вкладов авторов.

Конкурирующие интересы: Мы заявляем о коммерческой принадлежности: один из авторов (HTC) имеет коммерческую связь с Австралийскими клиническими лабораториями. Это не влияет на нашу приверженность политике PLOS ONE в отношении обмена данными и материалами.

Введение

Род Klebsiella представляет собой группу организмов, которые, несмотря на свой вклад в нормальную флору, способны вызывать серьезные заболевания у человека.Хотя люди могут переносить эти организмы в желудочно-кишечном тракте и верхних дыхательных путях без каких-либо симптомов, эти бактерии обладают способностью проникать и вызывать инфекции в этих, а также в ряде других тканей, включая нижние дыхательные пути, мочевыводящие пути, печень, центральную нервную систему. нервная система, кровообращение, сердечная ткань, ткань зубов и раны [1–6]. К видам Klebsiella , наиболее часто связанным с болезнями человека, относятся Klebsiella pneumoniae и Klebsiella oxytoca [7].Совсем недавно появились сообщения о том, что K . oxytoca является возбудителем значительной части (до 50%) геморрагического колита, ассоциированного с антибиотиками [8, 9], и диареи, ассоциированной с антибиотиками, и его диагноз может быть занижен из-за недостаточной чувствительности стандартных лабораторных питательных сред [10 ]. Модель K . oxytoca ассоциированные колит и диарея, следовательно, могут значительно снизить качество жизни пациентов и их способность переносить режимы антибиотиков [8, 9].

Фактор, который может способствовать развитию геморрагического колита и диареи, вызываемых K . oxytoca после лечения антибиотиками заключается в том, что эта бактерия, как известно, несет гены устойчивости к ряду антибиотиков [3, 4]. Его арсенал включает хромосомные гены бета-лактамаз OXY и механизмы оттока, такие как AcrAb [11], которые могут придавать устойчивость к цефалоспоринам более позднего поколения [4, 12]; и плазмидно-опосредованные гены устойчивости, такие как металло-бета-лактамазы, которые могут обеспечивать устойчивость к карбапенемам [13, 14].Среда, созданная под селективным давлением режимов антибиотиков, может обеспечить специфическое выживание и чрезмерный рост K . oxytoca , который, как известно, конститутивно выражает некоторые из этих механизмов лекарственной устойчивости [9].

Для облегчения симптомов колита и диареи, вызванных антибиотиками, изменение кишечной флоры представляет собой потенциально полезную терапевтическую цель. Хотя ранее это было продемонстрировано на животных, недавние исследования показали, что трансплантация фекальной микробиоты людям может минимизировать колонизацию кишечника устойчивыми к антибиотикам организмами после терапии антибиотиками [13, 15].Другие менее инвазивные подходы включают использование пробиотиков, но, несмотря на то, что они продемонстрировали свою эффективность и безопасность для минимизации диареи во время антибиотикотерапии [16, 17], они не обходятся без побочных реакций [17]. В настоящее время пробиотические модуляторы кишечной флоры широко используются, и их стоимость на мировом рынке оценивается примерно в 35 миллиардов долларов США [18]. Однако, поскольку на эти продукты не распространяются схемы фармацевтических льгот, финансовые издержки для отдельного пациента при использовании пробиотиков в высоких дозах являются значительными.

Возможной альтернативой описанным выше подходам к лечению антибиотико-ассоциированного колита и диареи является использование литических бактериофагов (фагов), вирусов, которые являются эндогенными киллерами бактериальных клеток [19, 20]. Применение фагов для лечения бактериальных инфекций является привлекательной перспективой. Во-первых, их действие очень специфично, так как они лизируют только своих бактериальных хозяев. Кроме того, они демонстрируют кинетику однократного попадания и автоматически «дозируются» в том смысле, что их репликация в месте инфекции приводит к заметному увеличению их титра [21].Важно отметить, что фаги обычно считаются безопасными с медицинской и экологической точки зрения, вызывают минимальные нарушения в сообществе аутогенных микробов и лизируют устойчивые к антибиотикам штаммы [21]. Эти последние две особенности особенно важны при потенциальной обработке K . окситока . В 2014 году Национальный институт здравоохранения США предположил, что использование фага является одним из наиболее инновационных и многообещающих компонентов стратегии борьбы с устойчивостью к противомикробным препаратам [22].

На сегодняшний день сообщается о разнообразных применениях фаговой терапии с различными лекарственными формами, от инъекций (кожных, внутривенных, подкожных, внутриплевральных) до жидкостей [23-25]. Мы и другие сообщили о потенциале полутвердых препаратов для доставки фагов [26–28]. Совсем недавно мы протестировали эффективность, стабильность и оптимальные условия хранения ряда полутвердых и твердых лекарственных форм для доставки литических фагов на модели in vitro [29]. В то время как несколько фагов, способных лизировать K .Сообщалось о oxytoca , они были размножены на K . pneumoniae и предложили иметь диапазон хозяев, который простирается до K . oxytoca [30, 31]. Здесь мы сообщаем об изоляции, а также геномной и функциональной характеристике нового и уникального фага, который размножался на K . oxytoca , и их последующее приготовление в виде твердых лекарственных форм, а именно пастилки (или лепешки) и суппозитория. Эти K .Затем были проанализированы составы фага oxytoca , и было показано, что они способны высвобождать фаг, так что происходит лизис нижележащего K . oxytoca бактерий в модели in vitro. Потенциальная польза таких составов при лечении индуцированного антибиотиком K . Обсуждается oxytoca опосредованный колит и диарея.

Материалы и методы

Бактериальные культуры и идентификация

Культуры Klebsiella ранее были выделены от людей для других целей.

Все образцы были получены с устного согласия, идентифицированы и обработаны в соответствии с этическим комитетом Университета Ла Троб. Никаких этических проблем не возникало, поскольку человеческий материал не был в центре внимания исследования, и полученные бактерии не были прослежены до человека.

Все культуры выращивали с использованием триптического соевого бульона и агара (Oxoid, Аделаида, Австралия). Культуры инкубировали при 37 ° C в анаэробных условиях с использованием системы Anaerogen (Oxoid). Для первоначальной идентификации культур использовалась матричная лазерная десорбционная ионизация-ионизация — время полета (MALDI-TOF).Изолированные одиночные колонии подвергали биохимическому тестированию и подтверждению идентификации с помощью системы Microbact 24E (Oxoid) в соответствии с инструкциями производителей. Для однозначной идентификации проводили ПЦР-амплификацию гена 16S рРНК каждого штамма бактерий с использованием универсальных праймеров 27F, 519R, 895F и 1492R [32–34]. Продукты ПЦР очищали с помощью набора для очистки ДНК Ultra Clean® (MO-BIO, Калифорния, США), а ДНК анализировали секвенированием по Сэнгеру в Австралийском центре исследования генома (Брисбен, Австралия).Уникальная особенность K . oxytoca , который не встречается в K . pneumoniae — это способность расщеплять пектин (через выведение полигалактуроназ), поэтому в качестве окончательной дифференциации между этими видами была проведена ПЦР для проверки наличия гена полигалактуроназы (pehX) [35].

