Презентация на тему: ЭЛЕКТРОФОРЕЗ
ЭЛЕКТРОФОРЕЗ – движение заряженных молекул в растворе (токопроводящей среде) под действием сил постоянного электрического поля
Метод был предложен Тизелиусом для разделения заряженных молекул (1925г.).
В 1948 году Тизелиус получил Нобелев- скую премию за разработку методов электрофоретического разделения белков.
Большинство биомолекул содержат ионизирующиеся функциональные группы, которые при определенных значениях рН обеспечивают молекуле свойства катиона или аниона.
Два важнейших фактора, определяющих эффектив- ность разделения заряженных молекул при электро- форезе:
1. Отношение эл. заряда молекулы к её массе:
q / m
Молекулы с близкими по величине q, но отличающие- ся по молекулярной массе.
2.Взаимодействие материала носителя с молекула- ми разделяемой смеси («эффект молекулярного сита»).
Различия в скоростях движения заряженных молекул смеси будет определяться:
— усиливает движение: движущая сила электрического поля, действующая на катионы и анионы
— замедляют движение: сила трения и силы электростатического взаимодействия молекулыE x qс материалом носителя.
V движения =
D x x F
где: E – напряженность электрического поля q – заряд молекулы (знак и величина)
D – размер (форма) молекулы (сила трения)- вязкость среды
F – силы электростатического взаимодействия молекулы и материала носителя
Материалы носителя для электрофореза
1.Хроматографическая бумага
2.Ацетат целлюлозы
3.Тонкие слои оксидов Si и Al
4.Гели:
-агар
-крахмал
-полиакриламид (ПААГ):
В зависимости от %-концентрации акриламида (3 – 30%) формируется сеть с заданным разме- ром ячеек. Это позволяет достигать высокую эффективность разделения исходной смеси.
старт | Носитель расположен горизонтально |
катод | анод |
| Катодная и анодная |
| камеры, заполненные |
| буфером |
| Стабилизированный |
| источник |
| постоянного тока |
Обычно U = 100-500 В
Общая схема электрофоретической установки
Буферы для электрофореза:
-фосфатный буфер
-веронал-мединаловый буфер
-трис-HCl буфер
-трис-глициновый буфер
-ацетатный буфер
-боратный буфер
Буферы обеспечивают:
-создают необходимое значение рН, при котором происхо-
дит диссоциация определенных функциональных групп в разделяемых молекулах (регуляция величины q)
-на поверхности катода и анода происходит электролиз: на катоде – защелачивание, на аноде – закисление. Это требует высокой концентрации компонентов буфера:
100 mМ и более. После первого использования буфера, его порции из катодной и анодной камер уже не смеши- вают.
Виды электрофореза
1.Аналитический Э/Ф:
-качественный анализ
-количественный анализ
-оценка чистоты препаратов
-определение молекулярной массы
2.Препаративный Э/Ф:
уступает по возможностям хромато- графическим методам
Диск-электрофорез (Дэвис, 1959)
Связан с изобретением полиакриламидного геля. Термин происходит от англ. discontinuous = преры- вистый, неоднородный.
Формируется гель, в минимальном варианте состоя- щий из двух слоёв: концентрирующий гель и разде- ляющий (рабочий) гель (разная %-концентрация акриламида). В концентрирующий гель (низкая кон- центрация, крупнопористый) вносят разделяемую смесь. Это позволяет смеси войти в разделяющий гель в виде компактной порции, что важно для после- дующего эффективного разделения компонентов. Собственно процесс разделения идет в толще раз- деляющего геля (может состоять из 1 и более слоев с определенной концентрацией акриламида).
Исходные компоненты для приготовления ПААГ гото- вят в виде отдельных растворов. В состав включают буфер для придания электропроводных свойств будущему гелю.
Растворы смешивают непосредственно перед исполь- зованием и сразу заливают в соответствующие фор- мы (пластины или цилиндры), где и происходит поли- меризация геля.
Каждый слой разделяющего геля формируется после- довательно. Завершается процесс полимеризацией концентрирующего геля (процесс идет снизу вверх).
В этом геле заранее, на линии старта, формируют ячей- ки (углубления), куда будут вносить разделяемую смесь.
Выполнила: Дуйсенова А. 570гр.ОМ Проверила: Алма Аймолдина АО «Медицинский у ниверситет Астана» Кафедра дерматовенерологии с курсом иммунологии Астана 2016
Ионофорез или лекарственный электрофорез – это физиотерапевтический метод, заключающийся в воздействии на организм гальванического тока и вводимых с его помощью лекарственных растворов. Впервые для лечения больных ионофорез был применен в 1802 году.
В основе ионофореза лежит способность химических веществ разделяться на положительные и отрицательные ионы, которые направленно перемещаются в электрическом поле. При этом с электродной прокладки вводятся лишь те ионы, которые имеют одноименный знак с электродом ( катионы двигаются к отрицательному полюсу (катоду), а анионы — к положительному (аноду ). Во время процедуры ионофореза лекарственные вещества проникают на небольшую глубину в поверхностные и средние слои кожи, и только небольшое количество лекарственного вещества обнаруживается в глубоких слоях и подкожной клетчатке. Из кожи по мелким кровеносным и лимфатическим сосудам лекарство разносится по всему организму, хотя преимущественно оно накапливается в тканях и органах в месте воздействия.
Воздействие самого гальванического на органы и ткани заключается в том, что он активизирует тонус гладкой мускулатуры, укрепляет сосуды, улучшает кровообращение и обмен веществ в клетках тканей. Гальванический ток повышает восприимчивость тканей к вводимым косметическим средствам. Благодаря такому воздействию тока лечебный эффект вводимых лекарств усиливается, что позволяет значительно снижать их дозировки. Также в клетках тканей активизируются все виды обменных процессов. В результате такого воздействия кожа «оживает», наполняется влагой, из нее удаляются токсины и продукты обмена. При электрофорезе лекарственные вещества в организм проникают через выводные протоки потовых и сальных желез, межклеточные промежутки, волосяные фолликулы.
Гальванизация = лечебное действие постоянного тока Ионофорез = гальванизация+лекарственное вещество Ионная мезотерапия = ионофорез стационарными электродами Дезинкрустация = Электрофорез (ионофорез) омыляющих веществ в сочетании с действием отрицательного полюса гальванического тока применяется в косметологии для омыления комедонов. В этом случае с помощью ионофореза в кожу лица вводится щелочной раствор (1%- ный раствор бикарбоната натрия). Положительно заряженные ионы натрия ( Na +), изменяют кислотность кожи, в результате чего поверхностные слои кожи разрыхляются, поры на коже раскрываются и очищаются, исчезают черные точки. Кожа освобождается от лишнего балласта, увлажняется и становится более восприимчивой к различным питательным и увлажняющим косметическим средствам.
Электрофорез обладает рядом преимуществ перед другими известными способами введения лекарства: в коже создается депо, откуда препарат освобождается постепенно и попадает в кровь, а также воздействует на нужную область; дозу препарата можно уменьшать, при этом эффект не изменится; препарат можно доставить именно в то место, куда необходимо, не навредив другим органам; лекарство медленнее выводится из организма; побочные эффекты редко возникают ; лекарственные вещества доставляются в уже активной форме ;
Основные методики электрофореза Гальваническая – специальные прокладки, которые состоят из четырех слоев фильтрованной бумаги и марли. Эти накладки смачиваются в растворе лекарственного препарата нужной концентрации, затем одевается защитная прокладка, на которую устанавливается электрод. Другой электрод размещается на противоположной стороне тела. Это нужно для того, чтобы создать линию движения лекарственного препарата. Ванночковая – в специальную ванночку наливается раствор лекарственного препарата, и в этой ванночке помещены специальные электроды. Большую часть тела человек погружает в нее и лежит там определенное время. Полостная – лекарственное средство в виде раствора вводится в прямую кишку, вагинальное отверстие, желудок или другой полый орган, а затем туда вводят катод или анод, второй электрод размещают на поверхности тела. Внутритканевая – чаще всего эту методику используют для лечения дыхательной системы. Сначала пациент принимает таблетку или ему делается инъекция, а затем на область с очагом воспаления размещаются электроды.
Лечебные эффекты лекарственного электрофореза Лекарственный препарат, доставленный в организм при помощи электрофореза, воздействует несколькими механизмами: 1. Рефлекторный механизм (ионные рефлексы). 2. Гуморальный (системный) механизм. 3. Местный механизм. Рефлекторный компонент терапевтического действия лекарства формируется за счет опосредованных влияний. Гуморальный компонент оказывает системное воздействие за счет проникновения лекарственного вещества в кровоток и лимфоток, и влияния на многие органы и ткани. Местное действие электрофореза обусловлено высокой концентрацией лекарства в месте введения.
В отличие от инъекционных способов введения электрофорез позволяет доставить лекарства к патологическому очагу, в котором имеются нарушения микроциркуляции и регионарного кровообращения в виде капиллярного стаза, тромбоза сосудов, инфильтрации и некроза. Такие патологические очаги плохо поддаются лечению традиционными методами, т.к. поступление лекарственных веществ в них затруднено. При электрофорезе же лекарственные вещества могут поступать в патологический очаг не только гематогенным, но и электрогенным путем. Противоионы и различные примеси, которые могут тормозить действие основного лекарственного иона, в организм при этом не попадают, а остаются на прокладке.
Процедура ионофореза Техника ионофореза сводится к расположению на пути тока (между телом человека и электродами) раствора лекарственного вещества. Для этой цели чаще всего используются специальные прокладки, которые смачиваются лекарственным раствором и накладывается на предварительно очищенную кожу лица. Активным электродом кожа медленно обрабатывается в течение нескольких минут.
Что включает в себя процедура ионофореза Очистка (энзимным пилингом с АНА-кислотами) Нанесение косметических средств, выбор которого зависит от имеющихся проблем и поставленных задач; Ионофорез. На кожу накладываются специальные электроды или иглы, через которые дозировано и будет подаваться ток. Закрепление результата -обработка кожи специальными косметическими средствами, которые закрепляют полученный эффект. ( тонизир.эффектом )
Эффект от ионофореза в косметологии Повышается уровень увлажненности сухой кожи. Поверхность кожи выравнивается, становится более упругой, приобретает здоровый цвет и тонус, способствует усиленному выделению токсинов, что положительно влияет в лечении акне, исчезают мелкие морщинки и заметно уменьшаются крупные морщины. Благодаря усилению лимфотока и кровообращения «уходят» круги и отечности под глазами.
Показания к методу О моложение кожного покрова. Улучшения цвета лица, увлажнения Повышения эластичности и тонуса кожи и снижения отечности лица, мешки и темные круги под глазами Осветления пигментных пятен. Ч истка кожи Устранения локализации жира– лечение целлюлита · Комедоны, угри, прыщи; Пигментные пятна; Сухость кожи, шелушение, покраснение, нарушение гидролипидного баланса верхних слоев кожного покрова;
Противопоказания для процедуры – при закрытых гнойных процессах – склонность к кровотечениям – наличие злокачественных опухолей и предрасположенность к онкозаболеваниям ; лихорадочные состояния, – при туберкулезе легких беременным и кормящим женщинам; — людям,— при нарушениях работы эндокринной системы и гормональных сбоях; — при заболеваниях лор-органов; — при болезнях кожи хронического характера; — людям, страдающим сердечно-сосудистыми заболеваниями. обширные нарушения целостности кожи, системные заболевания кожи, почечная недостаточность, наличие кардиостимулятора, индивидуальная непереносимость тока. Специфические (при работе на лице): сыпи, экзема, заболевания щитовидной железы, кисты и опухолевые заболевания груди.
Косметологические комплексные препараты по своему назначению распределяются на группы: питательные; увлажняющие; омолаживающие; антикуперозные ; противовоспалительные; с эффектом лифтинга. Для ионофореза используют специальные нетканые маски, пропитанные обычно гиалуроновой кислотой или раствором коллагена, плацентарно -коллагеновые или плацентарные маски. Наиболее часто применяют средства в форме водорастворимых гелей, токопроводящих эмульсий и паст, содержащих: гиалуроновую кислоту, которая способствует разглаживанию кожи и стимулирует регенеративные процессы; никотиновую кислоту, расширяющую мелкие сосуды и способствующую улучшению кровообращения и обменных процессов в коже; салициловую кислоту, обладающую противовоспалительным, очищающим и осветляющим действием. гиалуронидазу ( Лидаза, Лонгидаза ), фермент, расщепляющий гиалуроновую кислоту, что помогает значительно уменьшить рельеф растяжек и рубцов.
Косметические средства для ионофореза С пециальная косметика для данной процедуры имеет на упаковке маркировку (+) или (-). Это означает, что вводить этот препарат следует с соответствующего электрода – катода или анода.
Лекарственные растворы для электрофореза рекомендуется заготавливать не более чем на 7-10 дней. Растворы неустойчивых лекарств (прежде всего ферментов) лучше готовить непосредственно перед процедурой и хранить в холодильнике. Количество расходуемого лекарства определяется из расчета 5-10 мл на каждые 100 см2 площади матерчатой лекарственной прокладки (для прокладки из фильтровальной бумаги соответственно 2-3 мл) и учета количества и характера проводимых процедур. Сильнодействующие лекарства наносятся на прокладку в количестве, не превышающем его высшей разовой дозы.
Полярность простых соединений легко определить теоретически: ионы всех металлов имеют положительный заряд и вводятся с анода; ионы всех металлоидов (хлор, бром, йод и др.) и кислотные остатки подлежат введению с катода, т.к. приобретают при диссоциации отрицательный заряд. Положительный заряд в растворе имеют алкалоиды, местноанестезирующие средства, большинство антибиотиков и сульфаниламидов. У некоторых веществ (например, белков или аминокислот), относящихся к амфотерным соединениям, полярность зависит от рН среды: в кислых растворах они приобретают положительный заряд, в щелочных соответственно отрицательный. Важную роль при проведении лекарственного электрофореза играет растворитель Если лекарственное вещество плохо растворимо в воде, то в качестве растворителя можно использовать спирты и особенно диметилсульфоксид ( димексид, ДМСО).
Лекарственный препараты, предназначенный для проведения электрофореза, должны отвечать следующим требованиям: 1. Чистые, без примесей. 2. Свежие, то есть раствор лекарственного препарата готовится непосредственно перед употреблением. 3. Для приготовления раствора использовать только чистую воду (дистиллированную). 4. Если лекарство нерастворимо в воде, то в качестве растворителя применяют очищенный спирт или Димексид ( диметилсульфоксид ). 5. Не допускается использование в качестве растворителя физиологического раствора. 6. Для приготовления растворов ферментов ( лидаза ) необходимо использовать в качестве растворителя буферы (фосфатный, гидрокарбонатный и т.д.). электроды устанавливаются на связанные с внутренними органами вегетативной иннервацией участки кожи. Так что при местном воздействии сквозь вегетативные пути различные лекарственные вещества, несомненно, оказывают влияние на конкретные системы и органы организма человека. Подводимый к имеющемуся больному ток обязательно дозируют по плотности. Для дозиметрии используются субъективные, личные ощущения больного. При процедуре он должен однозначно чувствовать легкое пощипывание (покалывание) под электродами. Если появляется чувство жжения — это сигнал к немедленному снижению плотности тока.