Выделение и очистка фага

Газон К . oxytoca получали с использованием ватного тампона, затем 10 мкл образца сточных вод (собранных с завода по очистке сточных вод Бендиго; Бендиго, Австралия) помещали непосредственно на поверхность газона и планшет инкубировали в течение 2 дней.Если наблюдалось очищение, бляшка вырезалась вместе с агаром, ресуспендировалась в 500 мкл бульона и центрифугировалась (17000 x г в течение 5 минут), как описано ранее [36]. Супернатант удаляли, помещали в свежую пробирку и проводили 10-кратное серийное разведение фага. Каждое разведение наносили прямо на лужайку чувствительного K . oxytoca, бактерий и бляшек. Этот процесс очистки повторяли пять раз, чтобы убедиться, что каждая бляшка возникла в результате одного заражающего вириона.

Извлечение фаговой ДНК.

Как подробно описано ранее [26], пять мл лизата фага (> 10 ⁹ БОЕ мл ^-1 ) обрабатывали MgCl ₂ (конечная концентрация 5 мМ), ДНКазой I и РНКазой A (конечная концентрации 10 мкг / мл ^-1 ) в течение 30 минут при комнатной температуре. Вирионы фагов выделяли осаждением полиэтиленгликолем (ПЭГ) с использованием ПЭГ 8000 и хлорида натрия (конечные концентрации 10% мас. / Об. И 1 М соответственно) при 4 ° C в течение ночи.Осадок центрифугировали (17000 × г в течение 15 мин) и осадок ресуспендировали в воде, свободной от нуклеаз (Promega, Сидней, Австралия). Фаг подвергали воздействию протеиназы К (конечная концентрация 50 мкг / мл ^-1 ), EDTA (конечная концентрация 20 мМ) и додецилсульфата натрия (конечная концентрация 0,5% [об. / Об.]) При 55 ° C в течение 1 часа. Добавляли равный объем смеси фенол-хлороформ-изоамиловый спирт (29: 28: 1) и тщательно перемешивали перед центрифугированием при 12000 × g в течение трех минут.Водную фазу осторожно удаляли и добавляли равный объем изопропанола и 1/10 объема ацетата натрия (pH 5). Смесь оставляли при -20 ° C на ночь для осаждения ДНК. После центрифугирования (12000 × г в течение 10 мин) супернатант удаляли, осадок ДНК промывали 70% этанолом, сушили на воздухе и ресуспендировали в 30 мкл воды, свободной от нуклеаз (Promega, Сидней, Австралия).

Секвенирование и аннотация фагов.

Как подробно описано ранее [26], экстрагированная фаговая ДНК была подготовлена ​​для секвенирования с использованием набора для подготовки образцов ДНК Nextera® XT в соответствии с инструкциями производителя.Библиотеки ДНК секвенировали с использованием набора реагентов Miseq® V2 (300 циклов) на Illumina MiSeq® при считывании парных концов длиной 150 пар оснований. Последовательные чтения были собраны de novo с использованием рабочей среды CLC (Qiagen, версия 8.5.1), а открытые рамки считывания были предсказаны с помощью Glimmer (версия 3.02). ARAGORN [37] и tRNAscan-SE [38] были использованы для предсказания присутствия тРНК и тмРНК в последовательностях. Полная геномная нуклеотидная последовательность K . Фаг oxytoca был депонирован в GenBank под регистрационным номером KY780482.

Просвечивающая электронная микроскопия

Фаговым частицам позволяли адсорбироваться на формварных медных решетках с размером ячеек 400 меш и покрытых углеродом медных решетках (ProSciTech, Таунсвилл, Австралия) в течение 5 минут. Избыток раствора удаляли с помощью фильтровальной бумаги перед тем, как сетки подвергались отрицательному окрашиванию с помощью трех 20-секундных нанесений 2% [вес / объем] уранилацетата (Sigma, Сидней, Австралия) с удалением лишнего пятна на фильтровальной бумаге после каждого нанесения. Сетки сушили на воздухе в течение 20 минут перед исследованием под просвечивающим электронным микроскопом (ТЕМ) JEOL JEM-2100, работающим при ускоряющем напряжении 200 кВ.Цифровые изображения высокого разрешения записывали на широкоугольную камеру Gatan Orius SC200D 1 с программным обеспечением для визуализации Gatan Microscopy Suite и Digital Micrograph (версия 2.32.888.0). Вирусы измеряли с помощью программного обеспечения ImageJ.

К . oxytoca Диапазон хозяев фага

Чтобы оценить, может ли фаг лизировать другие штаммов Klebsiella , была завершена серия серийных разведений исходного материала фага (~ 10 ⁹ БОЕ мл ^-1 ). 10 мкл каждого разведения наносили непосредственно на газонную культуру штаммов Klebsiella , которые были идентифицированы, как описано выше (таблица 1). Klebsiella oxytoca (ATCC 13182) и Klebsiella pneumoniae (ATCC 13883), полученные из Американской коллекции типовых культур (Вашингтон, округ Колумбия, США), также были использованы в экспериментах с диапазоном хозяев, а также Pseudomonas aeruginosa и Escherichia coli . (которые были частью нашей коллекции лабораторных культур). Наблюдение за бляшками на газонной культуре показало, что фаг был способен инфицировать и лизировать хозяина. PFU (количество на мл) для каждого штамма также сравнивали с исходным хозяином, чтобы определить относительную эффективность посева.

Кривая роста в одну ступень

Как подробно описано ранее [26], запас фага ~ 10 ⁹ БОЕ / мл ^-1 был добавлен в бульонную культуру экспоненциальной фазы K . oxytoca (хозяин размножения) с множественностью заражения (MOI) 0,1. После 10-минутного периода адсорбции [31] клетки дважды промывали бульоном и ресуспендировали в 1 мл свежего бульона. Чтобы свести к минимуму количество неадсорбированного фага, эту культуру затем разводили 1: 100.Каждые 10 минут отбирали 100 мкл образцов для расчета концентраций жизнеспособных фагов (БОЕ мл ^-1 ) [31, 39].

К . oxytoca Стабильность фага в моделированном желудочном соке и растворе солей желчных кислот

Для тестирования стабильности фага в моделируемых желудочных условиях использовали запас фага с концентрацией ~ 10 ⁹ БОЕ / мл ^-1 в моделированной желудочной жидкости [40] с 0,32% (вес / объем) пепсина при pH 2,5. Каждые 15 минут отбирали образцы по 100 мкл для расчета концентраций жизнеспособных фагов (БОЕ мл ^-1 ).Тот же эксперимент был проведен с 0,5% солями желчных кислот (OXOID) в кишечном тестовом растворе [40] при pH 6,8 для определения жизнеспособности фага при воздействии эмульгирующих солей желчных кислот.

К . oxytoca рецептура фага в суппозиториях

Суппозитории были изготовлены в соответствии с установленными рецептурами [41] с запасом фага PBS в концентрации более 10 ⁹ БОЕ / мл ^-1 . Суппозитории готовили следующим образом: порошок желатина и очищенную воду нагревали при 100 ° C до растворения перед добавлением глицерина в соответствии с рецептурой.Затем продукт охлаждали до 40 градусов Цельсия и добавляли фаг до конечной концентрации 4,5 × 10 ⁸ БОЕ на грамм препарата. Состав помещали в силиконовые формы объемом 1,2 мл. Чтобы проверить, способен ли фаг лизировать их бактерии-хозяева, суппозиторий разрезали вдоль его продольной оси, чтобы образовались две равные половины, и затем их помещали плоской стороной вниз на лужайку с агаром K . окситока бактерий. Планшеты инкубировали при 37 ° C в течение 2 дней, и любой лизис бактерий в присутствии суппозитория обозначался прозрачной зоной.