Риски от ионофореза Процедура ионофореза будет абсолютно безопасна и максимально эффективна. Использовать качественную косметику, которая поддается ионизации. Н е злоупотреблять количеством наносимой косметики. Перенасыщение кожи ионизированными веществами нарушит функции кожи и вызовет раздражение.
Процедура ионофореза длится в зависимости от площади обрабатываемого участка кожи от 15 до 30 минут. Эффект проявляется постепенно. Восстановительный период отсутствует, соблюдения определенных ограничений после сеанса не требуется. Чтобы получить длительный косметический эффект, не стоит увеличивать длительность сеанса. Лучше постепенно пройти несколько сеансов процедур
Лечебные эффекты электрофореза Электрофорез оказывает следующие терапевтические эффекты: противовоспалительный – анод; обезвоживающий (способствует выходу жидкости из тканей и сходу отеков) – анод; обезболивающий – анод; успокаивающий – анод; сосудорасширяющий – катод; расслабляющий (особенно в отношении мышц) – катод; нормализация обмена веществ, питания органов и тканей – катод ; секреторный (выработка и выброс в кровь биологически активных веществ ) – катод.
Презентация на тему «Теоретические основы физиотерапии. Физиопрофилактика. Гальванизация. Электрофорез»
Презентация на тему: Теоретические основы физиотерапии. Физиопрофилактика. Гальванизация. ЭлектрофорезСкачать эту презентацию
Скачать эту презентацию
№ слайда 1
Описание слайда:Красноярская государственная медицинская академия Кафедра восстановительной медицины и курортологии ИПО Теоретические основы физиотерапии. Физиопрофилактика. Гальванизация. Электрофорез. Зав. кафедрой, д.м.н., профессор С.В. Клеменков Преподаватель: врач высшей категории, кандидат медицинских наук Карачинцева Наталья Владимировна
№ слайда 2
Описание слайда:План лекции 1. Историческая справка 2. Определение предмета 3. Природные факторы 4. Лечебные эффекты физиотерапии 5. Индивидуальные особенности детского организма при физиолечении 6. Возрастные ограничения применения физиолечения 7. Гальванизация 8. Электрофорез 9. Рекомендуемая литература
№ слайда 3
Описание слайда:ФИЗИОТЕРАПИЯ – область медицины, изучающая действие на организм природных и искусственно создаваемых физических факторов, применяемых для лечения больных, профилактики заболеваний и медицинской реабилитации.
№ слайда 4
Описание слайда:Предметом изучения физиотерапии являются Лечебные физические факторы Искусственные Природные -электролечение -климатолечение -электролечение -климатолечение -магнитотерапия -бальнеолечение -светолечение -грязелечение -механолечение -тепло- и водолечение
№ слайда 5
Описание слайда:Физиолечение отличается определенными преимуществами: — Наибольшая физиологичность методов, так как применяются привычные природные физические факторы. — Наибольшая физиологичность методов, так как применяются привычные природные физические факторы. — Безболезненность и стерильность. — Безболезненность и стерильность. — Длительный эффект. — Длительный эффект. — Отсутствие побочных эффектов, свойственных медикаментозному лечению. — Отсутствие побочных эффектов, свойственных медикаментозному лечению. — Большое разнообразие аппаратуры и доступность лечения — Большое разнообразие аппаратуры и доступность лечения
№ слайда 6
Описание слайда:Лечебные эффекты физиотерапии местные: 1. Обезболивание 2. Подсушивание раны 3. Бактерицидное действие 4. Ускорение эпителизации ткани 5. Снятие зуда 6. Уменьшение отечности 7. Смягчение рубцовой ткани 8. Улучшение сократимости нерва, мышцы 9. Снятие спазма мышц
№ слайда 7
Описание слайда:Общие лечебные эффекты: 1. Седативный эффект 1. Седативный эффект 2. Активация метаболизма 2. Активация метаболизма 3. Активация иммунной системы 3. Активация иммунной системы 4. Активация эндокринной системы 4. Активация эндокринной системы 5. Улучшение кровообращения 5. Улучшение кровообращения 6. Снижение АД 6. Снижение АД
№ слайда 8
Описание слайда:Общие противопоказания для физиолечения: 1. Высокая лихорадка. 1. Высокая лихорадка. 2. Злокачественные опухоли. 2. Злокачественные опухоли. 3. Склонность к кровотечениям или болезни крови. 3. Склонность к кровотечениям или болезни крови. 4. Туберкулез в активной форме. 4. Туберкулез в активной форме. 5. Сердечно-сосудистая недостаточность выше IIА стадии. 5. Сердечно-сосудистая недостаточность выше IIА стадии. 6. Острые психические заболевания. 6. Острые психические заболевания.
№ слайда 9
Описание слайда:Индивидуальные особенности детского организма, которые нужно учитывать при назначении физиолечения Нервная система не закончена в развитии. Отсюда чувствительность организма к процедурам повышена. Нервная система не закончена в развитии. Отсюда чувствительность организма к процедурам повышена. Регуляторные механизмы несовершенны и терморегуляция легко нарушается. Регуляторные механизмы несовершенны и терморегуляция легко нарушается. Артериальное давление понижено. Артериальное давление понижено. Кожа отличается повышенной проницаемостью. Кожа отличается повышенной проницаемостью.
№ слайда 10
Описание слайда:Особенности проведения процедур у детей В течение дня назначают только В течение дня назначают только одну процедуру. Отдых после процедуры. одну процедуру. Отдых после процедуры. Плотность тока и концентрация солей меньше. Плотность тока и концентрация солей меньше. В санаториях более продолжительные сроки лечения. В санаториях более продолжительные сроки лечения. Не ранее, чем через час после кормления и не позже, чем за 30 мин. до следующего кормления. Не ранее, чем через час после кормления и не позже, чем за 30 мин. до следующего кормления.
№ слайда 11
Описание слайда:Возрастные ограничения применения физиолечения Метод физиолечения Возраст Интервал между курсами Общая гальванизация и электрофорез С 2 лет Через месяц Местная гальваниза- ция и электрофорез С первых дней жизни Через месяц УВЧ — терапия С первых дней жизни Через месяц Ультрафиолетовое Излучение общее С 1 месяца Через 2-3 месяца Ультрафиолетовое Излучение местное С первых дней жизни Через месяц
№ слайда 12
Описание слайда:Возрастные ограничения применения физиолечения Метод физиолечения Возраст Интервал между курсами Инфракрасноеизлучение С 1 меяца Через месяц Лазеротерапия С 1,5 – 2 лет Через 2 -3 месяца Дарсонвализация С 2 лет С 2 лет Через 1 — 2 месяца Ультратонтерапия С 1 месяца Через 1 — 2 месяца Ингаляционная терапия С первых дней жизни Через месяц
№ слайда 13
Описание слайда:Возрастные ограничения применения физиолечения Метод физиолечения Возраст Интервал между курсами Ультразвуковая терапия С 2 -3 лет Через 2-3 месяца Грязелечение общее С 14-15лет Через 5-6 месяцев Грязелечение местное С 2-3 лет С 2-3 лет Через 2-3 месяца Минеральные ванны (хлориднонатриевы, Иодобромные) С 1 месяца Через месяц Ванны радоновые, сероводородные С 5-6 лет Через 5-6 месяцев
№ слайда 14
Описание слайда:Физиопрофилактика Первичная физиопрофилактика Вторичнаяфизиопрофилактика Используется для повышения сопротивляемости организма к острым респираторным заболеваниям, развития адаптационных возможностей к неблагоприятным внешним факторам, повышения работоспособности и закаленности здоровых лиц, компенсации УФО- недостаточности и др. Применяется у больных и имеет целью предупреждение обострений или дальнейшего прогрессирования заболевания, укрепление организма, более быстрое восстановление его нормальной жизнедеятельности и трудоспособности.
№ слайда 15
Описание слайда:Гальванизация – применение с лечебной целью непрерывного постоянного электрического тока малой силы (до 50мА) и низкого напряжения (30 — 80В). Параметры: Параметры: — максимальный ток применяют при гальванизации конечностей (20-30мА) и туловища (15-20мА) — максимальный ток применяют при гальванизации конечностей (20-30мА) и туловища (15-20мА) — на лице не превышает 3-5 мА — на лице не превышает 3-5 мА — на слизистых рта и носа – 2-3мА — на слизистых рта и носа – 2-3мА
№ слайда 16
Описание слайда:Гальванический ток вызывает общую реакцию организма и зависит от локализации, интенсивности и длительности воздействия Лечебные эффеты: Лечебные эффеты: Гальванизация способствует повышению регуляторной функции нервной системы Гальванизация способствует повышению регуляторной функции нервной системы Ускорению регенерации пораженных периферических нервных волокон, мышечных, эпителиальной и др. тканей Ускорению регенерации пораженных периферических нервных волокон, мышечных, эпителиальной и др. тканей В тканях усиливаются окислительно – восстановительные процессы и резорбции, крово- и лимфообращение В тканях усиливаются окислительно – восстановительные процессы и резорбции, крово- и лимфообращение Гал-й ток влияет на обмен медиаторов (гистамина, серотонина и др.) не только в коже, но и во всем организме Гал-й ток влияет на обмен медиаторов (гистамина, серотонина и др.) не только в коже, но и во всем организме
№ слайда 17
Описание слайда:При воздействии гальв-им током на кожу в области одного или двух соседних метамеров возникают местные реакции: Лечебные эффекты, например, расположение электродов в области печени и правой подлопаточной области способствует усилению кровотока в сосудах печени и улучшению ее метаболизма; — при наложении электродов в верхнем отделе поясничной области изменяется функциональное состояние надпочечников и всей симпатоадреналовой системы; в крови повышается содержание адреналина и норадреналина — при наложении электродов в верхнем отделе поясничной области изменяется функциональное состояние надпочечников и всей симпатоадреналовой системы; в крови повышается содержание адреналина и норадреналина — под влиянием г. тока стимулируется фагоцитарная активность лейкоцитов и всей системы мононуклеарных фагоцитов, улучшается трофическая функция вегетативной нервной системы и др. — под влиянием г. тока стимулируется фагоцитарная активность лейкоцитов и всей системы мононуклеарных фагоцитов, улучшается трофическая функция вегетативной нервной системы и др.
№ слайда 18
Описание слайда:Показаниями Для применения гальванизации являются: — Поражения периферической нервной системы инфекционного, токсического и травматического происхождения (полирадикулоневриты, радикулиты, невриты и невралгии различной локализации), последствия инфекционного и травматических поражений ЦНС; невротические состояния; ГБ и ЯБ в начальных стадия; мигрень, вазомоторные расстройства, нарушения трофики, функциональные ЖКТ и половые расстройства, миозит, заболевания ОДА, заболевания глаз, ЛОР-органов, некоторые стоматологические заболевания (стоматиты и пр.) и др.
№ слайда 19
Описание слайда:Противопоказания — Острые гнойные воспалительные процессы — Резко выраженный атеросклероз и др. заболевания ССС в стадии декомпенсации — Новообразования — Кожные забол-я или нарушение целостности кожных покровов в местах наложения электродов — Беременность — Индивидуальная непереносимость гальванического тока
№ слайда 20
Описание слайда:В зависимости от решаемых терапевтических задач используют методики Местная общая рефлекторно- сегментарная сегментарная
№ слайда 21
Описание слайда:Местная гальванизация ( допустимая плотность тока до 0,1мА x см 2 ) продольнопоперечно 1. Электроды помещают на одной стороне тела 2. Подвергают воздействию поверхностно расположенные ткани 1. Электроды размещают на противоположных участках тела 2. Воздействию подвергают глубоко расположенные органы и ткани.
№ слайда 22
Описание слайда:Общая гальванизация ( допустимая плотность тока до 0,01- 0,05 мА x см 2 ) — Осуществляют при помощи гальванических ванн (аппарат ГК -2). Рефлекторно-сегментарная гальванизация – воздействие на паравертебральные зоны различных отделов позвоночника и соответствующие метамеры. Чаще всего – гальванический воротник по А.Е.Щербаку
№ слайда 23
Описание слайда:Электрофорез лекарственный – сочетанное воздействие на организм постоянного электрического тока и вводимого с его помощью лекарственного вещества
№ слайда 24
Описание слайда:Механизм действия Лекарственные в-ва в растворе диссоциируют на ионы, образующие в дальнейшем заряженные гидрофильные комплексы. При помещении таких растворов в электрическое поле содержащиеся в них ионы будут перемещаться по направлению к противоположным полюсам. Феномен движения дисперсных частиц относительно жидкой фазы под действием сил электрического поля называется электрофорезом. Если на их пути находятся биологические ткани, то ионы лекар. в-в будут проникать в глубину тканей и оказывать лечебное воздействие.
№ слайда 25
Описание слайда:Лечебные эффекты: Потенцированные эффекты гальванизации и специфические фармакологические эффекты вводимого током лекарственного вещества. Показания: Определяются с фармакологическим учетом вводимых в-в и показаний для гальванизации Противопоказания: при гальванизации + непереносимость, аллергические реакции на вводимые лекарства
№ слайда 26
Описание слайда:СПАСИБО ЗА ВНИМАНИЕ
№ слайда 27
Описание слайда:Гальванизация – это метод лечебного воздействия на организм больного гальванического тока малой
силы и низкого напряжения.
-Движение ионов тканей тела человека (электролиз) между электродами (К, Na, Ca, Mg). Под катодом снижается возбудимость тканей, под анодом происходит гиперполяризация возбудимых мембран.
-Сдвиги в кислотно-щелочных реакциях организма вследствие перемещения Н+ к катоду, ОН־ к аноду, что отражается на деятельности ферментов в тканевом дыхании.
-Происходит движение жидкости по направлению к катоду
(электроосмос), в результате под анодом — сморщивание и уплотнение тканей, а под катодом – отек и разрыхление.
-Увеличивается пассивный транспорт крупных белковых
молекул и других веществ (электродиффузия).
— В тканях, в которых проходит эл. ток, наблюдается
расширение капилляров и ускорения кровотока.
-Уравновешиваются процессы возбуждения и торможения,
-улучшает вегетативную регуляцию и метаболизм в органах и тканях,
-увеличивается кровенаполнение сосудов головного мозга,
-стимулируется деятельность желез внутренней секреции,
-уряжается ЧСС,
-снижается АД,
-понижается холестерин крови,
-повышается напряжение кислорода в миокарде,
-увеличивается уровень АТФ,
-усиливается фагоцитоз,
-стимулирует трофику в тканях и органах,
-улучшается мукоцилиарный клиренс, вызывает бронходилатирующий эффект, -повышается секреторная и моторная функции ЖКТ,
-стимулирует железы внутренней секреции.