К . oxytoca Состав фага в виде пастилок

троше были изготовлены в соответствии с формулой, разработанной профессиональными химиками-компаундами Австралии. Силка-гель (микронизированный), порошок стевиозида, порошок гуммиарабика и безводный порошок лимонной кислоты растирали и просеивали перед добавлением к расплавленной основе полиэтиленгликоля (основа PEG, PCCA). Композицию перемешивали до гомогенного состояния, охлаждали и добавляли фаг до конечной концентрации 4.5×10 ⁸ БОЕ на грамм препарата. Продукт разливали в формы для пастилок и давали ему застыть. Затем пасты были протестированы, положив их на лужайку K . окситока бактерий. Планшеты инкубировали при 37 ° C в течение 2 дней, и о любом лизисе бактерий в присутствии пасты указывала прозрачная зона.

Стабильность

K . oxytoca Фаговые суппозитории и пастилки

После их приготовления фаговые суппозитории и пастилки хранили при 4 ° C в защищенном от света месте.Качественная оценка способности фагов убивать K . oxytoca бактерий определяли с недельными интервалами, как описано выше. Для пессария также проводилась количественная оценка. Пессарий фага солюбилизировали в предварительно нагретом PBS (37 ° C) при разведении 1: 10, а затем использовали для оценки концентрации жизнеспособного фага (PFU мл ^-1 ). Такое количественное определение было невозможно с помощью фаговой пасты, так как во время процесса солюбилизации происходило осаждение материала.

Результаты

Идентификация

штаммов Klebsiella

Пять К . oxytoca и пять K . pneumoniae. штаммов были идентифицированы, как подробно описано в таблице 1. Биохимический анализ (Microbact 24E) показал, что все штаммы могут использовать глюкозу, маннит, ксилозу, цитрат, инозит, рамнозу, сахарозу, лактозу, арабинозу, рафинозу и салицин в качестве единственного источника углерода. . Все штаммы были положительными по лизиндекарбоксилазе, продукции ацетоина (реакция VP), ONPG и гидролизу уреазы. К . штаммов окситока были индол-положительными, тогда как K . pneumoniae штаммов оказались отрицательными. ПЦР-амплификация гена pehX наблюдалась только в K . oxytoca пятен (таблица 1).

Выделение фага и его генома

После скрининга образцов с очистных сооружений на KLEB010, одном из K , были обнаружены видимые литические бляшки. штаммов окситока, штаммов, идентифицированных в этом исследовании.Эти бляшки были менее одного миллиметра в диаметре, без видимого «ореола» или других повреждений окружающей бактериальной лужайки. Бляшки очищали и получали запас размножением на KLEB010. ДНК была извлечена и секвенирована (с охватом более 600 раз) с использованием платформы для секвенирования следующего поколения Illumina MiSeq, и считанные данные были собраны de novo с помощью программ CLC Genomics workbench. Это K . Фаг oxytoca , названный KOX1, имел геном из 50 526 пар оснований в длину (рис. 1).KOX1 имел кольцевой геном дцДНК со средним содержанием GC 51,2%, что ниже, чем у его хозяина K . oxytoca (~ 55%). На основе последовательности была предсказана 81 открытая рамка считывания (ORF) (см. Фиг. 1). Анализ ORF показал, что только 30% (25 из 81) из них могут быть отнесены к предполагаемой функции (см. Таблицу 2). Для нашей презентации ORF были помечены от предполагаемых терминаз, и гены появились в модульной структуре (рис. 1). Все ORF с предполагаемой приписанной функцией, включая терминазы, портальные белки, структурные белки хвоста, белки лизиса, рекомбиназы и гены манипуляции с ДНК, показали близкую гомологию с ранее выделенным фагом Klebsiella (таблица 2).В последовательности не было обнаружено ни тРНК, ни тмРНК.

Рис. 1. Геном KOX1.

Стрелки указывают ORF, предсказанные на основе последовательности, и направление их трансляции. Предполагаемая функция и номер ORF отмечены. Красные стрелки указывают на предполагаемые гены упаковки, оранжевые стрелки — на предполагаемые структурные гены морфологии капсида и хвоста, синие стрелки — на предполагаемые гены манипуляции ДНК, а зеленые стрелки — на предполагаемые гены лизиса. Серые стрелки — это ORF без приписанной функции.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0183510.g001

Характеристики KOX1

Просвечивающая электронная микроскопия KOX1 показала, что он принадлежит к семейству Myoviridae с вытянутой икосаэдрической головкой (110 ± 2 нм на 80 ± 2 нм) и сократительным хвостом (115 ± 2 нм), располагая фаг в порядке Caudovirales ( Рис 2). KOX1 оказался литическим только на K . oxytoca и не лизировал K . pneumoniae , Escherichia coli или Pseudomonas aeruginosa штаммов. Фаг был способен лизировать пять из шести K . штаммов окситока , выделенных в этом исследовании, это KLEB003, KLEB004, KLEB008 и KLEB010, а также ATCC получил K . окситока . Эффективность нанесения на KLEB008 и ATCC 13182 K . oxytoca был равен таковому у исходного хозяина (KLEB010; ~ 10 ⁸ БОЕ мл ^-1 ), тогда как на KLEB003 и KLEB004 эффективность налета была на порядок меньше (~ 10 ⁷ БОЕ мл ^-1 ).При подавлении роста на К . pneumoniae штаммов (ATCC 13883 и KLEB001) наблюдались при высоких титрах фагов, образование бляшек не происходило. Одностадийные эксперименты по выращиванию показали, что KOX1 имел латентный период 20 минут, а популяционный всплеск составлял 3,0×10 ⁸ БОЕ мл ^-1 , что соответствовало размеру всплеска 35 БОЕ на инфицированную бактерию (рис. 3; таблица S1). . Наши наблюдения латентного периода совпадают с ранее продемонстрированными на K . oxytoca [30, 31]. Однако ранее сообщенные размеры пакетов (измеренные в БОЕ на инфицированную клетку) были ниже, чем мы оцениваем здесь [30].

Стабильность фагов в симулированном желудочном соке и растворе солей желчных кислот

Как показано на фиг. 4, даже после 90-минутного воздействия на жизнеспособность фагов минимально влияли желчные соли. При немедленном воздействии искусственной желудочной жидкости (pH 2,5) жизнеспособность фагов снижалась на два порядка. В этих условиях наблюдалось устойчивое уменьшение количества фагов, пока после 90-минутного воздействия количество жизнеспособных фагов не упало до менее 10 ⁴ БОЕ / мл ^-1 (Фиг.4; Таблица S2).

Рис. 4. Стабильность KOX1 в моделированном желудочном соке и растворе солей желчных кислот.