Показания: Заболевания периферической, центральной и вегетативной нервной системы (неврит, плексит, невроз), гипертоническая болезнь 1 стадии, атеросклероз аорты и периферических артерий,
заболевания органов дыхания (бронхит, пневмония, плеврит), пищеварения (гастрит, язвенная болезнь, дискинезии), мочеполовых органов (пиелонефрит, цистит, простатит, аднексит), патология костей и суставов (артриты, артрозы, остеохондроз,
переломы костей).
Противопоказания: нарушение целостности кожных покровов в местах наложения электродов, дерматиты, дерматозы, наклонность к кровотечению, злокачественные новообразования,
острые и гнойные процессы различной локализации, НК 2-3 ст., ОИМ, ОНМК, стенокардия 3-4 ф.кл., непереносимость постоянного эл. тока.
Методика проведения процедуры:
Электроды, используемые для гальванизации, представляют собой свинцовые пластинки толщиной 0,3-1 мм. Между кожей и электродом помещают влажную матерчатую прокладку, состоящую из 12-16 слоев гидрофильной ткани.
В зависимости от особенности и локализации патологического процесса электроды располагают продольно или поперечно. При продольном расположении электроды укладывают параллельно на поверхности тела. Для воздействия на более глубоко расположенные ткани применяют поперечное расположение электродов – на противоположных поверхностях какого-либо участка тела. Фиксируют электроды с помощью эластичных бинтов, иногда для лучшего прилегания их к коже поверх электродов помещают мешочки с песком.
Время воздействия 10-15 минут, курс 10-12 процедур.
ЭЛЕКТРОФОРЕЗ
– это метод сочетанного одновременного воздействия с лечебной целью на организм больного постоянного элект. тока и лекарственного вещества, поступающего в организм с током через неповрежденные кожные покровы или слизистые оболочки. Параметра тока, используемые для проведения процедур, такие же, как при гальванизации. Доза лекарственного вещества не превышает его обычной разовой дозы.
Преимущества электрофореза:
-Лекарственное вещество вводится не в молекулярной, а в ионизированной форме, что повышает его фармакологическую активность.
-С помощью электрофореза в поверхностных слоях кожи и в подкожной клетчатки создается депо лекарства, которое постепенно всасывается (до 3 недель).
-Лекарство вводится непосредственно в область патологического очага, создавая в нем достаточно высокую концентрацию.
-При электрофорезе реже возникают отрицательные реакции и меньше выражены побочные действия.
-Лекарство вводится без нарушения кожных покровов.
-Фармакологическое действие лекарственного вещества дополняется комплексом воздействия постоянного эл. тока.
-Лекарственное вещество может быть обратно выведено в прокладку при изменении направления тока.
Методика проведения процедуры: при электрофорезе лекарство вводят с того полюса, полярность которого соответствует знаку активной части лекарственного вещества. Для белковых веществ имеет значение рН растворителя. Растворы обычно готовят на дистиллированной воде с концентрацией препарата 1-5%. Для плохо растворимых в воде веществ в качестве растворителя применяют димексид, глицерин, этиловый спирт.
С одного полюса должен вводиться только один лекарственный препарат.
Процедуру проводят следующим образом: в лекарственном растворе смачивают 1-3 листа фильтровальной бумаги, помещают их на участок тела больного, затем кладут ионообменную мембрану, гидрофильную прокладку, смоченную водой и электрод, и все фиксируют бинтом или мешочком с песком. Длительность сеанса электрофореза 30 минут.
Импульсный ток представляет собой отдельные порции тока, имеющего одно направление при прохождении постоянного тока и меняющего направление при переменном токе.
При воздействии постоянного тока в импульсном режиме клетки во время прохождения импульса возбуждаются, а во время пауз возвращаются в состояние покоя. В зависимости от воздействия на центральную и периферическую нервную систему импульсные токи подразделяют на 2 группы:
центрального и периферического действия.
Электросонтерапия –
это метод электролечения, при котором на головной мозг воздействуют импульсным током прямоугольной формы малой силы (2-3мА), малой длительности (0,2- 2мс) низкой частоты (3-140 Гц).
-снижается эмоциональная возбудимость,
-наблюдается анальгезирующее действие,
-уменьшаются боли в области сердца,
-снимается спазм сосудов,
-улучшаются функциональные возможности миокарда,
-нормализуется АД, основной обмен и функция свертывающей системы крови.
Электросон повышает работоспособность, улучшает настроение, уменьшает утомляемость.
Под воздействием электросонтерапии отмечаются 2 последовательные фазы: тормозная, сопровождающаяся дремотой или сном, и фаза растормаживания – с активацией различных функций центральной нервной системы и систем саморегуляции.
— направленное перемещение ионов в электропроводящем растворе под действием внешнего электрического поля — заряженные частицы перемещаются к аноду или катоду в зависимости от заряда — после начала электрофореза скорость движения сначала увеличивается, пока не уравновесит силу трения, затем частицы продолжают двигаться с постоянной скоростью
Размеры молекул простых и сложных белков, нуклеиновых кислот в растворе по своим размерам соответствуют коллоидным частицам Несут определенный электрический заряд за счет групп, способных к диссоциации Заряд белка зависит от — аминокислотного состава — других групп, способных к диссоциации — рН среды (изменяя, можно обеспечить положительный или отрицательный заряд определенной величины)
Величина заряда Размер белковой молекулы Форма белковой молекулы (чем менее шарообразна, тем больше тормозится движение молекулы) При электрофорезе выделяется тепло – снижается вязкость – увеличивается электрофоретическая подвижность (но и усиление диффузии и размывание зон)
Для стабилизации зон используют: — в жидкой среде – использование градиента плотности — введение в среду твердых носителей ( поддерживающая среда ). Носители имеют пористую или волокнистую структуру, увеличивается разрешающая способность электрофореза. Упрощается визуализация образовавшихся фракций
Недостаток – носители имеют полярные группы (целлюлоза – карбоксильные, агар – сульфогруппы и др.) Они связывают гидроксильные ионы, содержащиеся в буферном растворе. Поверхность носителя приобретает отрицательный заряд, а в растворе накапливаются положительно заряженные ионы. При подключении постоянного тока эти ионы начинают двигаться к катоду, создавая поток жидкости. Такое перемещение электролита в противоположном электрическому току — эндоосмос )
При добавлении к среде NaCl ионы Na + взаимодействуют с отрицательно заряженными группами белка, уменьшается суммарный отрицательный заряд, снижается скорость его движения к аноду – улучшается разделение белковых фракций. Высокоразрешающий электрофорез проводят в буферных системах с большой ионной силой
Свойства разделяемых веществ Суммарный заряд, величина и форма молекул Свойства носителя Структура, эндоосмос Свойства буферного раствора рН, ионная сила Условия проведения электрофореза Температура, сила тока
Электрофорез с подвижной границей – разделение идет в жидкой среде в U -образной кювете. Исследуемый образец помещается в нижнюю часть, одно колено заполняют буферным раствором. Под действием электрического поля заряженные частицы смещаются в сторону противоположно заряженного электрода. О скорости миграции судят по перемещению границы. Результаты фиксируются оптической системой Из-за диффузии границы зон нечеткие
Камера Тизелиуса
Зональный электрофорез в поддерживающей среде – обеспечивает стабильность зон, используется непрерывная буферная система. В оба электродных сосуда вносится один буферный раствор Снижается влияние диффузии и конвекции Проводят на природных (ацетатцеллюлоза, крахмал, агар, агароза) и синтетических носителях Носители имеют структуру -волокнистую (целлюлоза) -пористую (ацетатцеллюлоза, гели) Носители готовятся в виде -пленок (ацетатцеллюлоза) -порошка (полиамид) -блоков (крахмал, агар, агароза, полиакриламид)
адсорбция молекул исследуемого вещества на поверхности раздела фаз Присутствие ионогенных групп в носителях (целлюлоза – карбоксильные, агар – сульфогруппы, стекло – силанольные). Появление обратного тока электролита (электроэндоосмос) и удержание на поверхности носителя некоторого количества разделяемых молекул Испарение электролита – изменение ионной силы и рН буферного раствора Торможение движения молекул в волокнистых и пористых материалах
Специальная бумага пропитывается буферным раствором, наносится образец и подключается ток За ходом электрофореза наблюдают с помощью окрашенного вещества После электрофореза бумагу высушивают и окрашивают Имеет две электродные камеры, между ними – приспособление для поддержания бумаги. Влажная камера уменьшает испарение.
Недостатки метода: — неоднородность по структуре — при волокнистой структуре частицы движутся как в капиллярах (торможение движения) — содержит отрицательно заряженные карбоксильные группы, имеющие отрицательный заряд — испарение жидкости с поверхности вызывает дополнительный поток электролита. Повышается его ионная сила Метод имеет историческое значение, используются другие носители Зональный электрофорез на бумаге
Пленки имеют однородную структуру Диаметр пор –несколько микрон Не содержат ионогенных групп Низкая сорбция белков Может использоваться иммуноэлектрофореза
Преимущества- -достаточно высокая чувствительность -высокая разрешающая способность -небольшие затраты труда и времени -возможность использовать как микрометод (до 3 мкл сыворотки крови)
Пленку смачивают буферным раствором, избыток буфера удаляют, пленку помещают в прибор для электрофореза, наносят пробы (8-16 образцов). При подключении тока пробы мигрируют к аноду. Время разделения – не менее 30 мин. Белки разделяются на 5-6 фракций.
После окончания электрофореза пленка удаляется, подсушивается, фракции белка фиксируются и окрашиваются (пунцовый красный или амидовый черный). Оцениваются методом денситометрии. Метод широко используется в клинико-диагностических исследованиях
Зональный электрофорез в крахмальном геле — сложность приготовления крахмального геля — нестабильность состава геля — недостаточно высокая скорость диффузии — крупные молекулы белков ( Ig M, ЛП) или асимметричные молекулы (фибриноген) не проникают в крахмальный гель
Зональный электрофорез в геле агара и агарозы — электрофорез идет как в жидкой среде, но меньше свободная диффузия — размер пор зависит от концентрации агара и агарозы (1% — поры велики, и могут мигрировать даже крупные молекулы, 2% — нет эффекта молекулярного сита). — агар содержит отрицательно заряженные группы — растворяются при нагревании, застывают при t < 40 º с образовании прозрачной пленки — при разделении сывороточных белков получается 8-11 полос — используя высокоочищенную агарозу, высокую ионную силу буфера получают электрофорез с высоким разрешением — хорошо сочетается с иммунопроявлением и иммунофиксацией
Электрофорез в полиакриламидном геле Синтетический материал с капиллярной структурой Размеры пор могут быть сопоставимы с размерами белковых молекул Подвижность молекул находится в обратной зависимости от среднего размера пор в геле – разделение происходит не только по заряду, но и по размеру. Гель прозрачен, механически прочен, химически устойчив и инертен Можно использовать в широком диапазоне рН, ионной силы, температуры
Варианты : — в однородной буферной системе — в неоднородной (прерывистой) буферной системе — с градиентом пористости — изоэлектрическое фокусирование — изотахофорез — двухмерный электрофорез
Используется неоднородная разделяющая система – образуются зоны, имеющие форму диска Разделение белков проводится в геле с различным размером пор, применяются буферы с разным значением рН – создается прерывистый градиент электрического потенциала и рН
Верхний и нижний сосуды с электродами. Стеклянные трубки заполняются разделяющим гелем, сверху – крупнопористый концентрирующий гель. Проба смешивается со стартовым гелем. В стартовом и концентрирующем геле концентрируются белки В разделительном геле белки разделяются по размеру и заряду молекул
Преимущества: Гель прозрачен, при высыхании дает тонкую прозрачную пленку После окрашивания возможна количественная оценка фракций
Количественная оценка фракций проводится денситометрически
В качестве камеры используется тонкостенный кварцевый капилляр (внутренний диаметр <100 мкм) Высокое напряжение электрического поля Продолжительность разделения – 5-30 мин
Разделение происходит за счет движения под действием электрического поля и тока жидкости, образующейся в результате эндоосмоса и направленной в противоположном направлении Стенка капилляра имеет отрицательный заряд, буфер заряжен положительно Направление движения белков определяется соотношением: электроосмотическая подвижность превышает скорость миграции под действием внешнего электрического поля. В результате белки сыворотки крови мигрируют к отрицательно заряженному катоду
Оборудование, предназначенное для разделения образцов анализируемой смеси на компоненты, посредством взаимодействия пробы с электрическим полем внутри тонкого кварцевого капилляра. Электрическое поле образуется с помощью подачи высокого напряжения на электролитный буфер и обеспечивает движение ионов. Движение избыточного количества катионов создает электроосмотический поток Капиллярный электрофорез (CE) Анод + Катод —
Text Разделение аналитов основано на их распределении по величине электрического заряда. Sample applied Voltage applied Буфер Буфер Ve КАТОД + ve АНОД Капилляр Детектор дейтерия 14kV (DC) Unit Основы капиллярного электрофореза Миграция аналита по капилляру от анода к катоду через детектор Разделение смеси основано на разнице заряда и скорости прохождения аналитов через детектор. Подача напряжения Подача пробы
Регистрация – детекторы УФ излучения, лазерные нефелометры, спектрофлуориметры Преимущества – — высокое разрешение — высокая воспроизводимость — высокая продуктивность (более 100 образцов в час)
СОВРЕМЕННЫЙ КАПИЛЛЯРНЫЙ ЭЛЕКТРОФОРЕЗ Знакомьтесь – V8 – новое решение от компании Helena
Через некоторое время после начала разделения макромолекул достигается распределение компонентов смеси, и ширина зон в дальнейшем не изменяется Изоэлектрическое фокусирование Изотахофорез
Метод разделения веществ, обладающих амфотерными свойствами, в соответствии с значением их изоэлектрической точки в среде с градиентом рН. Молекулы белков мигрируют в градиенте рН, пока не достигнут положения где заряд = 0. В результате молекулы, имеющие одинаковые ИЭТ, концентрируются в узкой зоне Используются амфолиты с определенным диапазоном рН. Ионы амфолита перемещаются до того места, где рН соответствует их ИЭТ Градиент рН можно получить: При наслоении буферных растворов с различными значениями рн — За счет создания градиента температуры
pH 10 9 8 7 6 5 4 3 pH 10 9 8 7 6 5 4 3 pH 10 9 8 7 6 5 4 3 Метод разделения макромолекул, основанный на их миграции в градиенте значений рН под действием постоянного электрического поля. pI- изоэлектрическая точка, в которой белок имеет общий заряд равный нулю Белки могут распадаться имея разницу всего лишь в несколько сотых единицы- pH IEF не требователен к нанесению образца в ограниченный участок для оптимального разделения Возможность нанесения разведенных образцов многократно Концентрация образца предельно низкая в сравнении с другими электрофоретическими методами Нет денатурации белков, которая может препятствовать последующим действиям, таким как окрашивание или иммунопреципитации
При использование градиента плотности разделение проводят в стеклянной вертикальной колонке. Амфолиты наслаивают друг на друга. Обеспечивается получение очень узких полос. После отключения тока зоны могут расширяться за счет диффузии В основном проводится в ПААГ