Стабильность во времени для каждого из них обозначена пунктирными и сплошными линиями соответственно. По оси ординат отложена логарифмическая шкала, где точки данных представляют собой среднее значение трех выборок. Поскольку измерения для каждого из трех повторений были очень похожи, было невозможно адекватно представить планки ошибок для стандартного отклонения на рисунке (см. Значения в таблице S2).

https: // doi.org / 10.1371 / journal.pone.0183510.g004

Состав KOX1 в твердые лекарственные формы и способность лизировать

K . окситока in vitro Фаг

KOX1 готовили в виде суппозиториев и пастилок, которые помещали на лужайки с K . oxytoca бактерий на культуральных чашках. Оба препарата были способны высвобождать фаг, чтобы лизировать лежащие в основе бактерии (фиг. 5 и фиг. 6). Эти составы тестировали еженедельно, и при хранении при 4 ° C фаговые суппозитории сохраняли литическую активность в течение по меньшей мере 49 дней (фиг. 7), а фаговая лепешка сохраняла литическую активность в течение 56 дней (как визуализировано путем очистки in vitro).Фиг. 7 показывает, что через 49 дней после приготовления суппозитории содержали жизнеспособный фаг в концентрации более 10 ⁷ БОЕ / мл ^-1 (таблица S3).

Рис. 5. Литическая активность фага KOX1 в суппозитории.

Левая сторона чашки (A) показывает влияние на рост, когда контрольный суппозиторий без фага помещается на бактериальную лужайку. Правая сторона планшета (B) показывает влияние на рост бактерий, когда суппозиторий содержит фаг в конечной концентрации 4.5×10 ⁸ БОЕ на грамм препарата помещается на газон. Хотя в (A) наблюдался некоторый эффект, скорее всего, из-за бактериального нарушения при размещении суппозитория, литическая активность фага четко наблюдается у B.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0183510.g005

Рис. 6. Литическая активность фага KOX1 в кубке.

Левая сторона чашки (A) показывает влияние на рост, когда контрольную пасту без фага помещают на бактериальный газон.Правая сторона чашки (B) показывает влияние на рост бактерий, когда пасту, приготовленную с фагом в конечной концентрации 4,5 × 10 ⁸ БОЕ на грамм композиции, помещают на лужайку. В то время как в (A) наблюдался некоторый эффект, скорее всего, из-за бактериального нарушения при размещении троше, литическая активность фага четко наблюдается у B.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0183510.g006

Обсуждение

Целью этого исследования было выделить и охарактеризовать фаг, который был литическим против Klebsiella oxytoca , и составить из них лекарственные формы, которые потенциально могут быть протестированы для контроля микробиома кишечника во время антибиотикотерапии.Хотя дифференциация между Klebsiella видов pneumoniae и oxytoca не всегда проста [35, 42], в текущем исследовании мы использовали данные полной последовательности гена 16S, биохимические испытания Microbact®, анализ MALDI-TOF. и ПЦР-амплификация гена pehX из изолированных штаммов для получения окончательной идентификации. Фаг, который, как сообщалось, на сегодняшний день нацелен на Klebsiella , демонстрирует разнообразную морфологию, включая Podoviradae (51% изолятов), Myoviridae (33% изолятов) и Siphoviridae (16% изолятов) ( База данных нуклеотидов NCBI, https: // www.ncbi.nlm.nih.gov/nucleotide/). Из тех, которые, как сообщается, нацелены на тыс. . oxytoca , большинство из них принадлежит к семейству Myoviridae с размерами геномов от 168 до 174 Кб [30, 31, 43]. KOX1, уникальный K . Выделенный здесь литический фаг oxytoca принадлежит к семейству Myoviridae , но имеет гораздо меньший геном — примерно 50,5 Кб. Уникальность этого фага подчеркивается тем фактом, что менее 30% его ORF имеют сходство с генами с какой-либо известной функциональностью.

Хотя сообщалось, что фаг, выделенный и литический против K . pneumoniae были способны лизировать штаммы K . oxytoca [30, 31, 43], KOX1 специфичен для K . oxytoca и не лизировал K . Здесь протестировано pneumoniae штаммов. Тем не менее, KOX1 не обошелся без некоторой активности по сравнению с K . pneumoniae штаммов ATCC 13883 и KLEB001. В данном случае, хотя при высоких титрах фагов имел место некоторый бактериальный лизис, образование бляшек не происходило. К . pneumoniae штаммов, которые тесно связаны с выделенными и используемыми здесь (например, обозначенные номером доступа CP014294), по-видимому, не содержат консервативную кассету гена BREX или элементы пути Argonaute [44], оба из которых сообщают устойчивость к ряду фагов. Одна из возможностей состоит в том, что фаг KOX1 связан с K . pneumoniae и инициировал лизис, но затем феномен абортивной инфекции впоследствии ограничил продукцию фагового потомства до такой степени, что бляшки не наблюдались.Кроме того, есть некоторые свидетельства того, что системы адаптивного иммунитета CRISPR / Cas присутствуют в примерно K . pneumoniae штаммов, потенциально ограничивающих фаговую инфекцию [45].

Мы показали здесь, что фаг KOX1 может быть включен в твердые лекарственные формы, такие как пастилки и суппозитории, и что эти составы стабильно сохраняются в течение периода до 49 и 56 дней, соответственно, при 4 ° C. Эти фаговые композиции продемонстрировали литической способности in vitro против К . oxytoca до этого периода. Количественный анализ фагового суппозитория показал, что более 10 ⁷ жизнеспособных фагов можно выделить после 49 дней хранения. Такие составы потенциально могут быть протестированы для использования при лечении геморрагического колита, связанного с антибиотиками, и диареи, вызванной K . окситока . Хотя эти патологии кишечника обратимы и симптомы исчезают после прекращения терапии антибиотиками [4, 6, 12], в этот период наблюдается значительное влияние на качество жизни пациентов [4, 12], и это потенциально усугубляется режимами антибиотиков, которые продолжайте в течение продолжительных периодов времени.Кроме того, стоимость для пациента продуктов для модуляции кишечной флоры во время терапии антибиотиками, таких как пробиотики, является значительной, в то время как такие процедуры, как трансплантация фекальной микробиоты, являются инвазивными и еще находятся в зачаточном состоянии. Прием пастилок или введение суппозиториев с К . Литические фаги oxytoca в качестве лекарственного средства могут оказаться полезным способом модуляции кишечной флоры и помочь в уменьшении чрезмерного роста устойчивых к антибиотикам K . штаммов окситока , во время антибактериальной терапии. С этой целью мы показали, что фаг KOX1 способен выживать в средах, имитирующих желудочную камеру. В частности, наши эксперименты показали, что после 30-минутного воздействия этих условий, в течение которых можно ожидать, что фаг прошел через желудок, если проглотил его через кашу, все еще есть значительные числа (10 ^5– 10 ⁶ БОЕ мл ^-1 ) жизнеспособного фага. Поскольку низкий рН желудочного сока вносит значительный вклад в снижение количества фагов, совместное введение терапии ингибиторами протонной помпы, такими как омепразол, может быть использовано для повышения жизнеспособности фагов.Такие лекарства обычно используются при желудочном рефлюксе и обладают способностью снижать кислотность желудка до pH 6 [46]. Этот подход может свести на нет необходимость микрокапсулирования фага в микросферы, что было предложено как средство создания фага для улучшения жизнеспособности после прохождения через желудочную камеру [47]. После прохождения жизнеспособных фагов через желудок они столкнутся с желчными солями в двенадцатиперстной кишке, но, как мы показали здесь, такие эмульгирующие агенты вряд ли окажут на них неблагоприятное воздействие.Если устный путь доставки для K . oxytoca с помощью пастилок оказывается затруднительным, тогда введение фага в виде суппозитория, как мы сформулировали здесь, может быть предпочтительным.