Метод электрофореза, при котором молекулы под действием электрического поля разделяются в соответствии с зарядами, образуя узкие зоны, которые затем движутся с одинаковой скоростью, располагаясь друг за другом в соответствии с величиной подвижности каждой зоны. Наблюдается автоматическое повышение резкости границ между зонами (эффект Кольрауша) Можно проводить в свободном электролите, на полосках из ацетатцеллюлозы, в ПААГ Разрешающая способность сопоставима с диск-электрофорезом или изоэлектрофокусированием
Окрашивание специфическими красителями с последующей фотометрией Регистрация поглощения УФ-лучей и флуоресценции Иммунохимические методы Регистрация радиоактивности предварительно меченных молекул
Окрашиваются бумага, ацетат целлюлозы, агар, агароза, ПААГ Красители образуют комплексы с молекулами, но вымываются из среды Одновременно с окрашиванием проводится фиксация Оценка – с помощью денситометрического сканирования. Измеряется интенсивность прошедшего или отраженного света, результат регистрируется в виде кривой
ДЕНСИТОМЕТР
SAS 1plus Helena – автоматическое нанесение, концентрирование и разделение образцов на агарозном геле SAS 2 Helena – автоматическая обработка гелей: регулируемая окраска, обесцвечивание и сушка
Регистрация поглощенного УФ света, проходящего через электрофореграммы на твердых прозрачных носителях Оптимальная длина волны для белковых фракций 280 нм Экстинкция зависит от содержания в белках тир и три Чувствительность метода до 1 мкг белка Облучение белков УФ светом (280 нм) вызывает их флуоресценцию, измерение проводят при 340 нм Чувствительность 0,5 мкг белка
Взаимодействие белков (антигенов) с со специфическими к ним антителами вызывает образование преципитата Иммуноэлектрофорез – комбинация простого электрофореза в геле и последующей иммунодиффузии Позволяет обнаруживать индивидуальные белки
Увеличивает чувствительность метода Предварительно молекулы метятся радиоактивной меткой Радиоактивность обнаруживается при сканировании высушинных гелей с помощью счетчика
Ошибка при расчете объема исследуемого образца – избыточное количество приводит к искажению электрофореграммы Сыворотка крови содержит белки, отличающие по содержанию в десятки раз Избыточная концентрация белка искажает результаты
Ошибки при подготовке образцов для исследования – если использована плазма, а не сыворотка крови – появление дополнительной фракции между β — и γ — глобулинами при исследовании гемолизированной сыворотки – усиление β — фракции учитывать применение некоторых лекарственных препаратов. Электрофоретическая подвижность альбумина, связанного с лекарственным препаратом может отличаться от обычной
Свойства буферных растворов при близости рН к ИЭТ миграция замедлена повторное использование буфера может привести к изменению рН при хранении – изменение рН из-за жизнедеятельности микроорганизмов неправильно подобранная ионная сила (чрезмерно высокая ионная сила приводит к замедлению миграции
Ошибки, связанные с электрической цепью отсутствие напряжения – отсутствие миграции неправильная полярность – миграция в противоположную сторону перепады напряжения — искажение электрофоретической картины недостаточно высокое напряжение – слишком медленная миграция слишком высокое напряжение — искажение электрофореграммы
Ошибка при проведении Возможная проблема Отсутствие напряжения в электрической сети Отсутствие миграции белков Несоблюдение полярности на электродах Отсутствие миграции белков Перепады напряжения Искажение вида белковых фракций Низкое напряжение Слишком медленная миграция Несоответствие рН буфера Отсутствие миграции белков Малый заряд молекулы Слишком медленная миграция Величина рН низкая или высокая Преципитация на матрице
Величина рН низкая или высокая Преципитация на матрице Высокая ионная сила буфера Слишком медленная миграция Очень высокая концентрация аналита Наличие непрокрашенных участков Высокая молекулярная масса аналита Слишком медленная миграция Размер молекул аналита превышает размеры пор матрицы Слишком тонкие и интенсивные полосы на электрофореграмме Перегревание или высушивание матрицы Деформация электрофореграмм по краям матрицы Наличие солей в образце Размытость стартового края полос
Определение типа электрофореграммы может подтвердить предполагаемый диагноз, выявить скрытую патологию, следить за ходом лечения Абсолютным показанием для исследования электрофореграммы является подозрение на миеломную болезнь, иммунодефицит. Может быть полезным -для диагностики заболеваний печени, нефротического синдрома, злокачественных новообразований, коллагенозов — при контроле течения заболеваний, при которых нарушается белковый состав сыворотки крови — при скрининге врожденного или приобретенного дефицита или аномалии белков — при снижении содержания общего белка < 60 г/л или повышении > 85 г/л, при снижении концентрации альбумина < 35 г/л и при увеличении СОЭ > 25 мм/час
спасибо за внимание
Иммунофиксация – качественный метод, позволяющий установить природу моноклонального компонента Методы определения – гелевый электрофорез на агарозе и капиллярный (иммунозамещение) Дополнительные полосы, которые обнаруживаются в гамма зонах, могут соответствовать моноклональным белкам, что указывает на наличие гаммапатий. В основе идентификации лежит реакция образования комплекса антиген-антитело, при добавлении к сыворотке пациента моноспецифических антител к IgG, IgM, IgA, и -легким цепям. Иммунофиксация
Выявление моноклональных гаммапатий Иммунофиксация в гелевом электрофорезе На агарозном геле разделение белков IFE в сыворотке происходит в соответствии с их зарядом. Затем белки инкубируют с моноклональными антисыворотками, промывают и окрашивают, проявившиеся иммунопреципитаты качественно интерпретируют. Выделение и выявление моноклональных гаммапатий методом гелевого электрофореза. IT
IT 1. Антисыворотка добавляется непосредственно к пробе. Если есть антитела, то происходит образование комплекса Антиген-Антитело. 2. Антисыворотка передвигается по капилляру к катоду в соответствии с зарядом. Электрофоретическая подвижность комплекса Антиген-Антитело, значительно ниже. Комплекс антисыворотка-антитело детектируется при прохождении от анода к катоду. Моноклоны удаляются (замещаются) из электрофореграммы. Иммунотипирование в капиллярном электрофорезе Выявление моноклональных гаммапатий 3. Катод — Иммунотипирование в капиллярном электрофорезе Выявление моноклональных гаммапатий
IgG IgA IgM lambda Оригинальная электрофореграмма белка сыворотки kappa IT Можно сделать следующий вывод : IgG kappa При иммунотипировании происходит наложение электрофореграммы с добавлением антисыворотки на электрофореграмму без добавления антисыворотки. При наложении электрофореграмм, после добавления трех антисывороток, происходит почти полное совпадение контура без исчезновения пика в области гамма-зоны. Из-за удаления (замещения) гамма глобулинов в течении проведения капиллярного электрофореза два наложения на оригинальную электрофореграмму будут показывать исчезновение пика из области гамма-зоны, те комплекс Аг-Ат будет перемещен в другую не видимую нами зону. Выявление моноклональных гаммапатий Иммунотипирование в капиллярном электрофорезе