Заключение

Мы сообщаем здесь о выделении и характеристике уникального литического фага для K . oxytoca , из которого можно стабильно составлять твердые лекарственные формы. Литическая способность in vitro этих составов по сравнению с K . oxytoca бактерий сохраняется не менее 49 дней при хранении при 4 ° C. Это исследование может послужить основой для клинических испытаний этих K . Препараты фага oxytoca для модуляции кишечной микробиоты во время антибиотикотерапии и, таким образом, уменьшения эффектов со стороны желудочно-кишечного тракта, связанных с K . oxytoca разрастание.

Благодарности

Мы хотим поблагодарить LIMS Bioimaging Facility за использование электронного микроскопа.

Ссылки

1. 1. Podschun R, Ullmann U. Klebsiella spp. как внутрибольничные возбудители: эпидемиология, систематика, методы типирования, факторы патогенности. Clin Microbiol Rev.1998; 11 (4): 589–603. Epub 1998/10/10. pmid: 9767057; Идентификатор PubMed Central PMCID: PMCPMC88898.
2. 2. Биле Л. Р., Коттро Дж. М., Томпсон Д. Д., Филипек Р. Л., О’Доннелл Дж. Н., Ласко TM и др. Исходы и факторы риска смертности среди пациентов, получавших карбапенемы от Klebsiella spp.бактериемия. PLoS One. 2015; 10 (11): e0143845. Epub 2015/12/01. pmid: 26618357; Идентификатор PubMed Central PMCID: PMCPMC4664260.
3. 3. Фудзита А., Кимура К., Йокояма С., Джин В., Вачино Дж., Ямада К. и др. Характеристика устойчивой к пиперациллину / тазобактаму Klebsiella oxytoca , выздоровевшей после внутрибольничной вспышки. PLoS One. 2015; 10 (11): e0142366. Epub 2015/11/06. pmid: 26539828; Идентификатор PubMed Central PMCID: PMCPMC4634934.
4. 4. Ориэл Б.С., Чен К., Вонг К., Итани К.М.Влияние выбора антисептического средства для рук и популяционных характеристик на возбудителей инфекции в области хирургического вмешательства. Хирургические инфекции. 2016. Epub 2016/09/24. pmid: 27661850.
5. 5. Энрикес Л.С., де Брито LC, Таварес В.Л., Телес Р.П., Виейра Л.К., Телес ФР и др. Анализ микробной экосистемы при инфекциях корневых каналов, резистентных к эндодонтическому лечению. Журнал эндодонтии. 2016; 42 (8): 1239–45. Epub 2016/07/06. pmid: 27377440.
6. 6. Уллах С., Эльбита О., Абдельгани М., Тахир Х., Тули П., Алкилани В.З. и др. Klebsiella oxytoca Эндокардит с полной блокадой сердца. Журнал исследовательской медицины, отчеты о клинических случаях. 2016; 4 (3): 2324709616663232. Epub 2016/09/17. pmid: 27635410; Идентификатор PubMed Central PMCID: PMCPMC5011305.
7. 7. Асенсио А., Оливер А., Гонсалес-Диего П., Бакеро Ф., Перес-Диас Дж. К., Рос П. и др. Вспышка полирезистентного штамма Klebsiella pneumoniae в отделении интенсивной терапии: использование антибиотиков как фактор риска колонизации и инфекции. Клинические инфекционные болезни: официальное издание Общества инфекционных болезней Америки.2000. 30 (1): 55–60. Epub 2000/01/05. pmid: 10619733.
8. 8. Hogenauer C, Langner C, Beubler E, Lippe IT, Schicho R, Gorkiewicz G, et al. Klebsiella oxytoca как возбудитель антибиотико-ассоциированного геморрагического колита. Медицинский журнал Новой Англии. 2006. 355 (23): 2418–26. Epub 2006/12/08. pmid: 17151365.
9. 9. Йылмаз М., Билир Ю.А., Айгюн Г., Эрзин Ю., Озтюрк Р., Челик А.Ф. Проспективное обсервационное исследование кровавой диареи, связанной с приемом антибиотиков: отчет о 21 случае из Турции с долгосрочным наблюдением.Европейский журнал гастроэнтерологии и гепатологии. 2012. 24 (6): 688–94. Epub 2012/03/22. pmid: 22433794.
10. 10. Cheng VC, Yam WC, Tsang LL, Yau MC, Siu GK, Wong SC и др. Эпидемиология диареи, ассоциированной с Klebsiella oxytoca , выявляемой цитратным агаром Симмонса с добавлением инозита, триптофана и солей желчных кислот. J Clin Microbiol. 2012; 50 (5): 1571–9. Epub 2012/02/24. pmid: 22357507; Идентификатор PubMed Central PMCID: PMCPMC3347154.
11. 11. Mazzariol A, Zuliani J, Cornaglia G, Rossolini GM, Fontana R.Система AcrAB Efflux: экспрессия и вклад в устойчивость к фторхинолонам у Klebsiella spp. Антимикробные агенты Chemother. 2002. 46 (12): 3984–6. Epub 2002/11/19. pmid: 12435706; Идентификатор PubMed Central PMCID: PMCPMC132751.
12. 12. Kluytmans-van den Bergh MF, Rossen JW, Bruijning-Verhagen PC, Bonten MJ, Friedrich AW, Vandenbroucke-Grauls CM, et al. Полногеномное мультилокусное типирование последовательностей энтеробактерий, продуцирующих бета-лактамазы расширенного спектра. J Clin Microbiol.2016; 54 (12): 2919–27. Epub 2016/09/16. pmid: 27629900; Идентификатор PubMed Central PMCID: PMCPMC5121380.
13. 13. Гарсия-Фернандес С., Морозини М.И., Кобо М., Форуни Дж. Р., Лопес-Санроман А., Кобо Дж. И др. Эрадикация в кишечнике VIM-1, продуцирующего ST9 Klebsiella oxytoca , после трансплантации фекальной микробиоты при диарее, вызванной гипервирулентным штаммом R027 Clostridium difficile . Диагностическая микробиология и инфекционные болезни. 2016; 86 (4): 470–1. Epub 2016/11/05. pmid: 27712927.
14. 14. Шимада Н., Каяма С., Шигемото Н., Хисацунэ Дж., Кувахара Р., Нишио Х. и др. Полная нуклеотидная последовательность pKOI-34, плазмиды IncL / M, несущей blaIMP-34 в Klebsiella oxytoca , выделенной в Японии. Антимикробные агенты Chemother. 2016; 60 (5): 3156–62. Epub 2016/02/24. pmid: 26
0; Идентификатор PubMed Central PMCID: PMCPMC4862478.
15. 15. Галло А., Пассаро Г., Гасбаррини А., Ландольфи Р., Монтальто М. Модуляция микробиоты как лечение воспалительных заболеваний кишечника: последнее время.Всемирный гастроэнтерологический журнал. 2016; 22 (32): 7186–202. Epub 2016/09/14. pmid: 27621567; Идентификатор PubMed Central PMCID: PMCPMC4997632.
16. 16. Эванс М., Салевски Р.П., Кристман М.С., Жирар С.А., Томпкинс Т.А. Эффективность Lactobacillus helveticus и Lactobacillus rhamnosus для лечения антибиотико-ассоциированной диареи у здоровых взрослых: рандомизированное двойное слепое плацебо-контролируемое исследование. Британский журнал питания. 2016; 116 (1): 94–103. Epub 2016/05/14.pmid: 27169634.
17. 17. Дидари Т., Солки С., Мозаффари С., Никфар С., Абдоллахи М. Систематический обзор безопасности пробиотиков. Экспертное мнение Drug Saf. 2014; 13 (2): 227–39. Epub 2014/01/11. pmid: 24405164.
18. 18. Grand View Research. Анализ рынка пробиотиков по применению (пробиотические продукты и напитки (молочные продукты, немолочные продукты, крупы, выпечка, ферментированные мясные продукты, сухие корма), пробиотические пищевые добавки (пищевые добавки, пищевые добавки, специальные питательные вещества, детские смеси), животные кормовые пробиотики), по конечному применению (пробиотики для человека, пробиотики животного происхождения) и по прогнозу до 2024 г.Отчеты об исследованиях нутрицевтиков и функциональных пищевых продуктов: 2016 978-1-68038-093-4.
19. 19. Сулаквелидзе А, Алавидзе З., Моррис Дж. Дж. Младший. Бактериофаговая терапия. Антимикробные агенты Chemother. 2001. 45 (3): 649–59. pmid: 11181338
20. 20. Чан Б.К., Абедон С.Т., Лок-Каррильо С. Фаговые коктейли и будущее фаговой терапии. Future Microbiol. 2013. 8 (6): 769–83. pmid: 23701332
21. 21. Loc-Carrillo C, Abedon ST. Плюсы и минусы фаготерапии. Бактериофаг.2011; 1 (2): 111–4. pmid: 22334867
22. 22. НАЦИОНАЛЬНЫЕ ИНСТИТУТЫ ЗДРАВООХРАНЕНИЯ США. Программа NIAID по устойчивости к антибактериальным препаратам: текущее состояние и будущие направления, 2014 г. [26 марта 2016 г.]. Доступно по адресу: http://www.niaid.nih.gov/topics/antimicrobialresistance/documents/arstrategicplan2014.pdf.
23. 23. Абедон С.Т., Кул С.Дж., Бласдел Б.Г., Куттер Э.М. Фаговое лечение инфекций человека. Бактериофаг. 2011; 1 (2): 66–85. pmid: 22334863
24. 24. Кларк-младший. Бактериофаготерапия: история и перспективы.Будущий Virol. 2015; 10 (4): 449–61.
25. 25. Куттер Э., Де Вос Д., Гвасалия Г., Алавидзе З., Гогохия Л., Кул С. и др. Фаготерапия в клинической практике: лечение инфекций человека. Curr Pharm Biotechnol. 2010. 11 (1): 69–86. pmid: 20214609
26. 26. Браун Т.Л., Петровски С., Дайсон З.А., Севиур Р., Туччи Дж. Состав бактериофага в полутвердом препарате для контроля роста Propionibacterium acnes . PLoS One. 2016; 11 (3): e0151184. Epub 2016/03/11.pmid: 26964063; Идентификатор PubMed Central PMCID: PMCPMC4786141.
27. 27. Чен Л-К, Лю И-Л, Ху А, Чанг К-К, Линь Н-Т, Лай М-Дж и др. Потенциал бактериофага ΦAB2 в качестве агента биологической борьбы с окружающей средой для борьбы с множественной лекарственной устойчивостью Acinetobacter baumannii . BMC Microbiol. 2013; 13 (1): 154.
28. 28. O’Flaherty S, Ross R, Meaney W., Fitzgerald G, Elbreki M, Coffey A. Потенциал поливалентного антибиотика Staphylococcus Bacteriophage K для борьбы с устойчивыми к антибиотикам Staphylococci из больниц.Appl и Environ Microbiol. 2005. 71 (4): 1836–42.
29. 29. Brown TL, Thomas T, Odgers J, Petrovski S, Spark MJ, Tucci J. Бактериофаг, приготовленный в виде ряда полутвердых и твердых лекарственных форм, поддерживает литическую способность против изолированных кожных и условно-патогенных бактерий полости рта. J Pharm Pharmacol. 2016. Epub 2016/12/30. pmid: 28033675.
30. 30. Kęsik-Szeloch A, Drulis-Kawa Z, Weber-Dąbrowska B, Kassner J, Majkowska-Skrobek G, Augustyniak D, et al. Характеристика биологии новых литических бактериофагов, инфицирующих множественную лекарственную устойчивость Klebsiella pneumoniae .Вирол Дж. 2013; 10 (1): 100. pmid: 23537199
31. 31. Карумидзе Н., Кусрадзе И., Ригвава С., Годердзишвили М., Раджакумар К., Алавидзе З. Выделение и характеристика литических бактериофагов Klebsiella pneumoniae и Klebsiella oxytoca . Current Microbiol. 2013; 66 (3): 251–8. pmid: 23143289
32. 32. Тернер С., Прайер К.М., Мяо В.П., Палмер Дж. Д. Изучение глубоких филогенетических взаимоотношений между цианобактериями и пластидами с помощью анализа последовательности малых субъединиц рРНК.Журнал эукариотической микробиологии. 1999. 46 (4): 327–38. Epub 1999/08/26. pmid: 10461381.
33. 33. Hodkinson BP, Lutzoni F. Микробиотический обзор лишайниковых бактерий выявил новое происхождение от Rhizobiales. Симбиоз. 2009. 49 (3): 163–80.
34. 34. Lane DJ. Секвенирование 16S / 23S рРНК. В: Stackebrandt E, Goodfellow M, редакторы. Методы нуклеиновых кислот в бактериальной систематике. Нью-Йорк: Джон Уайли и сыновья; 1991. стр. 115–75.
35. 35. Ковтунович Г., Литвиненко Т., Негруцкая В., Лар О, Брисс С., Козыровская Н.Идентификация Klebsiella oxytoca с использованием специального анализа ПЦР, нацеленного на ген полигалактуроназы pehX. Res Microbiol. 2003. 154 (8): 587–92. Epub 2003/10/07. pmid: 14527660.
36. 36. Петровски С., Севиур Р. Дж., Тиллетт Д. Последовательность генома и характеристика бактериофага Tsukamurella TPA2. Приложение Environ Microbiol. 2011; 77 (4): 1389–98.
37. 37. Laslett D, Canback B. ARAGORN, программа для обнаружения генов тРНК и генов тмРНК в нуклеотидных последовательностях.Nucleic Acids Res. 2004. 32 (1): 11–6. pmid: 14704338
38. 38. Шаттнер П., Брукс А.Н., Лоу TM. Веб-серверы tRNAscan-SE, snoscan и snoGPS для обнаружения тРНК и snoRNA. Nucleic Acids Res. 2005; 33 (приложение 2): W686 – W9.
39. 39. Адамс MH. Бактериофаги. Нью-Йорк: издательство Interscience; 1959.
40. 40. Фармакопейная конвенция США. Национальный формуляр Фармакопеи США на 2017 г .: USP 40 NF 35. США: Фармакопея США; 2016 г.
41. 41. Сансом Л., редактор. Австралийский фармацевтический формуляр и справочник. 23-е изд. Канберра: Фармацевтическое общество Австралии; 2015.
42. 42. Stojowska-Swedrzynska K, Krawczyk B. Новый тест для одновременной идентификации и дифференциации штаммов Klebsiella oxytoca . Appl Microbiol Biotechnol. 2016. Epub 2016/10/09. pmid: 27717967.
43. 43. Пак Е.А., Ким Ю.Т., Чо Дж. Х., Рю С., Ли Дж. Х. Характеристика и анализ генома новых бактериофагов, инфицирующих условно-патогенные микроорганизмы человека Klebsiella oxytoca и K . pneumoniae . Arch Virol. 2016. Epub 2016/12/29. pmid: 28028618.
44. 44. Marraffini LA. CRISPR-Cas иммунитет у прокариот. Природа. 2015. 526 (7571): 55–61. Epub 2015/10/04. pmid: 26432244.
45. 45. Ostria-Hernández ML, Sánchez-Vallejo CJ, Ibarra JA, Castro-Escarpulli G. Обзор сгруппированных с регулярными интервалами коротких палиндромных повторов и связанных с ними систем белков Cas (CRISPR / Cas) в нескольких секвенированных штаммах Klebsiella pneumoniae .BMC Res Notes. 2015; 8 (1): 332. pmid: 26238567
46. 46. Нетцер П., Гайя С., Сандоз М., Хулюк Т., Гут А., Холтер Ф. и др. Влияние повторной инъекции и непрерывной инфузии омепразола и ранитидина на внутрижелудочный pH в течение 72 часов. Американский журнал гастроэнтерологии. 1999. 94 (2): 351–7. Epub 1999/02/18. pmid: 10022628.
47. 47. Ма Й, Пакан Дж. К., Ван Кью, Сюй Ю, Хуанг Х, Кореневский А. и др. Микрокапсулирование бактериофага felix O1 в хитозан-альгинатные микросферы для пероральной доставки.Appl Environ Microbiol. 2008. 74 (15): 4799–805. Epub 2008/06/03. pmid: 18515488; Идентификатор PubMed Central PMCID: PMCPMC2519356.