Группы белков Что определяется Методы Общий белок Общие свойства всех белков Азотометрические Спектрофотометрические Фотометрические Рефрактометрические и т.д. Белковые фракции Группы белков, близких по физико-химическим свойствам Электрофорез Хроматография Осаждение Гельфильтрация Седиментация Индивидуальные белки Индивидуальная иммунологическая специфичность белка Иммунохимические (иммуноферментные, нефелометрия, иммунодиффузия и т.д.) Электрофоретический метод является полуколичественным и не подлежит метрологическому контролю
Фракции Содержание в сыворотке % г/л Альбумин 52-65 35-50 α 1 -глобулин 2-4,5 1-3 α 2 -глобулин 10-15 6-9 β -глобулин 6-13 4-9 γ -глобулин 10-19 6-13
Выявляется двойная полоса в зоне альбумина Может быть генетически обусловленной или транзиторной Причины: присутствие препарата, связанного с альбумином, заболевания поджелудочной железы (лизис ферментами )
Врожденная патология (встречается редко) Сочетается с гиперглобулинемией
Гипоальбуминемия Белковое голодание Нарушение всасывания в ЖКТ Нарушение синтеза белка Потери белка с мочой Повышение катаболизма белков
Снижение α 1 –глобулинов -заболевания печени -массивные кровопотери -нарушение питания дефиците α 1 –антитрипсина
Увеличение α 1 –глобулинов -острые воспалительные заболевания (увеличение концентрации α 1 –антитрипсина, орозомукоида)
Снижение α 2 –глобулинов Нарушение питания Патология печени Внутрисосудистый гемолиз Увеличение α 2 –глобулинов (преимущественно за счет гаптоглобина и α 2 -макроглобулина) Воспаление (сочетается с увеличением α 1 -глобулинов) Нефротический синдром
Уменьшение β — глобулинов -патология печени -дефицит С3-компонента комплемента Увеличение β — глобулинов Увеличение β — глобулинов -Гемолизированная сыворотка ЖДА (за счет трасферрина) повышение С3-компонента комплемента
Слияние β — и γ — фракции (за счет увеличения поликлонального Ig A )
Физиологическая – у новорожденных Первичный гуморальный иммунодефицит Вторичный – при лечении глюкокортикоидами, иммунодепрессантами, химиотерапии, радиотерапии
Диффузное усиление зоны γ — глобулинов (инфекционные заболевания печени, СПИД, аутоиммунные заболевания)
Появление нескольких полос (синтез в организме одновременно нескольких типов антител к различным антигенам) Накопление антител при системных ревматических заболеваниях
Появление узкой гомогенной полосы У пожилых лиц обнаруживается бессимптомная гаммапатия Встречается миеломе, лимфоме, хроническом лимфолейкозе, болезни Вальденстрема
Появление дополнительной полосы может в присутствии фибриногена (необходимо повторное проведение электрофореза после обработки тромбином)
Определение фракций белков в моче должно проводиться после концентрирования и обессоливания образца Метод валидирован проф. Mussap, Genoa ITALY. Чувствительность центрифужного метода 20mg/L Чувствительность колоночного метода 20mg/L
Презентация на тему: Применение электрофореза в клинике
Основные клинические ситуации, в которых рекомендуется электрофорез белков сыворотки:
Абсолютное показание, необходимое для установления диагноза (никакая другая процедура не обеспечит получение эквивалентной информации также быстро и доступно) –
парапротеинемии, гемоглобинопатии, агаммаглоблинемии.
Клинически полезное в сочетании с другими исследованиями
– заболевания печени, нефротический синдром, злокачественные заболевания, коллагенозы.
Наблюдение и лечение заболевания, при которых происходят существенные нарушения в составе белков плазмы (необходимо использовать постоянно одну и ту же методику).
Скрининг. При популяционных обследованиях на выявление аномальных белков или дефицита отдельных белков плазмы.
N.B! Метод должен обеспечить разделение пяти основных фракций: альбумина, α1-, α2-, β- и γ-глобулина, а также небольшой зоны преальбумина.
Анализ электрофореграмм:
Анализ электрофореграмм:Для выявления разделенных белков применяют разнообразные методы.
Прямое исследование методами ультрафиолетовой и инфракрасной спектроскопии (денситометрия)
Осаждение неспецифическим агентом с
последующим окрашиванием образца
Специфические реакции фермент-субстрат,
приводящие к образованию окрашенного нерастворимого продукта.
Осаждение макромолекул при помощи
специфических антител. Образующийся нерастворимый преципитат исследуется либо прямым способом либо последующим окрашиванием красителем (иммуноэлектрофорез).
Иммуноэлектрофорез
Это двухэтапная процедура, при помощи которой макромолекулы (обычно белки) вначале разделяются с помощью электрофореза, а затем последовательно взаимодействуют с соответствующей антисывороткой, присутствующей в среде-носителе.
Классический вариант – на 1 этапе производят разделение белков в забуференном агаровом или агарозном геле, а затем латерально, параллельно разделенным компонентам прорезают щели, которые заполняют антисывороткой. Выдерживают в течение некоторого времени для диффузии компонентов (обычно ночь). Взаимодействие антиген- антитело обнаруживается по дугам преципитации. Метод позволяет выявить антигенный состав сложной смеси белков и идентифицировать отдельные компоненты смеси
с помощью моноспецифических антисывороток.
Вклинике используется для типирования парапротеинов
сыворотки и выявления белков Бенс-Джонса.
Схема иммуноэлектрофореза
Ракетный электрофорез
(электроиммунодиффузия)
Используют гель, содержащий АТ (как в иммунодиффузии). Вдоль кромки слоя геля 
делают ряд лунок, в которые помещают исследуемый материал. Затем проводят ЭФ → в
слое геля создается электрическое поле → АГ входят в гель. Они обычно движутся быстрее чем АТ и в одном направлении. Высота «ракеты», образующейся в ходе реакции прямо пропорциональна концентрации АГ, она измеряется от верхней границы лунки до высоты
пика. Метод удобен, надежен и прост.
Используется для определения альфа- фетопротеина в амниотической жидкости.
Схема ракетного электрофореза
Встречный электрофорез
ВИЭФ предназначен для обнаружения и индентификации преципитирующих систем АГ-АТ 
при условии, что АГ обладает электрофоретической подвижностью, отличной от той, которой обладают
иммуноглобулины.
АГ и АТ движутся навстречу друг другу в слое геля, в месте встречи – накопление преципитата.
Результат через 1-3 часа, чувствительность высокая.
Встречный электрофорез
Капиллярный электрофорез
Капиллярный электрофорезИспользуют заполненные электролитом (буфером) кварцевые капилляры с внутренним диаметром 25-200 мкм и длиной 10- 100 см. К концам капилляров подается высокое напряжение – 10 000 – 30 000 в. Под действием напряжения возле стенок капилляра возникает отрицательное поле, в середине – положительное (за счет того, что кварц обладает положительно заряженными группами и под действием
напряжения там происходит поляризация электролита). Под влиянием электростатического поля в капилляре создается электроосмотический поток, направленный к катоду. С ним к катоду перемещаются компоненты смеси различных веществ с различной скоростью → разделение → детекция (фотометр, флуориметр, рефрактометр и т.д._ Преимущества: очень высокая эффективность разделения (белков, пептидов, витаминов, лекарственных препаратов), не требует 
прецизионных устройств.