Эффективность комбинаций фагов и антибиотиков против клинических изолятов Klebsiella pneumoniae с множественной лекарственной устойчивостью | Джундишапурский журнал микробиологии

1.

Хуршид М., Расул М.Х., Ашфак У.А., Аслам Б., Васим М., Али М.А. и др. Типы последовательностей Acinetobacter baumannii, содержащие гены, кодирующие ферменты, модифицирующие аминогликозиды, и метилазу 16SrRNA; многоцентровое исследование из Пакистана. Устойчивость к лекарствам от инфекций . 2020; 13 : 2855-62. DOI: 10.2147 / IDR.S260643. [PubMed: 32884309]. [PubMed Central: PMC7443399].

2.

Хуршид М., Расул М.Х., Ашфак У.А., Аслам Б., Васим М., Сюй К. и др. Распространение клонов Acinetobacter baumannii, несущих blaOXA-23, устойчивых к карбапенемам, в Пакистане. J Glob Antimicrob Resist . 2020; 21 : 357-62. DOI: 10.1016 / j.jgar.2020.01.001. [PubMed: 32006748].

3.

Аслам Б., Чаудри Т.Х., Аршад М.И., Алви Р.Ф., Шахзад Н., Ясмин Н. и др. Первый blaKPC, содержащий штамм Klebsiella pneumoniae ST258, выделенный в Пакистане. Устойчивость к лекарствам Microb . 2020; 26 (7): 783-6. DOI: 10.1089 / mdr.2019.0420. [PubMed: 32109182].

4.

Аслам Б., Ван В., Аршад М. И., Хуршид М., Музаммил С., Расул М. Х. и др. Устойчивость к антибиотикам: краткое изложение глобального кризиса. Устойчивость к лекарствам от инфекций . 2018; 11 : 1645-58.DOI: 10.2147 / IDR.S173867. [PubMed: 30349322]. [PubMed Central: PMC6188119].

5.

Балоч З., Аслам Б., Музаммил С., Хуршид М., Расул М. Х., Ма К. Инверсия выбора: вероятный инструмент против устойчивости к антибиотикам. Устойчивость к лекарствам от инфекций . 2018; 11 : 1903-5. DOI: 10,2147 / IDR.S176759. [PubMed: 30425539]. [PubMed Central: PMC6202045].

6.

Сантаджит С., Индраваттана Н. Механизмы устойчивости к противомикробным препаратам у возбудителей ESKAPE. Биомед Рес Инт . 2016; 2016 : 2475067. DOI: 10.1155 / 2016/2475067. [PubMed: 27274985]. [PubMed Central: PMC4871955].

7.

Мартин Р.М., Бахман М.А. Колонизация, инфекция и дополнительный геном Klebsiella pneumoniae. Микробиол для фронтальных клеточных инфекций . 2018; 8 : 4. DOI: 10.3389 / fcimb.2018.00004. [PubMed: 29404282]. [PubMed Central: PMC5786545].

8.

Paczosa MK, Mecsas J.Klebsiella pneumoniae: переход в нападение с сильной защитой. Microbiol Mol Biol Ред. . 2016; 80 (3): 629-61. DOI: 10.1128 / MMBR.00078-15. [PubMed: 27307579]. [PubMed Central: PMC4981674].

9.

Чаудри Т.Х., Аслам Б., Аршад М.И., Алви Р.Ф., Музаммил С., Ясмин Н. и др. Появление bla NDM-1, содержащего Klebsiella pneumoniae ST29 и ST11, в ветеринарных учреждениях и отходах Пакистана. Устойчивость к лекарствам от инфекций . 2020; 13 : 3033-43.DOI: 10.2147 / IDR.S248091. [PubMed: 32

4]. [PubMed Central: PMC7457595].

10.

Effah CY, Sun T, Liu S, Wu Y. Klebsiella pneumoniae: возрастающая угроза общественному здоровью. Энн Клин Микробиол Антимикроб . 2020; 19 (1): 1. DOI: 10.1186 / s12941-019-0343-8. [PubMed: 31

7]. [PubMed Central: PMC7050612].

11.

Генри М., Лавин Р., Дебарбье Л. Прогнозирование in vivo эффективности терапевтических бактериофагов, используемых для лечения легочных инфекций. Противомикробные агенты Chemother . 2013; 57 (12): 5961-8. DOI: 10.1128 / AAC.01596-13. [PubMed: 24041900]. [PubMed Central: PMC3837875].

12.

Piperaki ET, Syrogiannopoulos GA, Tzouvelekis LS, Daikos GL. Klebsiella pneumoniae: вирулентность, биопленка и устойчивость к противомикробным препаратам. Pediatr Infect Dis J . 2017; 36 (10): 1002-5. DOI: 10.1097 / INF.0000000000001675. [PubMed: 28

8].

13,

Бурдин Г., Наварро А., Саркер С.А., Питте А.С., Кадри Ф., Султана С. и др.Охват изолятов кишечной палочки, ассоциированных с диареей, различного происхождения, с помощью двух типов фаговых коктейлей. Микроб Биотехнология . 2014; 7 (2): 165-76. DOI: 10.1111 / 1751-7915.12113. [PubMed: 24528873]. [PubMed Central: PMC3937720].

14.

Лин Д.М., Коскелла Б., Линь Х. Фаговая терапия: альтернатива антибиотикам в эпоху множественной лекарственной устойчивости. World J Gastrointest Pharmacol Ther . 2017; 8 (3): 162-73.DOI: 10.4292 / wjgpt.v8.i3.162. [PubMed: 28828194]. [PubMed Central: PMC5547374].

15.

Vasse M, Torres-Barcelo C, Hochberg ME. Отбор фагов на бактериальные читы ведет к сокращению популяции. Proc Biol Sci . 2015; 282 (1818): 20152207. DOI: 10.1098 / rspb.2015.2207. [PubMed: 26538598]. [PubMed Central: PMC4650167].

16.

Комо AM, Тетарт F, Trojet SN, Prere MF, Krisch HM. Синергия между фагами и антибиотиками (PAS): бета-лактамные и хинолоновые антибиотики стимулируют рост вирулентных фагов. PLoS One . 2007; 2 (8). e799. DOI: 10.1371 / journal.pone.0000799. [PubMed: 17726529]. [PubMed Central: PMC1949050].

17,

Sheu CC, Chang YT, Lin SY, Chen YH, Hsueh PR. Инфекции, вызванные устойчивыми к карбапенемам Enterobacteriaceae: обновленная информация о вариантах лечения. Передний микробиол . 2019; 10 : 80. DOI: 10.3389 / fmicb.2019.00080. [PubMed: 30761114]. [PubMed Central: PMC6363665].

18.

Альви Р.Ф., Аслам Б., Шахзад Н., Расул М.Х., Шафик М. Молекулярные основы устойчивости к хинолонам в клинических изолятах Klebsiella pneumoniae из Пакистана. Пак Дж. Фарм. Sci . 2018; 31 (4 (дополнительный)): 1591-6. [PubMed: 30058553].

19.

Цао Ф, Ван Х, Ван Л, Ли З, Че Дж, Ван Л и др. Оценка эффективности бактериофага при лечении пневмонии, вызванной множественной лекарственной устойчивостью Klebsiella pneumoniae у мышей. Биомед Рес Инт . 2015; 2015 : 752930. DOI: 10.1155 / 2015/752930. [PubMed: 25879036]. [PubMed Central: PMC4387947].

20.

Луонг Т., Салабаррия АК, Эдвардс Р.А., Роуч ДР. Стандартизированная очистка бактериофагов для персонализированной фаговой терапии. Нат Протокол . 2020; 15 (9): 2867-90. DOI: 10.1038 / s41596-020-0346-0. [PubMed: 32709990].

21.

Cao Z, Zhang J, Niu YD, Cui N, Ma Y, Cao F и др.Выделение и характеристика «phiKMV-подобного» бактериофага и его терапевтическое действие на геморрагическую пневмонию норок. PLoS One . 2015; 10 (1). e0116571. DOI: 10.1371 / journal.pone.0116571. [PubMed: 25615639]. [PubMed Central: PMC4304800].

22.

Bedi MS, Verma V, Chhibber S. Амоксициллин и специфический бактериофаг можно использовать вместе для уничтожения биопленки Klebsiella pneumoniae B5055. Мир J Microbiol Biotechnol .2009; 25 (7): 1145-51. DOI: 10.1007 / s11274-009-9991-8.

23.

Чан Б.К., Систром М., Вертц Дж. Э., Кортрайт К. Э., Нараян Д., Тернер П. Е.. Отбор фагов восстанавливает чувствительность к антибиотикам у синегнойной палочки с множественной лекарственной устойчивостью. Научный сотрудник . 2016; 6 : 26717. DOI: 10,1038 / srep26717. [PubMed: 27225966]. [PubMed Central: PMC4880932].

24.

Гу Лю С., Грин С.И., Мин Л., Кларк Дж. Р., Салазар К. С., Тервиллигер А. Л. и др.Синергия фага и антибиотика обусловлена ​​уникальным сочетанием антибактериального механизма действия и стехиометрии. мБио . 2020; 11 (4). DOI: 10.1128 / mBio.01462-20. [PubMed: 32753497]. [PubMed Central: PMC7407087].

25.

Тальяферри Т.Л., Янсен М., Хорц Х.П. Борьба с патогенными бактериями на двух фронтах: фаги и антибиотики как комбинированная стратегия. Микробиол для фронтальных клеточных инфекций . 2019; 9 : 22. DOI: 10.3389 / fcimb.2019.00022. [PubMed: 30834237]. [PubMed Central: PMC6387922].

26.

Verma V, Harjai K, Chhibber S. Ограничение индуцированного ципрофлоксацином образования резистентного варианта в биопленке Klebsiella pneumoniae B5055 путем дополнительной обработки бактериофагом. J Антимикробный Chemother . 2009; 64 (6): 1212-8. DOI: 10.1093 / jac / dkp360. [PubMed: 19808232].

27.

Лу Т.К., Коллинз Дж. Дж. Диспергирование биопленок с помощью сконструированного ферментативного бактериофага. Proc Natl Acad Sci U S A . 2007; 104 (27): 11197-202. DOI: 10.1073 / pnas.0704624104. [PubMed: 17592147]. [PubMed Central: PMC1899193].

28.

Лу Т.К., Коллинз Дж. Дж. Сконструированные бактериофаги, нацеленные на генные сети, в качестве адъювантов для антибиотикотерапии. Proc Natl Acad Sci U S A . 2009; 106 (12): 4629-34. DOI: 10.1073 / pnas.0800442106. [PubMed: 19255432]. [PubMed Central: PMC2649960].

Бактериофаготерапия у пациентов с инфекциями мочевыводящих путей — Просмотр полного текста

Экспериментальный: внутривенный (IV) Фаг, вводимый внутривенно.	Биологический: терапия бактериофагами Бактериофаготерапия будет индивидуализирована для каждого пациента в зависимости от теста на чувствительность к фагам
Экспериментальный: внутрипузырный (ИВС) Фаг, вводимый внутрипузырным путем.	Биологический: терапия бактериофагами Бактериофаготерапия будет индивидуализирована для каждого пациента в зависимости от теста на чувствительность к фагам
Экспериментально: субкогорта A Фаг, выбранный для E.coli, вводимые по выбранному маршруту, основанному на предыдущих версиях Arms.	Биологический: терапия бактериофагами Бактериофаготерапия будет индивидуализирована для каждого пациента в зависимости от теста на чувствительность к фагам
Экспериментально: субкогорта B Отобранный фаг для Klebsiella pneumoniae, вводимый выбранным путем, основанным на предыдущих правилах.	Биологический: терапия бактериофагами Бактериофаготерапия будет индивидуализирована для каждого пациента в зависимости от теста на чувствительность к фагам
Экспериментально: субкогорта C Фаг, выбранный для E. Добавить комментарий Отменить ответ Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены * Комментарий * Имя * Email * Сайт